해양 세균을 이용하여 규조류, Chaetoceros spp. 적조의 방제기술 개발을 위한 목적의 일환으로 우리나라 연안에서 분리된 Alteromonas sp. SR-14가 여러 가지 조건하에서 Chaetoceros calcitrans의 증식에 미치는 영향을 조사하였으며 그 결과를 요약하면 다음과 같다. Alteromonas sp. SR-14를 C. calcitrans와 혼합배양하였을 때 조류 증식 저해활성은 $20^{\circ}C$에서는 강하였으나 $25^{\circ}C$ 이상에서는 활성이 없었다. 그리고 C. calcitrans의 초기농도가 약 $10^4$ cells/ml이었을 때 Alteromonas sp. SR-14를 10 cells/ml 이하만 접종하여도 증식을 저해하였다. Alteromonas sp. SR-14는 대수기의 C. calcitrans에 대해서 저해 활성이 강하였고, 무기 영양염의 첨가나 1,300$\~$4,600 lux에서 조도변화 및 200 rpm으로의 진탕 등의 배양조건은 세균의 조류증식 저해활성에 영향을 미치지 않았다.
목적 : 이 연구는 봉독의 주요 성분인 낮은 농도의 melittin이 in vitro에서 세포자멸사 관련 단백질과 전립 선암세포 PC-3 증식 관련 수용체의 발현 조절을 통하여 세포자멸사(Apoptosis)를 유도하는지 in vivo에서 또한 전립선 암세포주인 PC-3 세포의 성장을 억제하는지 살펴보고자 하였다. 방법 : Melittin을 처리한 후 전립선암세포 PC-3의 성장억제를 관찰하기 위해 WST-l assay와 morphology analysis를 시행하였고, 세포자멸사 관련 MAP kinase 계열의 대표인 ERK1/2과 전립선암세포 증식관련 수용체인 PDGF-BB receptor ${\beta}$의 활성 변화 관찰에는 western blot analysis 및 Immunofluorescence Staining , Confocal immunocytochemistry를 시행하였으며, 전립암세포의 종양형성에는 흉선을 제거한 쥐에 Tumorigenecity study를 시행하였다. 결과 : 1. PC-3 세포에서 Melittin 처리 후 세포증식이 억제되었고 세포의 형태는 세포자멸사의 특징을 나타내었다. 2. PC-3 세포에서 Melittin 처리 후 ERKl/2과 PDGF-BB receptor ${\beta}$의 활성이 억제되었다. 3. PC-3 세포에서 Melittin과 AG1296을 함께 투여시 PDGF-BB receptor ${\beta}$ 활성억제의 상승효과가 나타났다. 4. 흉선 제거 후 전립선암세포주를 이식한 쥐에서 Melittin을 피내로 주입한 결과 전립선암의 크기와 무게가 유의하게 감소하였다. 결론 : 이상의 결과는 Melittin이 ERKl/2과 PDGF BB receptor ${\beta}$의 활성 억제를 통하여 인간 전립선암세포주인 PC-3의 세포자멸사를 유발함으로써 증식억제 효과가 있음을 입증한 것이며, 이를 재확인한 생처 연구에서의 긍정적인 결과는 향후 Melittin의 전립선암 예방과 치료에 대한 효과적인 치료제 개발에 초석이 될 것으로 기대된다.
