A method for cryopreservation of suspension cultured embryogenic cells derived from immature zygotic embryos of rice (Korean cultivars, Donggin-byeo and Taebaeg-byeo) was developed. The highest cell regrowth after storage in liquid nitrogen was obtained when Donggin-byeo cells were cryoprotected with a mixture of 2 M DMSO and 0.4 M sucrose and Taebaeg-byeo cells with a mixture of 0.64 M DMSO and 0.4 M sucrose at frequencies of 88% and 90%, respectively, Pretreatment in a high osmotic medium was not necessary. Upon transfer to $N_{6}$ medium suplemented with lmg/L NAA and 5 mg/L kinetin, the regenerated calli gave rise to numerous somatic embryos which subsequently underwent development into plantlets. Among approximately 100 plantlets, 25% of them were albinos.s.
The effect of plant growth regulators on proliferation of shoot from stem node culture of Japanese yew (Taxus cuspidata Sieb. et Zucc.) was studied using Quoirin and Lepoivre (1977) medium. Among the cytokinin tested, BAP, kinetin, and thidiazuron at various concentrations had no effect on shoot multiplication However when zeatin at 5$\times$10$^{-5}$ M was added to the medium, an average of 6 shoots were regenerated per explant after 8 weeks of culture. The ratio of rooting ex vitro was remarkably increased up to 34% by dipping the basal end in 0.5 to 1.0% IBA on talc compared with 3% in vitro rooting. Rooted plantlets were acclimated in greenhouse conditions for one month and successfully transplanted to the field.
Proteins in friable and compact calli of Viola patrinii DC. were analysed. The protein contents in friable calli were lower than those in compact calli. In suspension culture, it increased to the maximum after 3 weeks culture from inoculation and decreased after 4 weeks culture. Several strong lavel signals were detected with the SDS-PAGE analysis. The polypeptides of 28, 31 and 35 KD were observed from the friable cell culture, from the compact cell culture strong band of 30 KD was determined, indicating that these polypeptides may be the major protein occurring during their cultures. Changes in amino acid contents during culture of the viola suspension cells were investigated the amino acid contents were greatest between two and three weeks culture of the viola suspension cells.
Kim, K.Y.;Kang, K.M.;Choi, K.J.;Jang, Y.S.;Lim, Y.C.;Kim, M.J.;Kim, J.G.;Kim, W.H.;Park, G.J.
Journal of The Korean Society of Grassland and Forage Science
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v.22
no.4
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pp.273-278
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2002
Several regenerated plants were obtained from anther culture of the hybrid lines of Italian ryegrass (Lolium multiflorum Lam.) X Tall fescue (Festuca arundinacea Schreb.). When the anthers of the hybrid plants were incubated for 20 days on callus induction medium, MS medium containing 30 g/$\ell$ of sucrose, 2 mg/$\ell$ of NAA and 1 mg/$\ell$ of kinetin, their calli were induced. The mean ratio of callus induction was 11.6 percent, and the mean of callus weight was 9.1 mg/callus/anther. When the calli of the hybrid plants were incubated for 50 days on plant regeneration medium, MS medium containing 30 g/$\ell$ of sucrose, 1 mg/$\ell$ of NAA and 2 mg/$\ell$ of kinetin, the hybrid plants were regenerated. The mean ratio of plant regeneration was 27.1 percent and line Hyb-1 showed highest regenerabillity with the frequency of 30.2 percent.
Effects of the heavy-ion ($^{14}$ N or $^{20}$ Ne) beam irradiation on the response of anthers, growth of calli, germination of seeds, and the early growth after the germination of tobacco (Nicotiana tabacum L. cv. BY-4) were investigated. Anthers precultured for 10 days before the irradiation became brown without callus or shoot induction over 20 Gy of $^{14}$ N and $^{20}$ Ne ion beam irradiation. Relative growth rate of the cultured calli was reduced by the irradiation and became brown significantly 2 weeks after the $^{14}$ N and $^{20}$ Ne ion beam irradiation over 50 Gy. The increased intensity of the heavy-ion ($^{14}$ N, $^{20}$ Ne) beam irradiation resulted in the delay of seed germination and the inhibition of the early growth both in water-treated and non-treated seeds before the irradiation. In addition, the heavy-ion beam irradiation to the imbibed seeds inhibited seed germination more than that to the non-imbibed seeds. The screening approach of non-imbibed seeds with heavy-ion beam irradiation using in vitro culture system was more useful than the filter-paper germination method in investigating the characteristics of heavy-ion beam-irradiated seed population and the screening of morphological variants at the early stage of the plant growth.
Korean Lentinus edodes SR-1 was cultured to multiply the mycelia in the complete broth medium (C/N=13.1) for mushroom, and protein-bound polysaccharides were extracted from the cultured broth containing mycelia (The whole cultured broth was used to increase the yields: 80% of protein-bound polysaccharides were existed at the cell wall of mycelia and 20% of those were secreted extracellularily in this culture). Protein-bound polysaccharides in the cultured broth containing mycelia were extracted by using three different methods: 1) Extraction with hot water, 2) Disintegration of cell wall by glass bead mill treatment before extraction with hot water, and 3) Cellulase treatment before extraction with hot water. The highest yield was obtained (930 mg polysaccharides/100 mL culture broth) when protein-bound polysaccharides were extracted with 2) method. The extracted crude protein-bound polysaccharides were purified using protease, DEAE-cellulose and Sephadex G-100. The growth inhibition activity for $P_{388}$, mouse leukemic cell, increased (53.7, 62.2, 93.7% and 97.4%) as the purification level increased. Protein-bound polysaccharides contained 46.1% of polysaccharides, 7.3% of protein, and trace amounts of minerals. Polysaccharides contained glucose, galactose, xylose and mannose. The content of proline and glycine were high, however, methionine and leucine were not found. The major minerals were Na, K, Zn, and Ca.
