The potency of adventitious root initiation was investigated in relation with germination days and ike end of culture days healed with root induction medium on the initiation of adventitious roots from explants of soybean (Glycine max L.) cotyledon. Also, the changes in the pattern of protein profiles related with adventitious mot initiation have been examined by two-dimensional polyauyl-amide gel elecoophoresis during the germination and the initiation of adventitious roots. The potency of adventitious root initiation from germinated cotyledons was high after 4 days, and adventitious roots were initiated from after 4 days and very high after 6 days healed with mot induction medium There was a reproducible quantitative change in 34 specific protein spots during germination and adventitious root initiation. A necessary basic protein for adventitious root initiation with rotative molecular weight of 27 kD was induced during the germination. And three basic protein groups with relative molecular weight 22 kD, 23 kD and 33 kD, and two acidic protein groups with relative molecular weight 27kD and 29 kD were induced during the initiation of adventitious roots.
The patterns of adventitious root formation from cotyledons for each cultivar of soybeans were compared. The results of adventitious root formation in cultivars are classified as two groups; the first group showed the direct adventitious root formation, and the second group resulted in the callus and adventitious root formation. The cultivars that have much callus formation had less the adventitious root formation. The adventitious root formation in the cotyledonary explants was occured only at the inoculation of adaxial side. When adaxial and abaxial side was inoculated simultaneously, the adventitious roots were formed at the adaxial side. Thus, it suggests that there must be direction to some extent. Starch in the cotyledonary explants were more abundant at the 4 days after induction than at the early stage of the adventitious root formation, but the starch was not observed after 7 days, that the growth stage of adventitious roots.
In order to survey anthraquinone productivity from in vitro root culture, transformed hairy roots of Rumex crispus were induced from leaf segments by infection with Agrobacterium rhizogenes strain $A_4$ and compared with adventitious roots. The optimum condition of adventitious root formation from leaf segments was 5 $\mu$M NAA added to MS medium. Mannopine was detected in the extract of hairy roots by paper electrophoresis, but not in adventitious roots. Secondary root tips of both adventitious roots and hairy roots elongated without lateral root branching in hormone free MS medium, but primary root tips showed more rapid growth with extensive lateral root branching. MS basal medium was the best for growth of the adventious roots and hairy roots for anthraquinone content. Adventitious root tips and hairy root tips cultured in liquid MS medium supplemented with 0.05 $\mu$M NAA and 0.1 $\mu$M kinetin (contained 5% sucrose) showed the maximal growth and anthraquinone content. Anthraquinone content of hairy roots was increased by the culture periods, but was reduced after 25 days of culture.
Three-day-old sunfower(Helianthus annuus L.) seedlings were do-rooted and incubated in the nutrient solutions that contained either deficient or sufficient boron supply, and exposure to various pH and temperatures. In the absence of boron, no adventitious roots were formed in the majority of the seedlings. Boron caused the development of numerous adventitious roots in the lower part of the hypocotyl. The low pH damage was ameliorated by the simultaneous application of calcium, implying the involvement of calcium-requiring process in overcoming proton toxicity. Borate showed a strong ameliorative effect with $Ca^{2+}$. These results suggest that the primary target of proton toxicity may be linked to a disturbance of the stability in the pectic polysaccharide network, where calcium plays a key role in plant roots. Maximum temperature for the growth of adventitious roots was $25^{\circ}C$. Although cessation of growth is the most apparent symptom of boron deficiency, exogenous ascorbate improved adventitious root growth in plants in the absence of boron. From the results it is suggested that the inhibition of adventitious root resulting from boron deficiency, low pH and temperature damage may be a consequence of disrupted ascorbate metabolism.