본 연구에서는 마를 건조 후 분말화하여 실험에 사용하였으며, 건조 마 분말에 대한 생리활성에 대한 연구로 건조된 마를 유기용매로 추출하여 마 추출물과 분획물들의 $H_2O_2$에 의해 유도된 산화적 스트레스 및 인체 암세포(HT1080 인체 섬유육종세포, HT-29 인체 결장암세포)에 대한 증식 억제 효과에 대해 검토하고자 하였다. 마는 항비만, 항변비, 항돌연변이, 혈당 및 혈중 콜레스테롤 감소 등의 활성이 있어 건강식품으로 알려져 있다. $H_2O_2$에 의해 유도된 산화적 스트레스 저해효과를 알아보기 위하여 DCFH-DA assay를 행하였다. 건조 마 A+M 추출물을 농도별로 인체 섬유육종세포(HT1080)에 처리하였을 때 농도 의존적으로 세포 내 활성산소종을 크게 억제시켰다. 각 분획물들 중 85% aq. MeOH 분획물은 다른 분획물과 비교하여 높은 지질 과산화물 생성 억제 효과를 보였다. 인체 암세포에 대한 증식 억제 실험에서 A+M 및 MeOH 추출물은 농도 의존적으로 인체 섬유육종 및 결장암세포의 증식을 억제하였다. 마 추출물로부터 얻어진 n-hexane, 85% aq. MeOH 및 n-butanol (n-BuOH) 분획물들은 첨가농도 0.5 mg/ml 이상 처리했을 때 이들 두 암세포의 증식을 유의적으로 억제하였다(p<0.05). 본 연구 결과로 부터 건조 마의 암세포 증식 억제 효과는 마의 A+M 추출물이 MeOH 추출물에 비해 높았고, 분획물들의 경우에는 water 분획물을 제외한 분획물들의 암세포 억제 효과가 높았다. 특히 85% aq. MeOH 분획물은 인체 암세포 증식 억제 효과뿐만 아니라 세포 내 활성산소종 감소시키는 효과가 높아 이들 분획물에 활성물질이 있을 것으로 추정된다.
신생혈관생성은 여러 신생혈관 생성 인자들이 포함되는 중요한 과정이며, 특히 이 과정에서는 섬유아세포증식인자(FGF-2)는 세포의 증식률과 미세관 형성을 촉진하기 때문에 중요한 신생혈관 생성인자로 여겨진다. 최근 연구에 따르면 해조류에서 추출되는 후코이단 다당류 물질이 섬유아세포 증식인자2에 의한 혈관내피세포의 미세관형성을 더욱 촉진한다고 보고하였다. 그러나 섬유아세포 증식인자와 후코이단 복합처리에 따른 신생혈관생성 활성에 대한 분자적 메카니즘은 아직 연구가 부족하다. 따라서 본 연구에서는 신생혈관생성 활성을 알아보기 위하여 섬유아세포 증식인자와 후코이단 물질의 복합처리에 따른 세포의 증식과 미세관형성률 그리고 세포의 이동율을 측정하였다. 또한 이들의 신생혈관 생성 활성에 관련된 인자를 탐색하기 위하여 VEGF-A, ICAM-1, MMP9, 그리고 ICAM-1 유전자를 연전사 중합연쇄반응으로 평가하였다. 본 연구의 결과에서는 후코이단과 섬유아세포 증식인자 복합처리는 혈관내피세포의 성장률, 미세관 형성률 그리고 세포의 이동률을 촉진하고, 이 과정에서 신생혈관생성 기능과 관련된 STAT3, VEGF-A, MMP9 그리고 ICAM-1의 유전자 발현을 촉진함으로 신생혈관 생성활성이 나타나는 것으로 보여진다. 그러나 이러한 유전자 발현이 fucoidan/FGF2에 의한 angiogenic 활성 촉진에 직접적인 영향을 미치는 지에 대한 추가적인 연구가 이루어져야 할 것으로 생각된다.
스피루리나를 세포벽 가수분해효소와 단백질 가수분해효소로 처리하여 조제한 스피루리나 가수분해물(enzymatic hydrolysate of spirulina, EHS)의 생리활성을 조사하였다. 효소처리 가수분해물의 유산균 증식효과, 항산화능, 암세포 증식저해 활성, 항혈전 활성을 분석한 결과 EHS는 유산균 증식활성과 항산화능에 큰 영향을 미치지 않았으며, 자궁경부암세포(HeLa)에 대해 1.42 mg/L의 농도에서 15% 미만의 증식저해효과를 나타내었다. 반면 항혈전 활성을 공통 경로(common pathway), 내인성 경로(intrinsic pathway), 외인성 경로(extrinsic pathway)로 구분하여 측정한 결과, 공통경로, 내인성 경로와 유사한 항혈전 활성이 있음을 확인하였다. 공통 경로를 thrombin time assay로 측정한 결과 EHS의 농도가 100 mg/L일 때 155.6초를 나타내었다. 내인성 경로는 activated partial thromboplastin time assay로 측정하였고, EHS의 농도가 1000 mg/L일 때 95.8초를 나타내었다. 외인성 경로를 prothrombin time assay로 측정한 결과 EHS의 농도가 1000 mg/L일 때 10.6초를 나타내었다. 결과적으로 스피루리나 효소가수분해물(EHS)이 항혈전경로 중 공통경로와 내인성 경로에 활성이 있음을 알 수 있었으며, 이를 토대로 신규의 항혈전 기능성 원료로 개발될 수 있을 것으로기대된다.
