3D 프린터를 이한 인공지지체 제작 기술은 손상된 골 조직 재생을 위해 개발되고 있다. 골 조직 재생에 적하기 위해 인공지지체는 생체적합성, 생분해성 그리고 적절한 기계적 특성을 지녀야 하며, 분한 양의 공극과 내부 연결성을 지닌 구조로 제작되어야 한다. 본 연구에서는 3 차원 이중 공극 인공지지체를 제작하기 위해서 열 해 적층법(fused deposition modeling, FDM) 기반의 폴리머 적층 시스템을 이하였다. 사된 재료는 폴리카프로락톤(polycaprolactone, PCL)과 알긴산 나트륨(sodium alginate, SA)이다. 제작된 3 차원 형상의 인공지지체에 이중 공극을 갖기 위해 염 침출법을 이하였다. 완성된 인공지지체는 주사 전자 현미경과 X 선 검출 분광기(scanning electron microscope-energy dispersive spectroscopy, SEM-EDS)를 통해 관찰하였으며, MG-63 세포를 이하여 in-vitro 평가를 하였다.
뼈의 형성과 재형정은 조골세포에 의한 골기질의 합성과 파골세포에 의한 재흡수에 의해 조절된다. 최근에는 골형성세포의 활성화를 통한 골조직의 재생 및 치유에 대한 연구가 활발히 이루어지고 있다. 골형성 세포의 활성화는 생물학적 자극뿐만 아니라 물리적 자극에 의해서도 영향을 받는 것으로 알려져 있다. 본 연구에서는 물리적 자극 가운데에서 연구가 거의 되지 않은 저강도 초음파가 골형성 세포의 활성에 미치는 영향을 조사하였다. 이를 위하여 우선 다양한 특성의 초음파를 사용함으로써 세포활성에 미치는 최적의 초음파 조건을 결정하였다 본 연구 결과 전체 duty cycle에서 초음파 강도가 0.3W/$\textrm{cm}^2$일 경우가 세포활성에 가장 적합하며 duty cycle 50%인 경우 최고의 세포수 증가율을 나타내었다. 이와 같이 골조직의 재생에 적합한 초음파의 특성을 결정하여 골절 및 골다공증의 치료에 초음파를 활용할 수 있을 것으로 사료된다.
겨우살이의 캘러스 형성 및 종자 발아 와 haustorium 발달에 요구되는 환경요인 및 생장조절제의 영향을 조사하였다. 아울러 종자의 인위부착을 통한 식물체 재생 체계를 확립하였다. 겨우살이 조직관찰 결과 종자에는 1개 또는 2개의 막대모양의 접합자배가 존재하며 종자의 외부에 위치한 유근 부위에 주로 세포분열이 왕성한 세포층이 존재하며 반대로 자엽은 종자 내부에 위치하며 상대적으로 분열능을 가진 세포수가 감소하였다. 겨우살이 종자 발아 와 haustorium 발달에 요구되는 여러 요인 중에서 광의 요구도가 절대적이었다. 본 실험에 조사된 다른 배양 환경요인 및 생장조절제들은 광의 효과를 대체하지 못하였으며 ethylene의 경우 발아촉진 효과가 3배 이상 증가함을 알 수 있었다. 여러 조직 중에서 오로지 겨우살이 화아로부터 캘러스 형성이 가능하였으며 캘러스 형성빈도는 $0.1\;mgl^{-1}$ IAA가 첨가된 B5 배지에 배양 시 27.3%로 가장 높았다. 본 연구에서 확립된 겨우살이 캘러스 배양 및 종자 인위 부착을 통한 식물체 재생체계는 겨우살이의 유용물질 생산 연구 및 대량증식 연구분야에 활용이 가능할 것으로 기대된다.
고비사막 접경지역의 식물인 Artermisia adamsii의 내건성 및 내동성 증진을 위해 조직배양과 CLP및 Dhn5유전자의 형질전환을 수행하였다. 다양한 호르몬 농도 조건에서의 성장을 확인한 결과, 0.05mg/L의 NAA와 0.5mg/L의 BAP조건과 0.1mg/L의 NAA와 0.5mg/L의 BAP가 포함된 배지의 암조건 하에서 최적의 캘러스 생장을 확인하였으며 유전자 도입 및 유전자의 발현이 확인된 캘러스가 세포 수준에서도 내건성 및 내동성이 증진되었음을 확인하였다. 그러나 Atremisia속 다른 식물과 다르게 조직절편에서 직접 기관분화를 유도하거나 캘러스를 통한 식물체 재생에 어려움이 있어 식물체 수준에서 형질전환에 따른 환경스트레스 내성의 증진을 확인하지 못하고 있다. 앞으로 진행될 A. adamsii의 식물체 재생에 대한 연구를 통해 내동성 및 내건성이 증진된 식물체를 육성하여 고비사막 지역적응력을 조사할 예정이다.