Proceedings of the Plant Resources Society of Korea Conference
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2010.10a
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pp.19-19
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2010
황칠나무(Dendropanax morbifera Lev.)는 두릅나무과(Araliaceae)에 속하며 학명에서 뜻하는 바와 같이 목본 (Dendro), 전능약(Panax)이라는 의미가 있고 나무인삼이라 불리기도 하며 줄기에 상처를 내면 노란액이 나온다고 해서 황칠나무(D. morbifera)라는 이름이 붙여졌다. 두릅나무과는 우리나라에서 최고의 약재들로 손꼽히는 인삼(Panax ginseng), 가시오갈피(Eleutherococcus senticosus) 등의 약용식물을 포함하고 있어서 황칠나무는 황칠수지액 이외에 약용식물로서의 무한한 개발 가능성을 내포하고 있다. 따라서 본 실험은 황칠나무의 기내 부정근 유도 및 증식조건의 확립을 목적으로 수행되었다. 우선 황칠나무의 기내 발아체로부터 부위(잎, 줄기, 뿌리)를 달리하여 부정근을 유도한 결과, 잎은 줄기나 뿌리보다 양호한 부정근의 유도를 보였다. 또한 유도된 부정근을 이용하여 옥신의 종류에 따른 부정근 유도율을 조사한 결과 IBA와 NAA는 IAA와 2.4-D보다 높은 유도율을 보였다. IBA의 농도에 따른 유도율과 증식효율은 IBA가 1.0 mg/L 첨가되었을 때 가장 높은 유도 및 증식효율을 보였다. 최적의 액체배지조건을 확인하고자 sucrose의 농도와 염농도를 달리하여 실험한 결과 1/2MS 배지는 MS 배지보다 10%정도 높은 증식율을 보였다. 액체배양 된 황칠나무의 부정근을 각각 1/2MS 배지에 30 g/L sucrose, 3.0 mg/L IBA가 첨가된 5 L volume 생물반응기에 4주 간 배양한 대조구와 2주 후 IBA의 농도를 1.0으로 낮추어 배양한 실험구에서 2주후 IBA의 농도를 낮추어 배양한 실험구에서 대조구보다 약 2배 높은 부정근의 증식량을 보였다. 결국, 황칠나무의 종자발아체를 이용하여 부정근의 유도 및 증식조건에 필요한 기내배양조건을 확립하였고, 플라스크와 생물반응기 배양을 통해 효율적인 실험실 내 증식조건을 확립하였다. 본 실험결과는 향후 황칠나무 천연추출물을 활용한 향장품/식,의약품 소재의 대량확보 차원에서 중요한 가치를 내포하고 있다고 조심스럽게 사료된다.
In order to study the role of polyamines on the formation of adventitious roots, trichomes and calli, the effects of putrescine, spermidine, spermine, cyclohexylamine (CHA) and methylglyoxal-bis(guanylhydrazone) (MGBG) were investigated in the leaf segment cultures from ecotype Columbia of Arabidopsis thaliana. When the leaf segments were cultured on the media for forming adventitious roots (0.1 mg/L NAA), trichomes (2.0 mg/L NAA) and calli (10.0 mg/L NAA), and then each cultures was treated with 1-100 mg/L of putrescine, spermidine and spermine, respectively. On the adventitious root-forming medium treated with polyamines the trichomes were induced with adventitious roots. And on the trichome-forming medium with polyamines calli were induced with trichomes. In orther hand each cultures was treated with 1-100 mg/L of CHA and MGBG, respectively. CHA promoted adventitious roots on the medium for adventitious roots, was not effected on media for trichomes and calli. MGBG inhibited adventitious roots, trichomes and calli in all cultures, and induced adventitious roots on medium for trichomes in high concentration.