부분동결의 유효성을 미생물학적인 측면에서 해명하고자 저온에서 부패의 주역을 담당하고 있는 몇종의 저온세균을 공시균으로 하여서 고등어육액즙에 대한 부패활성을 동일액상이면서 빙점부근에서의 근소한 온도차($0^{\circ}C$와 $-3^{\circ}C$ 과냉각) 및 $-3^{\circ}C$동일 온도에서 상변화(액상-고상)를 중심으로 균의 증식, 사멸, 부패활성 및 K값의 변화를 검토한 결과는 다음과 같다. (1) $25^{\circ}C$ 및 $0^{\circ}C$ 저장에서는 공시균 전부 강한 증식력 및 부패활성을 나타내었으나, 동일액상이면서 $0^{\circ}C$와 근소한 온도차인 $-3^{\circ}C$ 과냉각에서는 공시균 중 Pseudomonas III/IV-NH형의 증식력 및 부패활성이 현저히 억제되었으며, Moraxella 및 F/C도 실험기간을 통하여 점차 감소하는 경향을 나타내었고, 부패활성은 전혀 관찰되지 않았다. (2) $-3^{\circ}C$ 과냉각(액상)과 동일온도이면서 고상인 $-3^{\circ}C$ 동결에서는 전공시균의 증식 및 부패활성이 전혀 관찰되지 않았으며, 저장기간을 통하여 생균수가 감소하는 경향을 나타내었다. (3) 동일액상이면서 $0^{\circ}C$와 근소한 온도차인 $-3^{\circ}C$ 과냉각에서 K값의 증가가 억제되었으며, 더욱 $-3^{\circ}C$의 동온이상인 $-3^{\circ}C$동결(고상)에서는 상의 변화로 인하여 K값의 증가가 현저히 억제되었다. 이상의 결과로부터, $0^{\circ}C$와의 근소한 온도차 및 액상에서 친상으로의 상의 변화에 의한 효소황성의 저하(K값) 및 저온세균의 증식과 부패활성의 억제가 부분동결의 유효성의 큰 요인이 되리라 추측된다.
본 연구에서는 서리태 에탄올 추출물의 항산화 활성을 측정하고, 총 폴리페놀 및 총 플라보노이드 함량을 분석하였으며, MTT 및 SRB assay를 통한 암세포 증식 억제 활성을 측정하였다. 서리태 에탄올 추출물의 DPPH 및 ABTS 라디칼에 대한 전자공여능은 500 ${\mu}g$/assay의 농도에서 각각 63.75%와 87.68%로 나타났고, $IC_{50}$ 값은 각각 385.39 ${\mu}g$/assay와 209.39 ${\mu}g$/assay로 나타났으며, 항산화 활성 물질로 알려져 있는 총 폴리페놀 함량과 총 플라보노이드 함량은 각각 1.65 mg/g과 0.59 mg/g으로 분석되었다. 또한 서리태 에탄올 추출물(800 ppm)은 MTT assay에서 인체 폐암세포인 A-549에 대해 76.48%의 암세포 증식 억제 활성을 나타내었고, SRB assay에서 인체 자궁암세포인 HeLa에 대해 80.54%의 암세포 증식 억제 활성을 나타내었다. 이들 결과는 서리태 에탄올 추출물이 높은 항산화 활성과 우수한 암세포 증식 억제 활성을 가지고 있음을 나타낸 것으로 서리태 에탄올 추출물의 천연 기능성 소재로서의 이용 가능성을 보여주었다.