For histologic observation of the regenerated bone following guided tissue regeneration (GTR) using ePTFE membranes with calcium carbonate implant and autogenous bone graft, biopsies were collected from 2 patients during 5-year-postoperative surgical reentry. In both combined cases with guided tissue regeneration in conjunction with calcium carbonate implant and autogenous bone graft, significant bone fill and gain in probing attachment level was observed. In histologic examination, specimen in GTR case with calcium carbonate grafting was composed of a dense bone containing vascular channel with lamellar structure and viable bone cells in lacunae, however considerable calcium carbonate particles remained unresorbed and isolated from regenerated bone by the dense cellular and fibrous connective tissue. No formative cells could be seen in contact with remained calcium carbonate particles. In GTR case with autogenous bone grafting, specimen show was composed of a dense lamellar bone containing vascular channel, which showed normal alveolar bone architectures. The present observation indicate that guided tissue regeneration in conjunction with grafting, especially autogenous bone graft, has highly osteogenic potential, however resorbable calcium carbonate granules were not completely resorbed at 5 year postimplantation.
The present study evaluated the effects of guided tissue regeneration using biodegradable membrane, with and without calcium-phosphate thin film coated deproteinated bone powder in beagle dogs. Contralateral fenestration defects(6 × 4 mm) were created 4 mm apical to the buccal alveolar crest on maxillary canine teeth in 5 beagle dogs. Ca-P thin film coated deproteinated bone powder was implanted into one randomly selected fenestration defect(experimental group). Biodegradable membranes were used to provide bilateral GTR. Tissue blocks including defects with overlying membranes and soft tissues were harvested following a four- & eight-week healing interval and prepared for histologic analysis. The results of this study were as follows. 1.......The regeneration of new bone, new periodontal ligament, and new cementum was occurred in experimental group more than control group. 2.......The collapse of biodegradable membranes into defects were showed in control group and the space for regeneration was diminished. In experimental group, the space was maintained without collapse by graft materials. 3........In experimental group, the graft materials were resorbed at 4 weeks after surgery and regeneration of bone surrounding graft materials was occurred at 8 weeks after surgery. 4.......Biodegradable membranes were not resorbed at 4 weeks and partial resorption was occurred at 8 weeks but the framework and the shape of membranes were maintained. No inflammation was showed at resorption. In conclusion, the results of the present study suggest that Ca-P thin film coated deproteinated bone powder has adjunctive effect to GTR in periodontal fenestration defects. Because it has osteoconductive property and prohibit collapse of membrane into defect, can promote regeneration of much new attachment apparatus.
본 연구는 carbofuran이 흰쥐의 신장, 간 및 뇌조직내 각종 세포의 미세구조에 미치는 독성을 비교${\cdot}$관찰하고, 더불어 phenobarbital sodium(PB) 및 3-methylcholanthrene(3-MC)이 carbofuran의 독성에 어떠한 보상효과를 갖고 있는지를 밝히고자 각 실험동물에 carbofuran과 PB 및 3-MC 단독 또는 carbofuran과 PB 및 carbofura과 3-MC를 조합 투여한 후 경시적으로 각 조직을 적출하여 광학 현미경으로 관찰을 하였다. 신장에서의 carbofuran단독투여균의 경우 투여후 48시간까지 신장소체의 많은 세뇨관들이 폐쇄되는 독성이 나타났으나 Carbofuran과 PB 또는 3-MC의 조합처리군의 경우 각각 투여후 6시간부터 다소 재생되기 시작하여 48시간 후에는 현저히 회복되는 경향이었다. 간에서의 carbofuran 단독투여군의 경우 투여후 48시간까지 간세포에 퇴행성변화인 괴사 및 심한 변성이 관찰되었으나 Carbofuran과 PB 또는 6시간후부터 간세포들의 재생이 뚜렷하였다. 뇌에서의 carbofuran 단독투여군의 경우 투여후 48시간까지 퇴행성변화 및 대뇌피질의 모세혈관 확장이 나타났으나 Carbofuran과 PB 또는 3-MC의 조합처리군의 경우 투여후 6시간후 이후에는 대조군과 유사하였다. 이상의 결과로 보아 PB와 3-MC 모두 carbofuran에 의한 쥐의 조직독성을 감소시킬수 있는 물질임을 알 수 있었다.
