• 제목/요약/키워드: 중합연쇄반응

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한국에서의 2009 신종 인플루엔자 A의 임상양상과 다양한 진단 방법들의 비교 (Clinical Characteristics and Comparison of the Various Methods Used for the Diagnosis of the New Influenza A Pandemic in Korea)

  • 권민정;이창규;노경호;남명현;윤수영;임채승;조윤정;김영기;이갑노
    • Laboratory Medicine Online
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    • 제1권1호
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    • pp.26-34
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    • 2011
  • 배경: 신종 인플루엔자 A (H1N1)의 검사실 진단은 환자관리와 유행대책 수립에 매우 중요하다. 연구자들은 확진을 위해서 실시간 중합효소연쇄반응검사와 바이러스 감염질환의 표준검사로 사용되어 왔던 배양검사를 신속항원검사와 함께 비교하였다. 방법: 2009년 12월부터 2010년 1월에 걸쳐 얻어진 총 861예의 호흡기 검체를 이용하여 신속항원검사, R-mix 신속배양검사, 실시간 중합효소연쇄반응검사를 동시에 시행하여 그 성적을 구하였고, 배양결과 등급과 실시간 중합효소연쇄반응검사의 cycle threshold(Ct)값에 따른 신속항원검사 결과와의 관계를 조사하였다. 결과: 861명 중 308명(35.8%)이 신종 인플루엔자 A (H1N1)로 확진되었고, 이용된 검사들의 민감도, 특이도, 양성예측치, 음성예측치는 신속항원검사가 59.7%, 99.5%, 98.4%, 81.6%, R-mix 배양검사가 93.2%, 100%, 100%, 96.3%, 실시간 중합효소연쇄반응검사가 95.8%, 100%, 100%, 97.7%였다. 신속항원검사의 양성률은 배양이 약양성인 경우는 25.3%, 실시간 중합효소연쇄반응검사의 Ct값이 30-37인 경우에는 2.3%로 매우 낮았다. 신종 인플루엔자 확진환자 중 입원율은 3.2%였고, 사망률은 0.3%였고, 위장관 증상은 7.2%에서 관찰되었다. 결론: R-mix 배양검사와 실시간 중합효소연쇄반응검사는 신종 인플루엔자의 진단에 매우 좋은 성적을 보였으며, 특히 낮은 농도의 바이러스 검체에서 유용한 검사였다.

중이 삼출액 미생물의 16S rDNA 복합중합효소연쇄반응을 이용한 분자생물학적인 진단 (Molecular Biological Identification of Bacteria in Middle Ear Effusion Using 16S rDNA Multiplex PCR)

  • 이정구;이인숙;박지연;정상운;오충훈
    • 미생물학회지
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    • 제39권1호
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    • pp.36-39
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    • 2003
  • 본 연구에서는 16S rDNA복합중합효소연쇄반응을 이용하여 중이 삼출액에서 미생물병인원에 대한 특성을 알아보았다. 중이염환자의 중이 삼출액에서의 미생물 병인원은 주로 streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae와 Moraxella catarrhalis이다. 26명의 환자로부터 39개의 중이염의 삼출액을 얻었고, 중이 삼출액에서 DNA를 추출하였다. PCR은 16S rDNA의 C4 region에서 21 base pair의 common primer와 각각 bacterium specific primers [(i) Haemophilus-specific primer (ii) Moraxella-specific primer and (iii) Streptococcus-specific primer]를 이용하여 수행하였다. 39 개의 중이염의 삼출액 시료 중에서, H. influenzae가 24 개(61.5%) 검출되었고, M. catarrhalis는 10 개(25.6%), S.pneumoniae는 3개 (7.7%)가 검출되었다. 16s rDNA 복합중합효소연쇄 반응 진단 결과,11 개(28%)의 중이삼출액 시료에서 음성을 나타내었다. 중이염의 중복감염은 9개의 중이 삼출액시료에서 관찰되었고, 이들은 모두 H.influenzae 와 M. catarrhalis 에 의한 중복감염이었다. 본 연구에서 저자 등은 165 rDNA 복합중합효소연쇄반응이 병원성 미생물을 빠르게 진단하고, 중이삼출액의 미생물 병인론을 추적할 수 있는 좋은 방법으로 제시하는 바이다.