톡소플라즈마 과면역(過免疫) 우혈청(牛血淸)에서 유래된 면역증강제인 obioactin으로 처리한 마우스 복강 macrophages내(內)에서의 톡소플라즈마 증식억제 활성을 검토하였다. obioactin 및 lonomycin A로 처리한 macropohages에서는 첨가농도의 증가에 따라 세포내의 톡소플라즈마 증식이 현저하게 억제되었다. 그러나 macrophages 활성물질인 muramyl dipeptide(MDP)는 톡소플라즈마의 증식억제 효과가 없었다. 이와같이 obioactin 및 lonomycin A의 첨가에 의해 macrophages내(內)에서 톡소플라즈마의 증식이 억제되는 기전의 일부를 해명하기 위한 일환으로 활성산소 중간체 및 lysozyme 분비량을 검토하였다. obioactin과 MDP로 처리한 macrophages에서는 활성산소 중간체인 superoxide anion($O_2{^-}$)과 hydropen peroxide($H_2O_2$)의 생산은 첨가농도에 의존해서 증가하였으나 lonomycin A 첨가군에서는 대조군과 차이가 없었다. 한편 세포내에서 분비되는 lysozyme의 양은 obioactin, lonomycin A 및 MDP를 첨가한 각각의 macrophages에서 첨가농도의 증가에 따라 무처지 대조군에 비해 감소되었다. 이러한 결과로 부터 obioactin은 macrophages를 활성화시켜 세포내에서 활성산소 중간체($O_2{^-}$ 및 $H_2O_2$)를 발생시켜 이것들에 의해 톡소플라마즈의 증식이 억제되는 것으로 사료되었다. 그러나 macrophages내에서 분비되는 lysozyme은 톡소플라즈마의 증식억제와는 무관하였다.
CMCase와 xylanase 분비능이 우수한 고온성 세균을 분리하기 위하여 진주 인근지역의 느타리 재배농장으로부터 수확후배지를 수집하였다. 느타리 수확후배지로부터 17종의 균주를 분리하였으며 이 중 CMCase와 xylanase 활성이 큰 균주 YJ09를 선발하였다. Bacillus ID kit와 MicroLog system을 이용하여 분리균 YJ09의 생리적 생화학적 특성을 조사한 결과 분리균 YJ09은 B. licheniformis와 유사한 특징을 나타내었으며 16S rDNA 염기서열 분석 결과에서도 B. licheniformis와 98.9%의 상동성을 나타내었다. 이와 같은 결과를 종합하여 분리균 YJ09은 B. licheniformis YJ09로 동정되었다. 분리균이 분비하는 CMCase와 xylanase 활성은 분리균이 증식함에 따라 대수증식기 중반부터 급격히 증가하였고 정지기에 진입하면 효소활성이 더 이상 증가하지 않는 것으로 나타났으며 xylanase 활성은 대수증식기 초기부터 지속적으로 증가하여 대수증식기 중반에 최대활성을 나타내었다.
감귤류에 포함되어있는 성분중, 생리활성물질로 거론되어지고 있는 citrus flavonoid 즉, hesperidin, hesperetin, naringin 및 naringenin 4종류를 가지고 간장triglyceride합성의 율속효소로 알려져 있는 phosphatidate phosphohydrolase 활성에 대하여 in vitro계에 미치는 영향과 이들 flavonoid가 HepG2 세포의 생존율 및 증식에 미치는 영향에 대해서도 함께 검토하였다. 그 결과 본 실험에 사용된 모든 flavonoid 는 $10{-4}M$ 농도까지는 세포생존율 및 증식이 최고에 도달하였으나, $10{-3}M$ 농도에서 aglycone flavonoid는 현저한 저해효과를 나타냈다. naringin 및 hesperidin의 glycoside flavonoid는 첨가한 모든 농도에서 PAP활성을 촉진시키는 경향을 나타내었다. 그러나, aglycone flavonoid인 hesperetin은 PAP활성을 농도 의존적으로 저해하였으며, naringenin은 $10{-2}M$ 농도에서 강한 저해효과를 나타내었다. 이러한 결과로 미루어 볼 때 aglycone flavonoid가 생체내에서 세포 생존율, 증식 및 지질대사에 강한 영향을 미칠 것으로 생각되어진다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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