Steel scalpel과 $CO_2$ laser를 이용한 돼지 자궁 절개 시 창상 치유에 미치는 영향을 평가하고자 본 실험을 실시하였다. 다섯 마리의 Landrace - Yorkshire 혼혈 종 돼지를 이용하였고, 각각의 돼지에서 좌측 및 우측의 자궁에 대칭적으로 scalpel과 $CO_2$ laser를 이용하여 절개 하였다. 각각의 기구는 절개 속도, 절개의 용이성 및 출혈 정도를 평가 하였으며 수술 후 21일에 육안적인 유착 정도와 조직학적 검사를 실시하였다. Scalpel을 이용한 절개는 레이저를 이용한 절개보다 용이하였으나 두 군간의 유의성은 없었다. 레이저를 이용한 절개 시 출혈량은 적었으나 절개속도는 scalpel을 이용한 경우가 빨랐다. $CO_2$ laser 절개에서의 수술 후 자궁 유착은 scalpel 절개에서 보다 적게 발생하였다. 조직학적 검사에서 scalpel 절개의 경우 상피 조직과 자궁내막선의 재생이 완전히 이루어 졌으나 레이저를 이용한 경우 불완전한 재생 상태를 보였다. 비록 scalpel을 이용한 절개가 $CO_2$ laser를 이용한 경우 보다 조직 손상이 적었으며 사용하기 용이하였으나 출혈이 많은 단점이 있다. 반면 $CO_2$ laser를 이용한 절개의 경우 지혈 효과는 좋으나 창상 치유를 지연 시켰다.
배경: 혈관질환의 수술에 사용되는 인공 도관의 막힘과 문합부위의 좁아짐 등을 개선하기 위한 방법으로 조직공학적인 방법과 자가 세포를 이용한 인공혈관의 제작이 대안으로 대두되고 있다. 저자들은, 생흡수성이 있는 고분자 폴리머 지지체와 자가 골수세포를 이용한 인공혈관으로 생체실험을 시행하였다. 대상 및 방법: 생분해성 고분자 재료인 poly (lactide-co-${\varepsilon}$-caprolactone) (PLCL)과 poly(glycolic acid) (PGA) fiber로 혈관용 지지체를 제작한 후, 피실험 동물의 골수를 채취하여 혈관 내피 세포와 평활근 세포로 분열시켜 배양한 후 혈관 지지체위에 이식하였다. 만들어진 인공 혈관을 잡견의 복부대동맥에 이식한 후 3주 후에 혈관 조영술을 시행하고, 안락사 후에 혈관을 제거하여 조직학적 검사를 시행하였다. 결과: 6마리의 잡견 중 2마리에서 수술 후 10일에 혈관 지지체의 균열에 의한 대량 출혈로 사망하였다. 나머지 4마리의 잡견은 수술 후 3주까지 생존하였으며, 혈관 조영술상 혈관의 막힘이나 좁아짐은 발견되지 않았다. 인공 혈관의 내면은 작은 혈전들이 붙어 있었으며, 조직학 검사에서 정상 혈관과 유사한 3층의 구조를 나타내었다. 또한 면역화학 검사에서 혈관 내피세포와 혈관 평활근 세포가 재생된 것을 확인하였다. 결론: 고분자 폴리머와 자가 골수세포를 이용한 인공혈관은 생체 내에서 정상혈관과 유사한 모양으로 재생이 가능함을 보여주었다. 그러나, 동맥압력에 견디기 위해 혈관 지지체의 물성에 대한 개량과 충분한 양의 혈관 세포를 얻기 위한 연구가 더 필요할 것으로 생각된다.
추간판 디스크의 섬유륜(AF)조직 재생에 적합한 다양한 담체를 평가하기 위해 천연재료인 소장점막하조직(SIS)과 탈미네랄화된 골분(DBP)을 폴리(락타이드-글리콜라이드) 공중합체(PLGA)와 혼합하여 담체(PLGA/SIS, PLGA/DBP, PLGA/SIS/DBP)를 제조하였으며, PLGA담체, PGA 메쉬, SIS 스폰지와 비교하였다. 제조된 담체의 압축강도 및 AF 세포를 담체에 파종하여 콜라겐 양과 DNA량을 측정하였으며, 이를 누드마우스 피하에 이식 후 적출하여 육안관찰과 조직학적인 평가를 수행하였다. 압축강도 측정에서 PLGA와 유사하게 PLGA/SIS, PLGA/DBP 에서도 충분한 강도를 나타내었다. DNA 증가량에 따른 콜라겐 양은 PLGA/SIS 에서 가장 높게 나타났고, 면역화학 염색을 통해 PLGA/SIS, PLGA/SIS/DBP 에서 글라이코스아미노글라이칸과 콜라겐 발현량이 높음을 확인하였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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