한국산과 중국산 녹두 종자에서 0.15 M NaCl/0.1 M sodium phosphate buffer (pH7.0)에 의한 추출, $(NH_4)_2SO_4$ 침전, 최종적으로 Sephadex G-100을 이용한 affinity chromatography에 의해 lectin을 분리한 다음, 이들의 생화학적 특성을 조사, 비교하였다. 사람의 적혈구는 trypsin의 처리 유무와 상관없이 응집반응이 일어나지 않으며, 토끼의 적혈구에서는 trypsin을 처리한 경우에만 응집반응이 일어났다. 두 녹두 종자 lectin의 분자량은 SDS-PAGE를 통해 54 kDa와 28 kDa로 확인되었다. 한국산 녹두 종자 lectin의 최적 반응 온도는 $60^{\circ}C$이며, 중국산 녹두 종자 lectin의 경우는 $50^{\circ}C$로 나타났다. 종자 lectin이 열에 가장 안정한 온도는 한국산의 경우는 $50^{\circ}C$이며, 중국산의 경우 $40-50^{\circ}C$로 밝혀졌다. 한국산 녹두 종자 lectin은 pH 3.2에서 가장 높은 활성을 보였으며, 중국산 녹두 종자 lectin은 pH 6.2에서 가장 높은 활성을 보였다. 변성제를 처리했을 때, thiourea와 guanidine-HCl과는 혈액 응집이 일어나지 않아 변성작용이 일어남을 알 수 있었고, urea와는 혈액 응집이 일어나지 않아 변성작용이 일어나지 않음을 알 수 있었다. D-glucose외 6가지의 탄수화물에 대한 특이성이 나타나지 않았다. 또한 두 녹두 종자의 lectin은 $Ca^{2+}$, $Co^{2+}$, $Cu^{2+}$, $Cu^{2+}$, $Mg^{2+}$ 및 $Mn^{2+}$ 등의 금속이온에 대한 특이성이 없었다.
혈전(fibrin clot)은 심혈관계 질환을 일으키는 주요 인자로서 전신의 미세동맥이나 모세혈관 내에서 형성되어 주의 조직이나 장기에 혈류의 공급방해가 생겨 허혈, 경색, 나아가 괴사까지도 발생시킨다. 혈전이 원인이 되어 발생한 심혈관계 질환을 예방 혹은 치료할 목적으로 기존으로 사용되고 있는 항혈전제(antithrombolytic drug)나 혈전용해제(thrombolytic drug)의 개발을 위해 많은 연구들이 진행되고 있다. 본 연구에서는 치료목적으로 사용할 혈전용해제를 분리하고자 Protaetia brevitarsis의 maggot로부터 ammonium sulfate 분획과 desalting column을 이용하여 fibrinolytic protease를 분리하고 생화학적 특성을 조사하였다. 활성의 최적 pH는 9.0였고 최적온도는 $50^{\circ}C$였다. pH 7.0-9.0 사이와 온도 $60^{\circ}C$이하에서는 비교적 활성이 안정성을 나타냈다. 효소활성이 phenylmethanesulfonyl fluoride에 의해 강하게 저해되고 있는 것으로 보아 serine protease로 추정되며 금속이온에 의한 영향을 조사해 본 결과 $Ca^{2+}$과 $Zn^{2+}$에 의해서는 저해되지만 $Mg^{2+}$와 $Fe^{2+}$에 의해서는 저해를 받지 않았다.
본 연구는 9종의 국화과 식물을 대상으로, 생리적 특성 및 생화학적 물질을 관찰함으로써 내건성식물을 선발하였다. 크기와 생장이 균일한 식물체를 선발한 후, 단수처리를 통하여 건조 스트레스를 유발하였다. 내건성식물 선발을 위해 엽록소함량, 엽록소함량, 상대수분함수량, 상대수분손실량, 프롤린, 환원당을 단수일로부터 30일동안 관찰하였다. 식물 생존율은 단풍취, 벌개미취, 참취, 좁은잎구절초 순으로 높게 나타났고, 나머지 5종은 고사하였다. 내건성식물 선발을 위한 나머지 요인들은 높은 생존율을 얻은 식물종을 기준으로 판단되었다. 그러나 엽록소함량은 단풍취, 단양쑥부쟁이, 벌개미취 순으로 높은 값을 보여, 단풍취와 벌개미취를 제외하고는 생존율과 연관성을 갖지 않는다고 판단되었다. 반면에 상대수분함수량, 상대수분손실량, 프롤린, 환원당에서는 참취, 단풍취, 벌개미취 3종이 상대적으로 높은 내건성식물로 판단되었고, 생존율과도 비슷한 연관성을 나타내었다. 결론적으로 국화과 식물 9종 중 참취, 단풍취, 벌개미취 3종이 상대적으로 내건성이 높다고 판단되었다.
