본 연구는 고급 장류인 궁중간장과 한식간장 및 시판 개량 간장의 갈변도, 총 phenol 함량, SOD 유사활성, 항균활성, 혈전용해능, ${\alpha}$-glucosidase 및 lipase 억제효과를 한외여과기로 분획된 1,000 이하 저분자 물질과 1,000 이상 고분자 물질의 분획물을 이용하여 in vitro에서 측정하였다. 분자량이 1,000 이하 및 1,000 이상 궁중간장류의 분획물의 갈변물질에 따른 갈변도는 각각 $0.101{\pm}0.001\sim0.206{\pm}0.006$과 $0.486{\pm}0.145\sim02.503{\pm}0.008$ 범위 흡광도 값을 보였으며, 궁중간장류 중 꽃장의 갈변도가 가장 높았다. 총 페놀 화합물 함량에 있어서, 분자량 1,000 이하 궁중간장류 분획물은 $101.55{\pm}1.49\sim0114.00{\pm}0.11$ mg/L 범위에서 측정되었으며, 이는 일본 및 중국에서 제조된 시판 개량간장에 비해 높았다. 그러나 분자량이 1,000 이상의 분획물에서는 일본 및 중국에서 제조된 시판 개량간장들보다는 낮았다. 궁중간장류의 항산화 활성은 대부분 1,000 이하 분획물 시료에서 평균 51%의 SOD 유사활성을 보였으며, 한식간장과 시판 개량간장들보다 높게 나타났다. 혈전용해능 및 항균활성에 있어서는 본 연구에 사용된 모든 간장 분획물 시료에서는 뚜렷한 결과를 얻지 못했다. ${\alpha}$-glucosidase 저해활성은 분자량이 1,000 이하의 분획된 궁중간장류는 $6.34{\pm}1.51\sim8.79{\pm}0.81$% 범위에서 저해활성을 보여 한식간장과는 유의적인 차이가 없었으나 시판 개량간장들보다는 약 2.9배 높은 유의적 차이를 보였다. 분자량이 1,000 이상의 분획물은 꽃장(75%)을 제외하고는 평균 약 6.7%로 한식간장 및 국내 제조 개량간장들과는 유의적 차이가 없었다. 분자량 1,000 이하 및 이상 분획된 간장 시료들로부터 lipase 저해활성은 시판 개량간장들에서는 거의 볼 수 없었으며 대부분 궁중간장인 청장, 덧간장, 진장, 어육간장 시료들에서만 lipase 저해활성을 확인할 수 있었다.
1. 서론 : 분석화학의 중요한 과제중 하나 고효율(high efficiency)과 고해상도(high resolution)를 가지고서 혼합물에서 분자나 입자의 분리능을 개선하는 것과 낮은 수준의 농도에서 이런 분획들(fractions)을 정량화 하는 것이다. 현재의 추세는 분리하고자 하는 분자의 상한선을 증가시키는 것이 순수과학과 산업에서 중요하게 되었다. 이런 분리 기술의 응용은 거대분자(macromolecules)와 입자들(particles)인 cell fragments, plasmides, chromosomes, liposomes, synthetic polymers 등에 적용되고 있는데, 고전적인 분석방법으로는 한외여과, 원심분리, 크기배제 크로마토그래피 등이 있지만 시간이 걸리고 해상도와 효율에 제한이 있다.
멸치액젓으로부터 항산화활성을 가지는 물질을 분리하기 위하여 용매추출 및 chromatography를 행하였다. 모든 용매분획들에 항산화활성이 있었으며 그 중 BuOH층과 수용액층이 소금을 함유하고 있었으나 항산화활성이 우수하였다. 수용액층을 투석막(MWCO 1000)으로 증류수에 대하여 투석하였을 때 투석막 내액의 항산화활성이 소실되었으므로 멸치액젓의 항산화성 물질은 분자량 1000이하의 분자량을 가진 것으로 추정하였다. Sephadex G-50 gel filtration chromatography에서 얻은 항산화물질 분획(tube No. 230-245)로 DE-52 anion exchange chromatography를 행한 결과 column에 결합하지 않고 흘러나온 분획(0 N NaCl용액) 및 0.05N NaCl용액으로 용출된 분획에서 항산화활성이 있었으나 $15\;{\mu}M$의 $Fe^{+++}\;ion$의 존재하에서 0 N NaCl 분획만 항산화활성이 유지되었다. Biogel P2 chromatography를 행한 결과 3번과 5번 분획의 항산화 활성이 특히 우수하였으며 TLC확인결과 아미노기가 풍부한 분자들임을 알 수 있었고 아미노산 조성을 분석하였을 때 다른 분획들보다 3번과 5번 분획에 소수성 아미노산이 많이 함유되어 있었다. TLC로 분리하여 항산화활성이 우수한 하나의 band를 HPLC의 C18 column으로 분석하였을 때 3개의 peak 중 항산화활성을 갖은 물질은 methionine 유도체이었으며 이는 멸치젓 수용액층의 많은 항산화물질 중 하나로 여러 아미노산 또는 oligopeptide의 유도체들의 상승효과가 멸치액젓의 항산화성을 유지하는 것으로 사료된다.
