• Clinical and Experimental Reproductive Medicine
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• v.30 no.4
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• pp.293-298
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• 2003

목 적: 인간의 배아줄기세포는 전분화능과 영속성을 가지고 있어 발생 및 분화에 관련된 기초 연구 뿐 만 아니라 재생의학, 약물검색 등에서도 매우 유용한 재료로 이용될 수 있다.본 연구에서는 유전체의 변형이 배아줄기세포주의 확립 효율에 미치는 영향을 살펴보고자 비정상적인 포배기 배아에서 내세포괴를 분리하여 배양하였다. 연구 방법: 인간의 체외수정 및 배아이식술에서 공여 받은1개 또는3개의 전핵이 관찰되는 비정상 수정란 (n=20)과 착상전 유전진단에서 이수성이 확인된 배아 (n=27)를 대상으로 하였다. 일반적인 immunosurgery 방법으로 영양배엽세포들을 제거하고 내세포괴를 분리한 후 PMEF 혹은 STO feeder 세포위에서 배양하였다. 배아줄기세포의 배양시스템을 검증하기 위해서 이미 확립된 Miz-hES1 cell line을 동시에 같은 조건 하에서 계대배양하였다. 결 과: 비정상 수정란에서 발생된 포배기 배아에서 분리한 1개의 내세포괴가 배아줄기세포와 유사한 colony를 형성하였으나, 계대배양에는 실패하였다. 이수성 배아에서 발생된 포배기 배아의 내세포괴 배양에서는 두개의 colony가 계대배양 중에 영양배엽세포의 형태로 분화되어 미분화 상태를 유지하지 못하였다. 동일한 시기와 조건 하에서 계대배양된 Miz-hES1 cell line이 미분화상태로 유지됨을 karyotyping (46, XY)과 immunophenotyping (positive in SSEA-3 and -4)으로 확인하였다. 결 론: 본 연구의 결과에서 비정상 수정란과 이수성 배아에서 발생된 포배기 배아에서 유래한 내세포괴는 배아줄기세포주 확립 및 미분화 상태 유지 능력이 매우 저조한 것으로 여겨진다. 따라서, 인간의 배아줄기세포주를 확립하는데 있어 배아의 정상여부가 중요한 요소로 작용할 것으로 생각된다.

• The Korean Journal of Pharmacology
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• v.29 no.2
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• pp.263-274
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• 1993

Potassium $(K^+)$ channels are present in airway smooth muscle cells, and their activation results in hyperpolarization and relaxation. Because these effects may have therapeutic relevance to hypersensitivity and asthma, we examined the effect of a potassium channel activator, cromakalim (BRL 34915, CK) on the release of mediators from superfused tracheal and parenchymal strips after passive sensitization with $IgG_1$ antibody. Both tissues were superfused with CK $(2{\times}10^{-6}\;M)$ for 30 min and challenged with CK and antigen (Ox-HSA). Using monodispersed, partially purified, highly purified guinea pig lung mast cells, we also examined the effect of CK on mediator release from these cells after passive sensitization with $IgG_{1}$ antibody $({\alpha}-OA)$. Guinea pig lung mast cells were purified using enzyme digestion method, count current elutriation, and discontinuous Percoll density gradient. After CK pretreatment, passively sensitized mast cells were challenged with varying concentration of antigen (OA, immunological stimuli) or with varying concentration of calcium ionophore (CaI, non-immunological stimuli). Histamine (Hist) release was determined by spectrophotofluorometry, and leukotrienes (LT) by radioimmunoassy. CK pretreatment decreased Hist by 35% and LT release by 40% in the antigen-induced tracheal tissue after $IgG_1$ sensitization but did not decrease the contractile response. In the antigen-induced parenchymal tissue CK decreased Hist release by 25% but poorly decreased LT. Both immunologic and non-immunologic stimuli caused a dose-dependent release of Hist and LT from monodispersed, partially purified and highly purified lung mast cells. Verification of LT release was obtained by the use of 5-lipoxygenase inhibitor, A64077 (Zileuton). CK decreased Hist and LT release by 20% respectively in the OA-induced guinea pig lung mast cells after $IgG_1$ sensitization. The inhibitory effects of CK on the Hist and LT release in the Ox-HSA-induced airway smooth muscle tissues or in the OA-induced and CaI-induced mast cells after $IgG_1$ sensitization were completely blocked by TEA and GBC. These studies show that guinea pig lung mast cells seem to be an important contributor to LT release, and that CK (which has been known as an airway smooth muscle relaxant) can in part act to inhibit mediator release in the antigen-induced airway smooth muscle, and that CK may also act to inhibit mediator release in the OA-induced and CaI-induced highly purified mast cells. These results suggest that Hist and LT release evoked by mast cell activation might in part be associated with $K{^+}4 channel activity.