Whereas cationic extracellular peroxidases (PODs) were observed in the suspension cultures of rose (Rosa sp. L. cv Pual's scarlet) grown under normal conditions, new anionic isozymes were induced within 24 hr by the treatment of low host-specific elicitor (10 mg glucan/L media) prepared from yeast cell wall. Prominent anionic (pI 6.1) and cationic POD (pI 8.4) were purified and characterized to understand the physiological role of the enzymes. Both enzymes were purified (ca.200 fold) by the ammonium sulfate precipitation, ion exchange chromate-graphy and gel filtration chromatography. The Km values of the purified anionic POD for ferulic acid and $\textrm{H}_2\textrm{O}_2$ were 4.64 mM and 0.72 mM, whereas those of the cationic POD were 1.38 mM and 0.48 mM, respetively. The activity of the anionic POD as NADH oxidase was twice higher than that of cationic POD. The NADH oxidation in the anionic POD fraction was inhibited by 60% on the addition of 0.1 mM coniferyl alcohol, while that in the cationic fraction was inhibited by 15%.
Variation in ploidy level of regenerated plants from rice anthers and effective diploidization methods of haploid plants were studied to obtain basic information in rice breeding through anther culture. In a total of 574 plants derived from anther culture using 14F$_1$ hybrids as materials, there were 49.7% haploids, 48.6% diploids and 1.7% polyploids, respectively. The frequency of haploids in Japonica/Indica crosses was 60.6%, and that of Japonica/Japonica crosses was 43.0% in average. Inclusion of 2.4-D or NAA as phytohormone may increase the frequency of haploids, but kinetin may increase the frequency of diploids. The rate of auto-diploidization by tiller separation of haploid plants showed 8.2% in average. The rate of diploidization by leaf-sheath injection of colchicine showed 18.8% in average. Morphological characters of haploids plants showed that 64.6% in culm length, 63.4% in panicle length, 68% in flag leaf length, and 74.4% in flag leaf width compared to diploid plants. These apparent morphological differences will contribute to identify the ploidy of plants derived from rice anther culture.
Kim, Jung-Hwa;Kim, Dae-Ho;You, Jin-Hyun;Kim, Cheol-Hee;Kwon, Min-Chul;Hwang, Baik;Lee, Hyeon-Yong
Korean Journal of Medicinal Crop Science
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v.13
no.4
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pp.154-160
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2005
This study was performed to compare anticancer and immune activities between natural Artemisia capillaris Thunb. extract and tissue cultured plant extract (hairy root, in vitro culture, callus). The inhibitory effect of cancer cell growth, human B cell growth and productivity of cytokines were examined. Furthermore, HPLC analysis was performed to confirm the components. The anticancer activities increased by more than 55% with the cultured callus of Artemisia capillaris T. for four cancer cell lines(Lung carcunoma, Stomach adenocarcinoma, Hepatocillular carcinoma, Breast adenocarcinoma), showing higher effect than natural Artemisia capillaris T. The extracts from hairy root and in vitro culture of Artemisia capillaris T. significantly increased the immune B cell growth. The immune B cell growth effect of natural Artemisia capillaris T. was higher than that of the tissue culture plants such as hairy root, in vitro culture and callus. Both natural and tissue cultured plants showed similar effects on cytokine secretion. The similar peak size was observed between natural Artemisia capillaris T. and cultured callus in HPLC analysis. As a results, the biological activities were not observed the difference between natural Artemisia capillaris T. and cultured callus. Thus, the cultured callus will be altered natural Artemisia capillaris T. in the environmental side and the resources preservative side
Effects of A23187 on estradiol$-17^{\beta}$-induced vitellogenin (VTG) induction were electrophore-tically examined in primary hepatocyte cultures in rainbow trout. hepatocytes were predultured for 2 days and then estradiol-$17^{\beta}$(E2, $2{\times}10^{-6}$M) and calcium ionophore (A23187, $10^{-7)$~$10^{-5}$ M) were added to the incubation medium. The hepatocytes were cultured for 7 more days. In addition, effects of A23187 on $E_2$-primed VTG production were investigated for 7 days. The addition of A23187 ($10^{-7)$~$10^{-5}$M) to the incubation medium specifically reduced VTG production by hepatocytes in a concentration-dependent way. The addition of A23187 significantly reduced the rate of $E_2$-primed VTG production to 18% of the control (E2 only) on Day 7. However, $E_2$-primed VTG production was reduced to 47% of the control by withdrawal of $E_2$ from the incubation medium. Therefore, these results suggest that intracellualr sequestered calcium could regulate VTG synthesis at the translational and/or post-translational stage.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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