유전자진단에 있어서 Multiplex Ligation Dependent Probe Amplification (MLPA)의 이론과 실제 (MLPA Applications in Genetic Testing)

  • 김구환;이범희;유한욱
    • Journal of Genetic Medicine
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    • 제6권2호
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    • pp.146-154
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    • 2009
  • Multiplex ligation dependent probe amplification (MLPA)은 탐침자를 표적지에 교잡시킨 후, ligation 시키고, 그 산물을 중합효소연쇄반응으로 증폭시킴으로써 표적지의 존재여부 또는 농도를 확인할 수 있는 방법으로, 그 원리가 소개된 이래로 여러 유전자들에 대한 거대결실 및 중복돌연변이에 대한 탐색에 이용되었다. 유전자진단은 질환에 관련된 유전자에 대한 돌연변이를 탐색함으로써 질환을 진단하는 방법으로, 단일유전자 결핍 질환에 대한 유전자진단은 주로 중합효소연쇄반응과 염기서열 분석 방법을 통한 점돌연변이의 탐색에 집중되어 있다. 거대결실 또는 중복돌연변이의 경우, 특히 이형접합자를 형성하게 되는 경우는 중합효소 연쇄반응을 통하여 결실 또는 중복돌연변이 여부의 확인이 힘들다. PCR 방법에 기초하여 유전자의 농도(gene dosage)를 알 수 있는 방법으로 MLPA 방법이 소개되면서 거대결실 또는중복돌연변이를 포함하고 있던 질병 관련돌연변이들의 규명이 한층 쉬워졌다. MLPA의 원리를 응용하여 단순한 유전자의 농도 측정뿐 아니라 유전자내의 메칠화양상의 차이를 확인하거나, 염색체의 배수체 이상 등 염색체이상의 돌연변이 규명과, 전체 유전자의 크기가 비교적 커서 거대결실 돌연변이를 많이 동반하는, 주로 우성유전의 암 관련 유전자 돌연변이의 규명에 유용하게 이용된다. MLPA는 상용적인 중합효소연쇄반응으로 확인할 수 없는 유전자의 농도를 효과적으로 규명할 수 있는 방법으로, 적은 양의 주형 DNA만을 사용하고, 한가지의 실험원리로 다양한 응용이 가능하며 high-throughput이 가능한 장점을 가지는 반면, 주형 DNA의 질에 결과의 의존도가 높고, 민족 또는 개인간의 차이를 보일 수 있는 표적 DNA 염기서열 내의 single nucleotide polymorphism (SNP) 등으로 인해 분석의 오류가 생길 수 있으며, 양적 차이를 규명하는 것이므로 수 차례의 대조군 검사가 함께 진행되어야 하는 단점이 있다. 여기서는 MLPA를 이용하여 질병유전자의 돌연변이를 밝힌 사례를 바탕으로 MLPA의 원리와 탐색할 수 있는 돌연변이의 종류, 그리고 이 방법의 장단점에 대해 고찰해 보고자 한다.

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분변 시료에서 Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis 의 빠른 검출을 위한 다중 실시간 중합효소연쇄반응기법의 개발 (Multiplex Quantitative Real-time Polymerase Chain Reaction Assay for Rapid Detection of Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis in Fecal Samples)

  • 한재익;정영훈;최창용;유재규;강석진;유한상;박홍태;권응기;조용일
    • 한국임상수의학회지
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    • 제32권3호
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    • pp.219-223
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    • 2015
  • Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (MAP)는 가축 및 야생동물에서 장 내 육아종성 감염증을 유발한다. 이 연구의 목적은 MAP 특이유전자 3개(IS900, F57 및 ISMAP02)의 빠른 검사를 위한 다중 실시간 중합효소연쇄반응기법을 개발하고 평가하는데 있다. 평가 결과 분석 민감도는 IS900이 150 cells/ml, F57이 1500 cells/ml, ISMAP02가 50 cells/ml로 확인되었다. 152개 소 분변시료를 대상으로 실시한 검사 결과 개발한 기법이 기존 검사방법보다 빠르고 적은 비용으로 동시검사가 가능한 것으로 확인되었다. 검사결과의 일치도는 94%로 나타났다. 불일치 결과는 개발한 기법이 양성으로 확인하였으나, 기존 검사에서는 음성으로 나타난 것 때문으로 확인되어, 개발한 기법이 더 높은 민감도를 갖는 것으로 나타났다. 개발한 다중 실시간 중합효소연쇄반응기법은 가축 및 야생동물에서 파라결핵 또는 요네병의 조사를 위한 빠르고 정확한 검사기법이 될 것이다.