• Clinical and Experimental Reproductive Medicine
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• v.33 no.4
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• pp.265-272
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• 2006

Objective: This study was carried out to evaluate the effect of the isolation methods of inner cell mass from mouse blastocyst, types of feeder cells and treatment time of mitomycin C on the formation rate of ICM colony. Methods: The inner cells were isolated by conventional immunosurgery, partial trophoblast dissection with syringe needles and whole blastocyst co-culture method. Commercially available STO and primary cultured mouse embryonic fibroblast (pMEF) feeder cells were used, and mitomycin C was treated for 1, 2 or 3 hours, respectively. The formation rate of ICM colony was observed after isolation of ICM and culture of ICM on the feeder cells for 7 days. Result: The ICM colony formation rate on STO were significantly higher in partial trophoblast dissection group (58%) than that in immunosurgery (12%) or whole blastocyst culture (16%) group (p<0.05). The formation rate on pMEF feeder layer was higher in partial trophoblast dissection (88%) and whole blastocyst culture (82%) group than that in immunosurgery (16%) group (p<0.05). When mitomycin C treated to pMEF for 2 hours, the formation rate of 88% was significantly higher than those of other conditions. Conclusion: Above results showed that the efficient isolation method of ICM from blastocyst was the partial trophoblast dissection and the appropriate treatment time of mitomycin C was 2 hours. However, the subculture of ICM colony and characterization of stem cells should be carried out to confirm the efficacy of the partial trophoblast dissection method.

• Clinical and Experimental Reproductive Medicine
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• v.33 no.1
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• pp.25-33
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• 2006

Objective: The aim of this study was to investigate whether embryonic stem (ES) cells can be established from isolated blastomeres of mouse embryos. Methods: Blastomeres were separated from mouse (C57Bl/6J) 2- or 4-cell embryos. Isolated blastomeres or whole 4-cell embryos were co-cultured with mitosis-arrested STO feeder cells in DMEM supplemented with recombinant murine leukemia inhibitory factor and ES-qualified fetal bovine serum. After the tentative ES cell lines were maintained from isolated blastomeres or whole embryos, some of them were frozen and the others were sub-cultured continually. Characteristics of tentative ES cell lines as were evaluated for specific genes expressions with immunocytochemistry and RT-PCR. Results: One ES cell line (3.0%) was established from isolated blastomere of 2-cell embryo and one cell line (4.0%) from isolated two blastomeres of 4-cell embryo. And five cell lines (16.7%) were established from whole 4-cell embryos. Both cell lines from isolated blastomere and whole embryo expressed mouse ES cell specific markers such as SSEA-1, Oct-4 and alkaline phosphatase. Marker genes of three germ layers were expressed from embryoid bodies of both cell lines. Conclusion: This study suggests that mouse ES cells could be established from isolated blastomeres, although the efficiency is lower than whole embryos. This animal model could be applied to establishment of autologous human ES cells from biopsied blastomeres of preimplantation embryos in human IVF-ET program.