In order to study the effect of cyclohexylamine (CHA) and polyamines during adventitious root formation, the correlation of adventitious root formation with endogenous polyamine content was investigated in inoculated soybean cotyledons at the rooting medium supplemented with CHA, spermidine and spermine. Adventitious root formation was inhibited in medium containing 10$^{-3}$ -10$^{-2}$ M CHA. Adventitious root formation was not formed in treatment with 10$^{-2}$ M CHA plus polyamine. It was inhibited in 2.5 $\times$ 10$^{-3}$ M CHA alone and reverved in 2.5 $\times$ 10$^{-3}$ M CHA plus 10$^{-4}$ M spermine. Putrescine content was lower in 10$^{-2}$ M CHA and 10$^{-2}$ M CHAplus 10$^{-4}$ M spermine treatment than in control after 3 days of incubation. However, it was higher in 2.5 $\times$ 10$^{-3}$ M CHA and 2.5 $\times$ 10$^{-3}$ M CHA plus 10$^{-4}$ M spermine treatment than in control. Spermine content was higher in all CHA treatments than in control, while spermidine content was lower than in control.
In order to study on the effect of polyamine inhibitors and polyamines on adventitious root formation the correlation between adventitious root formation and polyamine levels were investigated in cultured soybean (Glycine max L.) cotyledons. Adventitious root formation was inhibited in medium containing 10$^{-4}$ -10/ sup -2/ M polyamine inhibition such as $\alpha$-difluoromethylornithine (DFMO), $\alpha$-difluoromethylarginine (DFMA), cyclohexylammonium sulfate (CHA), dicyclohexyl-amine (DCHA) and methylglyoxal-bis (guanylhydrazone) (MGBG). An inhibitory effects at 10$^{-3}$ M MCBG were much higher than other treatments. Treatment with 10$^{-3}$ M MGBG plus 10$^{-5}$ M spermine led to reversal of the effects of MGBG alone. The polyamine levels were sharply increased in the first few days in each treatnent compared to control. The remarkably increasing polyamine contents were observed in medium supplemented spermine.
This paper reported the establishment of mass production system of adventitious roots of Codonopsis lanceolata through shake flask and bioreactor culture. Induction of adventitious roots was started from the explants of leaf, stem and root on 1/2 strength Murashing and Skoog (MS) solid medium. Stem segments were the best explants for induction of adventitious roots compared to leaf and root segments. Among the different auxins tested (NAA, IBA and IAA), number of adventitious root per explant was highest on solid medium with 1.0 mg/L IBA, and produced $9.9{\pm}1.2$ roots per explant. However, growth of adventitious roots was fast in the presence of IBA at low concentration (0.1 mg/L). In shake flask culture, maximum production of adventitious roots (fresh weight) was obtained in half-strength MS medium compared to full-strength and one-third MS medium. When the adventitious roots produced in shake-flask culture were transferred to 5 L air-lift bioreactor, 16 times of fresh weight increase was gained after one month of culture. These results indicate that this protocol for the production of C. lanceolata adventitious roots can be applied to large scale culture for practical application.
This study was carried out to investigate the action of phytohormones which influence the adventitious root formation of calli originating from the leaves of Persicaria perfoliata. The optimal medium condition for callus formation was ½-strength MS, 1% sucrose, and 4.5 μM 2,4-D. In order to determine which phytohormones had an effect on the adventitious root formation, the calluses were cultured in various media with different kinds of phytohormones. As a result, the medium with GA3 or IAA was shown to induce root formation. To deeply investigate the effects of GA3 and IAA, calli were cultured in 0.1, 1, and 10 mg/l levels of phytohormones. Numbers of roots formed per callus were 10.9, 14.2, 22.6 in GA3, 5.8, 3.9, 1.1 in IAA, respectively. Therefore, the higher GA3 or the lower IAA concentration, the more roots formed. To confirm this role of GA3 we tested with inhibitors PBZ and NPA. GA3 with PBZ resulted in reduction by 52.4~69.4% compared to GA3 alone. In contrast, GA3 with NPA resulted in an increase by -8~45.6% compared to GA3 alone in root formation. Also, results were determined on the effect of GA3 with other phytohormones on root formation. Kinetin, 2iP and ABA with GA3 had a negative effect, but IAA with GA3 showed a similar result to GA3 alone. From these results we infer GA plays a key role and auxin has subsidiary activity on adventitious root formation. This is the first report that indicates GA3 promotes adventitious root formation from calli in P. perfoliata.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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