SAMP6의 성별 및 가령에 따른 생물학적인 특성을 알아보기 위하여 3, 5, 18개월령의 SAMP6 암컷, 수컷의 체중, 장기중량, 혈액학적 및 혈액생화학적 수치, 골의 무게, 비중, 두께 및 골의 화학적 분석을 위해 인과 칼슘을 측정하였다. 1. 체중은 수컷에서 7개월령부터 감소를 나타내었으나, 암컷은 18개월령부터 체중이 감소되기 시작했다. 장기중량을 보면, 간, 신장, 폐의 중량은 수컷이 암컷보다 무거웠으며, 흉선은 암컷이 수컷보다 무겁게 나타났다. 2. 혈액학적 및 혈액생화학적 검사결과 백혈구수가 수컷이 암컷보다 높게 나타났으며, 적혈구수는 암컷이 높게 나타났다. GOT는 5, 7개월령에, BUN은 전체개월령에서 수컷이 암컷보다 높게 나타났다. alkaline phosphatase 활성은 3개월령과 비교하여, 전체 개월령에서 유의성있는 감소가 관찰되었다. 3. 골두께를 측정한 결과 대퇴골에서 암수 모두 7개월령 부터 골두께의 급격한 감소가 나타났다. Cortical thickness index를 측정한 결과 대퇴골에서 암수 모두 5개월령에서 최고치에 다다랐으며, 이후 계속 감소하였다. 4. 골의 칼슘량을 정한 결과, 대퇴골에서 암수 모두 5개월령에 칼슘량이 최고치에 달했으며, 이후 계속 감소하였고, 인량은 수컷에서 5개월령, 암컷에서는 7개월령에 최고치에 달하였고, 이후 계속 감소하였다. 결론적으로 본 실험에서 사용한 골다공증 모델동물인 SAMP6의 특성발현은 5개월 이후 동물에서 나타나고 있으며 따라서 이들 동물을 골다공증 약물 개발을 위한 약효검색에 이용할 때에는 5개월령 이후 7개월령의 동물을 사용하는 것이 바람직하며 본 실험에서 유의성 있는 특성발현이 나타난 골 두께 및 골의 칼슘과 인량, alkaline phosphatase 활성 측정등을 약효 검색에 사용할 수 있을것으로 사료된다.
본 연구에서는 S. iniae의 병원성 요인으로 작용할 수 있는 capsule의 존재 여부를 확인하고 그에 따른 capsule과 병원성과의 상관 관계를 조사하였다. 즉, 집락의 형태학적 특성에 따라 viscous form (V+)과 non-viscous form (V-)의 균주로 구분하여 그 특성을 비교 분석하였다. 분리균의 생리학적 및 생화학적 특성으로는 숙주의 방어 기작에 대한 저항성이나 병원성 차이를 구분할 수 없었으나 형태학적으로 큰 차이를 있음을 알 수 있었다. 즉, V+인 경우 cell wall 표면에 capsule이 존재하지만 V-에서는 capsule이 존재하지 않는 것으로 확인되었다. V+는 넙치 혈청에서 증식할 수 있지만 V-는 넙치 혈청에 의해 살균되는 것으로 나타나 capsule의 유무에 따라 넙치의 체액성 면역 요소에 대한 저항력에서 차이가 나는 것을 알 수 있었다. 또한, V+는 넙치 신선 혈청으로 감작한 경우에도 V-에 비해 macrophage의 식균율이 낮았으며 식균된 이후에는 균 수가 지속적으로 감소하는 것을 확인할 수 있었고 일반 어류 주화 세포 내로 침입하여 생존 및 증식할 수 있는 것으로 나타났다. 이들 결과는 앞으로의 백신 개발에 유용한 기초 자료로 사용될 수 있을 것으로 사료되었다.