• Korean Journal of Veterinary Research
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• v.37 no.2
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• pp.417-423
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• 1997

돼지 생식기 호흡기 증후군 바이러스의 nucleocapsid와 반응을 하는 SDOW17 단크론항체를 이용하여 중성 포르말린에 고정시킨 자연감염된 포유자돈의 폐장에서 면역조직화학법을 이용하여 돼지 생식기 호흡기 증후군 바이러스 항원을 확인하였다. 서울대학교 수의과대학 병리학교실에 의뢰된 포유자돈들 중에서 병리조직학적으로 폐장에서 간질성 폐렴이 관찰된 포유자돈 7두를 임의로 선택하여 본 실험을 실시하였다. 간질성 폐렴의 병변으로 많은 수의 대식세포 침윤을 동반한 폐포벽 두께의 증가와 제II형 폐포세포의 비후가 관찰되었다. 검사한 7두 포유자돈중에서 6두에서 돼지 생식기 호흡기 증후군 바이러스에 대한 항체를 enzyme-linked immunosorbent assay에 의해 확인하였다. SDOW17 단크론항체를 이용한 면역조직화학염색과 간질성 폐렴의 대식세포에서 돼지 생식기 호흡기 증후군 바이러스의 항원을 검출하였고, 항원은 (주로)대식세포의 세포질에서만 진한 갈색의 양성반응이 관찰되었다. 이상 검사결과 돼지 생식기 호흡기 증후군 바이러스는 폐장의 간질과 폐포강에 분포되어 있는 대식세포에서 주로 증식하는 것으로 판명되었다. 본 실험에서 사용한 면역조직화학법은 돼지 생식기 호흡기 증후군 바이러스 감염여부를 바이러스 분리 또는 혈청검사 없이 진단하는데 사용할 수 있는 유용한 진단방법으로 판명되었다.

• Korean Journal of Veterinary Research
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• v.34 no.1
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• pp.77-83
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• 1994

Three viral strains, causing CPE in porcine alveolar macrophage cell, were isolated from aborted fetus, serum from young pig showing blue-ear sign and lung of suspected pig, respectively. The differential diagnostic results showed no characteristics of Aujeszky's disease virus(ADV), hog cholera virus (HCV), Japanese encephalitis virus(JEV), porcine parvovirus(PPV) and encephalomyocarditis virus (EMCV). However, positive reactions were demonstrated by IFA using monospecific porcine antibodies against Lelystad virus. When the paired sera of experimentally inoculated swine with one of isolate, KPRRSV-l were tested by IPMA, the result indicated that the isolate was related to United States isolate than European LV.

• Journal of the Korean Wood Science and Technology
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• v.17 no.3
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• pp.61-66
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• 1989

포플라 세포(細胞)의 Sucrose gradient 원심분리(遠心分離)에 나타난 세포(細胞)분획은 6개의 band 및 침전으로 분리(分離) 되었다. Peroxidase의 활성변화(活性變化)는 휴면기(休眼期)에 높아졌으며, 자발적(自發的) 휴면(休眠)이 타파되면서 낮아지기 시작하였다. 휴면기(休眠期)에 급격히 높아진 Peroxidase 활성(活性)은 Peroxidative 활성(活性)을 지닌 세포내(細胞內) Microbody에 존재(存在)하는 것으로 사료된다. Catalase의 활성(活性)은 11월(月), 12 월(月) 1월(月)의 휴면기(休眼期)에 활성(活性)이 낮았으며. IAA의 농도는 휴면초기(休眼初期)에 감소하기 시작하여, 12월(月)에 최저(最低)가 되었다. 자연휴면(自然休眠)이 타파된 1월(月)부터는 IAA 농도가 증가하기 시작하여 4월(月)의 발아기(發芽期)까지 계속되었다. 이와같은 Peroxidase, Catalase를 비롯한 IAA의 변화(變化)는 봄철의 발아(發芽) 및 재생장(再生長)과 가을철 휴면조절(休眠調節)에 영향을 미치는 것으로 사료된다.

