국내에서 생산한 천잠 누에고치의 일반 특성을 고찰한 결과 국내산 천잠 누에고치는 연두색 고치를 지으며, 층상구조를 가지고 있었다. 천잠 누에고치는 외피는 연두색이었고 내피는 흰색을 나타내어 천잠 누에고치의 색상을 나타내는 색소 성분은 외피에 존재하였다. 천잠 누에고치는 고치층의 무게는 0.528 g, 견층두께는 0.424 mm로 측정되었다. 천잠 누에고치를 구성하는 주요 아미노산은 알라닌, 글리신, 세린, 아스파르트산, 티로산, 아르기닌 순으로 나타났으며, X-선 회절분석 결과 $2{\theta}=16.8^{\circ}$, $20.4^{\circ}$ 부근에서 강한 회절 피크와 $2{\theta}=15.0^{\circ}$, $24.3^{\circ}$, $30.0^{\circ}$ 부근에서 날카로운 회절 피크를 나타내었다. 천잠 누에고치는 폭이 $20{\mu}m$ 정도인 섬유가 적층된 구조를 가지고 있으며, 고치의 안쪽과 바깥쪽에 흰색 결정을 가지고 있었다. 천잠 누에고치의 최대 열분해 온도는 $370^{\circ}C$ 부근이었다. 이러한 천잠 누에고치에 대한 연구 결과는 향후 천잠 누에고치를 이용한 소재 개발의 기초 자료로 활용될 수 있을 것으로 기대한다.
천잠 견단백질을 이용한 비의류용 소재개발을 위한 기초 연구의 일환으로 천잠 가수분해 견단백질 분말을 제조하여 그 구조 및 별 특성을 살펴보고 중금속 함량을 분석하였다. 1. 천잠 고치를 가수분해하여 제조한 분말의 평균분자량은 430 정도였으며 아미노산 조성 분석 결과 일반적인 천잠 견피브로인의 조성과 유사하였다. 2. 천잠 분말의 X-선 회절 분석 결과 $2{\theta}=20.34^{\circ}$ 부근과 $31.5^{\circ}$ 부근에서 강한 회절 피크를 보였으며 원이색분석 결과 220nm의 피크와 215nm의 shoulder를 나타내어 ${\alpha}-helix$와 ${\beta}-sheet$ 구조임을 알 수 있었다. 3. 시차열분석 및 열중량분석 결과 천잠 가수분해 분말은 $250^{\circ}C$ 부근에서 열분해 흡열피크를 보였으며 $270^{\circ}C$ 부근에서 열분해에 의한 최대 중량감소가 나타났다. 4. 천잠 분말에서는 수은, 비소 등 인체 독성이 강한 중금속을 관찰할 수 없었으므로 기능성 소재 개발을 위한 재료로 천잠 가수분해 분말을 활용할 수 있을 것으로 사료된다.
분리.정제한 전잠 vitellin의 분자량추정, 당 및 지질성분의 존재유무, 전기현미경적인 형태 및 크기, 아미노산 조성, 내열성 및 여러 가지 특성을 조사하였다. 1. 분리.정제된 천잠의 vitellin은 전기영동상의 이동도가 다른 large 및 small subunit로 되어 있다. 2. 천잠 vitellin의 분자량은 약 450,000d로 추정되었고, large subunit와 small subunit는 각각 174,000d와 44,000d로 추정되었다. 3. Coomassie brilliant blue, sudan black B 및 PAS 염색에 의해서 천잠의 vitellin은 glycolipoprotein으로 동정되었으며, 2개의 subunit도 당과 지질성분을 가지고 있었다. 4. 천잠 vitellin의 지질성분 중에는 가잠이나 Eri-참에 비하여 매우 다양한 종류들이 검출되며 특히 포화지방이라고 추정되는 물질도 있었다. 5. 천잠 vitellin의 단백질과 당성분은 7$0^{\circ}C$에 60분까지는 안전성을 보였으나, 같은 조건에서 지질성분은 검출되지 않았다. 6. 천잠 vitellin의 아미노산 성분 중 다른 곤충에서는 함량이 적은 glycine이 현격히 많았고 기타 성분의 함량은 가잠이나 Eri-잠과 같은 경향이었다. 7. 천잠의 vitellin은 직경이 14$\pm$0.8nm의 균일한 구형이었다.