시료주입시 기포발생이 억제된 반응조 형태의 중합효소연쇄반응용 PDMS/유리 바이오칩 (PDMS/Glass Serpentine Microchannel Chip for PCR with Bubble Suppression in Sample Injection)

  • 조철호;조웅;황승용;안유민
    • 대한기계학회논문집A
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    • 제30권10호
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    • pp.1261-1268
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    • 2006
  • This paper reports low-cost microreactor $(10{\mu}{\ell})$ biochip for the DNA PCR (polymerase chain reaction). The microbiochip $(20mm{\times}28mm)$ is a hybrid type which is composed of PDMS (polydimethylsiloxane) layer with serpentine micochannel $(360{\mu}m{\times}100{\mu}m)$ chamber and glass substrate integrated with microheater and thermal microsensor. Undesirable bubble is usually created during sample loading to PMDS-based microchip because of hydrophobic chip surface. Created bubbles interrupt stable biochemical reaction. We designed improved microreactor chamber using microfluidic simulation. The designed reactor has a coner-rounded serpentine channel architecture, which enables stable injection into hydrophobic surface using micropipette only. Reactor temperature needed to PCR reaction is controlled within ${\pm}0.5^{\circ}C$ by PID controller of LabVIEW software. It is experimentally confirmed that SRY gene PCR by the fabricated microreactor chip is performed for less than 54 min.

비닐아세테이트의 조절된 라디칼 중합. II (요도드화물 존재하에서) (Controlled Radical Polymerization of Vinyl Acetate in the presence of alkyliodide(II))

  • 마석일;한규찬;김용일;권순홍
    • 한국섬유공학회:학술대회논문집
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    • 한국섬유공학회 2001년도 가을 학술발표회 논문집
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    • pp.203-206
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    • 2001
  • 산업용 섬유로서 그 사용 범위가 다양해질 것으로 예상되는 고강도, 고탄성률 폴리비닐알코올(PVA) 섬유를 얻기 위해서는 먼저 분지 구조가 없는 고분자량의 PVA의 합성이 필요하다. 그러나 비닐아세테이트와 같은 비공역형 단량체는 성장종 라디칼종의 활성이 매우 커서 성장반응 속도와 정지반응 속도가 매우 빠르므로 연쇄 이동반응이 빈번하게 일어나 고분자량의 중합체를 얻기 힘들고 또 분지구조를 갖게된다. (중략)

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분리식 PDMS/유리 중합효소연쇄반응칩 개발 및 유전적 남성불임 검사에의 응용 (Development of Detachable PDMS/Glass PCR-Chip and It's Application to Detection of Male Infertility)

  • 주진경;황승용;안유민
    • 대한기계학회논문집A
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    • 제32권4호
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    • pp.371-377
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    • 2008
  • Our precedent study has reported glass-PDMS (polydimethylsiloxane) based biochip for the gene PCR (polymerase chain reaction). To prevent the contamination of bio sample, the once used biochip must not be used repeatedly. However, the fabrication cost of microheater and microsensor of the biochip was not cheap to use it as a disposable chip. This paper proposes new PCR-chip where the glass substrate integrated with the microheater and microsensor is detachable from the reaction chamber where the sample is injected. That makes it possible to reuse the glass substrate repeatedly. The performance of the proposed detachable PCR-chip was compared with that of the precedent monolithic PCR-chip. The results showed that the SRY (sex determining Y chromosome) gene PCR was successfully performed in the detachable chip compared with the monolithic chip. However, the more efforts to improve the efficiency of surface treatment of PDMS chip are needed to increase the possibility of applying the detachable chip to the detecting of male infertility.

실시간 중합효소 연쇄반응을 활용한 생물작용제 검증시스템 연구 (A Study on the Validation system of Detection for Biological Agents Using Real-Time PCR)

  • 차영길;구본우;김성주;김남일;박한오
    • 한국군사과학기술학회지
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    • 제20권5호
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    • pp.726-732
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    • 2017
  • Bacillus anthracis, Vibrio cholerae, Variola virus and Shigella dysenteriae are classified as category A and B biological weapons. In this study suggest that 4 genes of Bacillus anthracis, 2 genes of Vibrio cholerae, 1 gene of Variola virus and 1 gene of Shigella dysenteriae were detective 50~500 fg of target DNA per reaction using real-time PCR based assay. Also analytical specificity did not show any cross-reactivity with other related bacteria. Reliable and one reaction could be effective early diagnostic and treatment for detection of unknown samples.