• Proceedings of the KSAR Conference
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• 2003.06a
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• pp.89-89
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• 2003

본 연구는 난소의 황체를 체외배양시 TGF-$\beta$1의 황체내 발현을 조사하기 위해 수행되었다. 돼지 황체는 축산기술연구소에서 사육중인 돼지(체중 145$\pm$kg) 12두로부터 발정을 유도시켜 배란 후 약 48시간째 도축하여 난소를 회수하였다. 회수된 난소로부터 황체를 분리하여 세절한 후 0.25% collagenase용액(0.025mg DNase, 50mM EDTA, 50mM Dithio-threitol)으로 37$^{\circ}C$의 진탕 수조에서 30분간 배양하여 황체세포를 분리 회수하였다. 회수된 황체세포는 D-MEM용액(GIBCO, 10% FCS와 antibiotics 첨가)으로 2회 세척하여 1$\times$$10^{6}$live cell/$m\ell$이 되도록 희석하여 24 well culture plate(Corning, New Tork 14831)에 분주하여 $CO_2$ 배양기($CO_2$: 5%)에서 24시간 간격으로 2회 배양액을 교환해 48시간 동안 배양하였다. 배양된 황체 세포는 immunocytochemistry 방법으로 TGF-$\beta$1의 발현을 관찰함과 동시에 황체조직도 같은 방법을 사용하여 TGF-$\beta$1 의 발현 유ㆍ무을 관찰하였다. 그 결과 황체세포 그리고 황체 조직 뚜렷한 TGF$\beta$1의 발현을 확인할 수 있었다. 이 결과로서 TGF$\beta$1은 황체기능을 유지하는데 하나의 인자로서 작용하며 다른 인자들과의 상호작용을 시사하고 있다.

• Korean Journal of Microbiology
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• v.28 no.1
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• pp.83-89
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• 1990

Two strains of actinomycetes producing extracellular adenosine deaminase, strain J-845S and strain J-326TK, were isolated from soil. Strain J-845S was gram-positive and non-acid-fast. This strain formed whitish, rod-shaped, smooth and non-motile spores on the aerial mycelium, and the spore chain was spiral. The hyphae of the mycelium branched abundantly. Cell wall chemotypes of the strain were of type I containing LL-diaminopimelic acids, and of phospholipid type II, and then strain J-845S was designated as Streptomyces sp.. Strain J-326TK was gram-positive and non-acid-fast. The hyphae of primary and aerial mycelium fragmented into irregular rod of coccus-like elements. The aerial mycelium either did not branch or sparsely branched. Cell wall composition was of type I and phospholipid type I. Thus, strain J-326TK was identified as Nocardioides sp.

• Proceedings of the Korean Society of Applied Pharmacology
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• 1994.04a
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• pp.258-258
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• 1994

본 연구에서는 토양균이 생성하는 2차 대사산물로부터 세포증식 촉진인자 (Maturation Promoting Factor. MPF)인 cdc2/cdk2-cyclin의 복합체를 특이적으로 억제하는 물질을 분리하고 그 물질의 생리활성을 조사하였다. 토양으로부터 순수분리된 300여개의 토양균에서 생성된 배양액을 취하여 MPF의 특이적인 기질인 합성 peptide (CSH103 :HATPPKKKRK)를 사용하여 인산화 활성을 측정하였다. 그중 MPF 활성 억제능이 90％ 이상인 19개의 균주를 1차적으로 선정한 후 각각에 대하여 열/pH에 대한 안정성, 각종 용매에 대한 추출성 등 이화학적 성질을 규명하였으며 이중 균주 LPL 931로부터 MPF 활성 억제제를 분리하고자 하였다. 예비실험의 결과로부터 토양균 LPL 931을 대량배양하여 열처리하고, 비이온성 수지인Amberlite XAD-2에 결합시키고 70% acetone으로 용출시켰다. 이 추출물로부터 ethylacetate와 n-butanol을 사용하여 MPF 억제 활성물질을 추출하였다. 이 추출액을 실리카겔 관 크로마토그래피, 분취 TLC, 분취 HPL를 하여 MPF 활성 억제 분획을 분리하였다.