본 연구에서는 보다 간단하고 신속한 공정으로 생산량 증가 및 비용절감을 도모할 수 있는 한국형 복분자 발사믹 식초 생산공정 개발을 위한 증류과정 도입가능성을 알아보았다. 증류과정을 통해 생산된 농축식초분획의 발사믹식초로서의 활용가능성과 증류식초분획의 증류식초로서의 활용가능성을 파악하기 위해 증류과정에서 얻어진 식초 분획을 대상으로 총산도, 산도pH 및 비중을 측정하였다. 총산도가 서로 다른 4종류의 식초(총산도; 4.42, 4.84, 5.61, 및 6.35)를 60%까지 증류했을 때 농축식초분획의 총산도는 증류 전 식초보다 평균 38.1% 증가하였다. 특히 최종 농축식초분획의 총산도 및 산도pH는 발사믹식초와 유사한 것으로 나타났다. 한편 증류식초분획 역시 총산도가 증가하여 최종 분획의 총산도는 각각 4.41%, 4.95%, 5.88%, 및 6.72% 이었으며 증류식초로 활용이 가능할 것으로 판단되었다. 본 연구에서는 증류공정을 통해 식초를 효과적으로 농축시킬 수 있을 뿐 만 아니라 동시에 증류식초를 생산할 수 있음을 확인하였다. 그러나 식초분획별로 유기산 함량 및 항산화활성 측정 등 추가적인 생화학적 특성 분석이 이루어져야 증류공정 도입여부를 결정할 수 있을 것으로 사료된다.
$(1{\rightarrow}4)-{\beta}-{\small{D}}-mannopyranosyl$ 골격에 $(1{\rightarrow}6)-{\alpha}-{\small{D}}-galactopyranosyl$ 곁사슬을 갖는 직선사슬로 구성된 다당류로 강한 점성을 나타내는 타라검을 황산암모늄 침전법을 사용하여 분획하였다. 황산암모늄 농도에 따라 얻어진 침전물을 원심분리 및 투석 후 동결상태에서 건조시켜서 첫 번째 분획물을 얻고 동일한 방법으로 각 단계별 분획물을 얻어 F1, F2, F3, F4, F5, F6으로 표기하였다. 각 분획물들의 묽은 농도범위 0.05 g/dL 이하에서 우베로드 점도계로 흐르는 시간을 측정하여 본성 점도를 구하였으며 그 값은 F1: 12.24, F2: 9.38, F3: 12.44, F4: 11.14, F5: 10.51, F6: 10.17dL/g이었다. F1과 F2 분획물이 갖는 본성 점도는 기대 값보다 작았고 그 원인은 단백질 성분이 비교적 많이 포함되어 분자 간 상호작용으로 생긴 용해도에 미치는 영향으로 판단되었다. 또한 고분자 물질의 용질-용매간의 상호작용과 응집상태에 의존하는 상태를 나타내는 Huggins 계수(k')값을 측정한 결과 점도 값이 클수록 k'값이 커지는 경향을 나타내었다. 원뿔 평판 점도계로 겉보기 점도를 측정하여 전단속도가 증가함에 따라 점도가 감소하는 전단 묽어짐 현상을 확인하였다. SEC 측정으로 중량평균 분자량, 수 평균 분자량, 회전 반경 및 본성 점도 값들이 $c_p=0.5mg/mL$, dn/dc=0.145의 RI 피크면적으로 계산되었다. 본성 점도 값은 F3:1 0.93, F4: 10.01, F5: 9.33, F6: 9.33 dL/g이었고 Mw: 658.52-776.71, Mn: 318.04-495.78 및 Mz: 952.74-1126.00 kg/mol이었다. 타라검 분획물들의 분자량과 유변학적 성질에 관한 연구로부터 화학물질에 대한 안정제 및 식품첨가제로서의 효과를 높이고 점성 강화제로 사용되는 범위가 확대될 것으로 기대된다.