영남지방 5개 농장에서 사육중인 돼지 251두의 폐렴병소로부터 P. multocida를 분리한 결과 91주의 P. multocida가 분리되어 분리율은 36.3%로 나타났다. 생화학적 특성을 조사한 후 PCR로 최종 확인한 결과 P. multocida species-specific 유전자 460 bp의 특이 증폭산물을 관찰하였다. 분리균 91주의 P. multocida에 대한 약제 감수성 검사 결과 amikacin (91.2%), cephalothin (87.9%), cefoxitin (84.6%), florofenicol (93.4%), norfloxacin (65.9%), ofloxacin (80.2%) 등의 약제에 비교적 높은 감수성을 나타내었다. 또한 대부분의 분리주는 5종 이상의 약제에 대해 다재 내성 양상을 나타내었다.
S. cerevisiae에서 glucoamylase 유전자의 promoter와 signal sequence 그리고 MF$\alpha$1의 prosequence를 이용하여 합성 곤충 defensin를 발현하고 항균활성을 보유한 형태로 분비하는데 성공하였다. Defensin의 여러 생화학적인 특성을 조사한 결과 열 안정성이 높아 10$0^{\circ}C$에서 30분간 가열하여도 항균활성을 온전히 유지하였으며 조사한 pH 영역, 2.0-12.0에서 항균활성의 변화가 없었다. 또한 여러 단백질 분해효소를 처리하면 항균활성이 완전히 사라졌으나 전분질 분해효소, 섬유소분해효소 및 지질분해효소의 처리는 항균 활성에 전혀 영향이 없었다. 황산암모늄침전, SP-Sepharose column cormatography, RP-HPLC 등의 조작을 통해 defensin을 순수한 형태로 정제하였으며 Tricine-SDS-PAGE를 통해 분자량이 약 4.0 kDa임을 확인하였고 정제한 defensin은 항균활성을 보유하였다.
유류오염 토양으로부터 디젤에 대한 분해능이 있는 균주를 순수분리하였고, 이들 분리 균주의 액체 배양을통하여 균체 생육과 유화활성이 우수한 균주를 최종적으로 선별하였다. 생리,생화학적 특성 및 165 rDNA 염기서열 분석을 실시한 결과, Pseudomonas sp.로 분류 되었으며, Pseudomonas sp. GENECO 1으로 명명하였다. Bioscreen C를 이용하여 디젤 분해를 위한 배양 조건을 조사한 결과 최적 배양온도는 $30^{\circ}C$, 초기 pH는 7.0로 나타났다. Gas chromatography를 이용한 배양 시간별 잔류 디젤 성분분석 결과 96시간 이내에 1.0%의 디젤을 95%이상 분해하였다.
These experiments were carried out to investigate of the molecular characteristics of porcine zona pellucidae and to examine the reactivity of anti-zona antibody by SDS-PAGE, Immunoblotting and Immunoprecipitation. The results obtained in these experiments were summarized as follows : 1. The result obtained by SDS-PAGE of porcine zona pellucidae indicated that it composed of several units with molecular weight ranging 55,000-110,000. 2. In order to see the reactivity of antibodies to zona pellucidas, immunoblotting was applied. The results indicated that polyclonal antibodies to porcine and mouse zona reacted with porcine zona. While monoclonal antibody to porcine did not react with the procine zona enough to show a clear band on a gel. 3. Labelling of porcine zonae with 125I was performed using the Iodogen method, the radioactivity and the percent incorporation of 125I into porcine zonae were approximately 26,000 cpm/10${mu}ell$ and 16, respectively. 4. Measurements of radioactivity and O.D value for Immunoprecipitates produced by reaction of 125I-porcine zona with anti-zona antisera were confirmed that existence of reactivity of monoclonal antibody to porcine zona although its reactivity was lower than that of polyclonal antibodies, and reconfirmed that cross-reactivity of polyclonal antibody of mouse zona with porcine zona.
Lactobacillus sporogenes를 NTG로 처리하여 rifampicin에 내성인 돌연변이 균주를 얻었으며, 이중 58 종이 rifampicin에 현저한 내성을 보였다. 9종의 mutants를 선발하여 그 생화학적 특성을 검토한 결과, 포자형성능, 산생성능, E. coli 생육억제능 면엣 parent와 유사한 특성을 나타내었다. In vitro 시험을 통해ㅐ, 내성균주들에 의해 rifampicin이 불활성화 되지 않음이 밝혀졌다. 따라서 이들 mutants를 유산균 제제원으로 사용할 수 있으며, 그 제제는 rifampicin과 병용투여시, 효과적인 정장제로 사용될 수 있을 것으로 사료된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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