천잠의 연중 실내사육법을 확립하고자 천잠의 의잠절식, 수시부화 및 최청법을 조사하였다. 천잠의 일시소잠을 위하여 의잠을 절식 실험한 결과, $25^{\circ}C$ 와 $5^{\circ}C$ 에서 1일간 보호한 4령기잠기 생존율이 각각 83.3% 및 96.0% 로 의잠 절식기간의 보호온도가 낮을수록 생존율이 높았다. 연중 다회사육을 위해 수시부화실험을 한 결과, 천잠알을 2개월 냉장할 경우에는 $5^{\circ}C$가 좋았으나 6개월 이상 냉장하여 사용할 경우에는 $2.5^{\circ}C$또는 $0^{\circ}C$에 보호하는 것이 실용부화비율이 높은 것으로 나타났다. 또한 일시부화에 적합한 천잠알의 보호조건을 조사한 결과, 관행적 최청방법 ($25^{\circ}C$ 보호)으로는 5-6일 걸리는 천잠알의 부화가 $15^{\circ}C$ 예비최청과 암최청 방법의 도입으로 2일간에 80% 가 부화하는 좋은 성적을 얻을 수 있었다.
천잠의 사육환경을 구명하기 위하여 사료자원, 기상환경 및 사육방법등에 관하여 조사한 결과를 다음과 같이 요약한다. 1. 천잠의 실내사육에 있어 사육온도는 항온보다 변온이 좋은 편이며, 치잠기 25~26$^{\circ}C$, 장잠기 22~23$^{\circ}C$ 범위가, 사육습도는 치잠기 80~90%, 장잠기 60~70% 범위가 적당한 것으로 나타났다. 2. 천잠사육에 있어 광조기는 유충의 성장에 미치는 영향이 크지 아니하였다. 3. 귀잠시기는 빠른것이 늦은 것보다 유충시기에 단축되는 경향이 있으며 질도 양호한 것으로 나타났다. 4. 사료수종은 상수리나무가 밤나무보다 더 적합한 것으로 나타났다. 야생수보다 재배수가 사육성육이 더 좋았다. 5. 천잠을 옥외사육으로 전환하는 시기는 빠를수럭 작황이 불안정해 지는 경향을 보였다.
천잠 견단백질 가수분해 분말의 생리활성을 검토하여 비의류용 소재개발을 위한 기초 자료로 삼기 위하여 우선 항산화 및 항당뇨 활성을 탐색하였다. 1. 천잠 고치를 가수분해하여 제조한 분말은 항산화제인 비타민 C 대비 75% 내외의 항산화 활성을 나타내었다. 2. 천잠 견단백질 가수분해 분말은 혈당강하 효과도 나타내어 기능성 식품소재 적용 가능 물질로 사료된다.
면역 유도된 천잠(Antheraea yamamai) 유충에서 cecropin-A 유전자를 분리하였고 이 유전자를 Ay-CecA로 명명하였다. 전체 Ay-CecA cDNA 크기는 419 bp로 64개의 아미노산 잔기를 인코딩하는 195 bp ORF로 구성되어 있다. 천잠 CecA 유전자는 22개 잔기의 signal peptide, 4개 잔기의 propeptide 및 항균활성을 갖는 37개 잔기로 구성된 성숙 단백질(mature protein) 영역으로 구성되고 예상 분자량은 4046.81 Da으로 산출되었다. 천잠 CecA의 아미노산 서열은 다른 나비목 곤충에서 분리된 cecropin와 매우 높은 상동성(62 ~ 78%)을 나타냈다. Ay-CecA 유전자의 C말단에 기존에 보고된 곤충의 cecropin에서와 동일하게 C말단 아미드화를 위한 glycine 잔기가 존재하고 있다. 이 펩타이드의 항균활성을 검정하기 위해서 대장균 발현 시스템을 이용하여 활성이 있는 재조합 Ay-CecA 발현에 성공하였다. 발현 기주인 대장균에 대한 재조합 CecA 독성 중화를 위해서 불용성 단백질인 ketosteroid isomerase(KSI) 유전자를 CecA 유전자와 융합하였다. 융합 CecA-KSI 단백질은 대부분 불용성 단백질로 발현되었다. 발현된 융합단백질은 Ni-NTA immobilized metal affinity chromatography(IMAC)에 의해서 정제하였으며 CNBr 반응을 통하여 재조합 CecA를 절단하여 용출하였다. 최종적으로 양이온 교환 chromatography 과정을 통하여 CecA를 순수 정제하였다. 정제된 재조합 Ay-CecA는 그람음성균인 E. cori ML 35, Klebsiella pneumonia 및 Pseudomonas aeruginosa에 대해 매우 높은 항균활성을 나타냈었다. 따라서 본 연구 결과, 높은 항균활성 지닌 CecA는 천잠의 면역 반응에서 중요한 역할을 담당할 것으로 사료된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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