차가버섯 분획물의 항산화활성과 유전독성 억제효과를 규명하기 위하여 차가버섯으로부터 조다당, 불용성 조다당 I과 II를 각각 추출하였으며 그 여액에서 저분자 물질과 에틸 아세테이트, 물 분획물을 얻었다. 얻어진 시료들은 DPPH free radical 소거능으로 항산화 활성을 측정하였으며, 마우스를 이용한 소핵실험으로 유전독성 억제효과를 검토하였다. 실험결과, 에틸 아세테이트 분획물의 RC$_{50}$ 이 46.5 $\mu\textrm{g}$으로 월등히 높았으며, 물 분획물과 수용성 다당도 각각 78.3$\mu\textrm{g}$과 77.4$\mu\textrm{g}$으로 다른 분획물에 비해 높은 항산화 효과를 나타내었다. 그리고 유전독성 억제효과에서는 양성대조군에 비하여 최고 농도인 80 mg/mg에서 저분자 물질과 에틸 아세테이트 분획물, 물 분획물, 수용성 다당 그리고 불용성 다당 I 및 II에서 각각 63.9%, 72.2%, 63.9%, 88.9%, 80.6% 그리고 81.5%의 소핵생성 억제효과를 나타내었으며 다당 분획물들이 80% 이상의 높은 억제율을 나타내었다.
홍삼 물 추출물이 효소활성에 미치는 영향을 조사하기 위하여 먼저 홍삼분말에 methyl alcohol을 가하여 지용성 성분과 사포닌 성분을 추출하여 제거하였다. 그 잔사에 정제수를 가하여 추출한 뒤 추출물을 제조하였고, 투석막을 이용하여 분자량 크기별로 분획한 뒤 trypsin의 활성에 미치는 영향을 조사하였다. 몇 가지 분획 중에서 분자량 1,000∼12,000 사이의 분획이 trypsin 활성을 가장 강하게 증가시켰다. 분자량 1,000∼12,000 사이의 분획을 여러 가지 농도별로 첨가하여 trypsin 활성에 미치는 영향을 조사한 결과 2.9${\times}$$10^{-3}$%에서 15% 정도 촉진되었으며, 농도가 높아질수록 trypsin 활성도 증가하여 9${\times}$$10^{-2}$%에서 최고의 활성을 보이다가 그 이상의 농도에서는 감소하였다. Trypsin의 casein 분해에 있어서 물 추출물은 Km 값을 낮게하고 Vmax 값은 증가기켰다. 물 추출물을 부분 정제하여 몇 가지 특성을 조사한 겨로가 ninhydrin, DNS 및 Folin시약에 양성반응을 나타내는 것으로 보아 함질소 화합물이라고 판단된다.
본 연구는 흑미(복합)발효물 및 분획물의 항산화 성분(총페놀, 총플라보노이드 및 proanthocyanidin)을 측정하였고 또한, 다양한 in vitro 모델을 이용하여 항산화 활성을 평가하였다. 항산화 활성은 DPPH 라디칼 소거능, ABTS 라디칼 소거능, reducing power 및 FRAP을 이용하였고 아질산염 소거능도 평가하였다. 저분자 분획물은 흑미(복합)발효물 및 고분자 분획물에 비해 유의적으로 높은 항산화 활성을 나타내었다. 흑미(복합)발효물 및 분획물 중에서, 저분자 분획물의 총페놀, 총플라보노이드 및 proanthocyanidin 함량은 각각 $109.2{\pm}2.9$ mg GAE/g, $39.4{\pm}0.8$ mg RE/g 및 $32.9{\pm}1.4$ mg CE/g으로 흑미(복합)발효물 및 고분자 분획물에 비해 높은 함량을 보였고 이들 항산화 성분들은 저분자 분획물의 항산화 활성과 유의적인 상관관계를 보였다. 건강증진에 대한 소비자들의 높은 관심도를 고려해 볼 때, 흑미(복합)발효물 및 분획물은 건강기능식품, 건강증진 및 의약품 소재로서 이용이 가능할 것으로 사료된다.
모유성분을 고분자분획(20KD 이상 분자)과 저분자분획(20KD 이하 분자)으로 나누어 항산화력을 검토한 결과, 고분자분획이 저분자분획 보다 더 강력한 항산화력을 나타내었다. 이 모유의 항산화력은 주로 20KD 이상에 존재하는 항산화 효소에 기인할 가능성이 시사되어 모유의 채유 기간에 따른 항산화 효소를 비롯하여 protein-SH와 nonprotein-SH를 검토한 결과, catatase는 7일째 현저히 저하한데 비해 GSH peroxidase, GSH S-transferase는 7일째를 전후로 현저히 증가한 후 감소하는 경향을 나타내었다. Protein-SH는 채유 기간에 따라 차츰 감소하였으나 nonprotein-SH는 20일째 peak를 이루고 그 후 감소하였다. 이상의 결과로 부터 모유의 고분자분획은 강력한 항산화력을 나타내었으며, 이 항산화력은 catalase, GSH peroxidase 및 GSH S-transferase 등의 항산화 효소 활성에 기인할 것으로 사료된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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