본 연구는 0.5ml straw를 이용한 정자 동결융해 시 응해 온도가 동결정자의 성상에 미치는 영향을 파악하고 미니 돼지의 동결정액에 최적화된 적정 응해 조건을 찾기 위하여 실시하였다. 정액동결 straw를 37, 50 및 $70^{\circ}C$에서 각각 5초, 10초 및 45초간 융해하여 생존율(SYBR-14/PI staining), 정자원형질막기능검사 (Hypoosmotic Swelling Test) 및 첨체반응율(CTC : chlorotetracycline staining)을 검사 한 결과, $70^{\circ}C$에서 5초간 융해한 정자의 생존율과 CTC 결과가 $37^{\circ}C$와 $50^{\circ}C$에서 10초 및 45초간 융해한 처리구보다 유의적(p<0.05)으로 높은 생존율과 낮은 비율의 첨체 반응율을 얻었다. 따라서 미니돼지의 동결 정액은 고온에서 단시간 융해를 하는 것이 정자의 성상에 유리한 것으로 사료된다.
미니돼지에서 정상 방사선 해부학과 배설성 기능을 평가하기 위해 배설성요로조영술을 실시하였다. 오른쪽 신장과 왼쪽 신장은 각각 $T13{\sim}L4$, $T12{\sim}L3.5$에 위치하였으며, dhlsWHr 신장이 dhfmsWHr 신장보다 두측에 존재하였다. 신장의 길이와 너비는 복배상에서 각각 $8.50{\pm}0.58$$(mean{\pm}SD)$, $4.30{\pm}0.39$ cm 이었다. 외측상에서 각각 $8.70{\pm}0.76$, $4.10{\pm}0.40$ cm 이었다. 신장의 길이는 너비의 약 두 배이었다. 두 번째 요추 몸퉁의 길이와 신장의 길이를 비교하였을 때, 복배상에서는 그 비율이 $3.62{\pm}0.30$, 외측상에서는 $3.63{\pm}1.10$로 측정되었다. 신우의 길이와 너비는 각각 $4.01{\pm}0.46$, 2.20{\pm}0.41$ cm 이었다. 콩팥잔의 길이와 너비는 각각 $0.49{\pm}0.06$, $0.10{\pm}0.01$ cm 이었다. 요관의 길이와 너비는 각각 $12.25{\pm}2.05$, 2.94{\pm}0.86$ cm 이었다. 콩팥조영사진은 3{\sim}5$분에 관찰되었고, 신우조영사진은 $5{\sim}15$분에 관찰되었다. 배설성요로조영술은 미니돼지 비뇨기계의 정상 방사선학적 해부와 배설성 기능에 대해 전반적으로 평가할 수 있는 간단한 방법이다.
A 7-month-old, female miniature pig was presented with excessive cerumen and pruritus. Greasy brown cerumen in both exteranal ear canal and sporadic head shaking were observed in the physical examination. Numerous budding yeasts in the cerumen were examined on microscopic examination. For species identification, PCR-RFLP using incubated colony on modified Dixon's medium was performed and finally, causative yeast was identified as M. furfur.
This study was conducted to compare the aspects of behavior between miniature pigs and conventional sows during gestation and lactation periods. Miniature pigs and conventional sows at 3 parity were used in this experiment with 4 pigs per treatment. The behavioral patterns and stereotyped behaviors were observed on day 60 and 90 of gestation, at farrowing, and on day 10 of lactation before and after the feeding. On 60 and 90 days of pregnancy, both treatments showed the tendency of frequent lateral lying rather than other postures. On ventral lying, eating and drinking, miniature pigs spent more time than conventional pigs at day 90 of gestation (P<0.01, P=0.0539, P<0.05, respectively). The occurrence of stereotyped behaviors included bar biting and bar mouth chewing. At 90 day of pregnancy was observed, conventional pigs was higher than miniature pigs (P<0.05). At farrowing, miniature pigs spent more time on ventral lying, standing and walking than conventional sows (P<0.05), however, there were more frequency of drinking and eating. And on day 10 of lactation, there was no significant difference in stereotyped behaviors between miniature pigs and conventional sows. In conclusion, miniature pigs were generally more sensitive than conventional sows although sows were reared in stall during gestation and lactation period and the behavioral pattern during lactating period showed the similarity between miniature pigs and conventional sows for protection of nursing pigs. In consideration of the general reproductive performance of conventional sows, the high sensitivity and stress of miniature pigs did not affect the reproductive performance of miniature pigs.
방사선 노출에 따른 피부손상의 기본이론들은 정립되어 있지만, 정확한 기전에 관해서는 알려지지 않은 실정이다. 본 연구에서는 감마선 조사 후 용량 및 시간에 따라 돼지 피부의 장애를 육안 및 조직학적인 변화를 통해 평가하고 cyclooxygenase(COX)-2 발현 정도를 비교하고자 하였다. 미니돼지의 등 쪽 피부에 20-70 Gy 감마선을 국소조사 후 12 주 동안 육안적인 변화를 관찰하고 생검을 통해 조직학적인 변화를 관찰하였다. 방사선 조사 후 피부의 기저세포층에서의 세포자멸사와 표피층의 두께 변화를 평가하였고 COX-2 발현 정도를 면역염색을 통하여 비교하였다. 방사선 조사 후 피부 장애는 용량이 증가할수록 피부손상이 더욱 심하였으며 초기에 발적 소견을 보이다가 50 Gy 이상 조사군에서는 미란과 궤양으로 이어졌다. 조직학적인 변화는 육안적인 소견과 일치하였다. 방사선 조사 후 3일부터 기저세포에서 세포자멸사가 관찰되었으며 기저세포수의 감소가 유발되었으며 이러한 변화는 용량이 증가할수록 더욱 증가하였다. 방사선 조사 후 표피층의 두께는 3일 무렵에 일시적으로 증가하다가 점차 감소하였으며 20, 30, 40 Gy 조사 군에서는 다시 회복되는 소견이 관찰되었으나 50, 70 Gy 조사 군에서는 다시 회복되지 못하고 표피창의 두께 소실을 보였다. 방사선 조사 후 피부에서의 COX-2 발현은 피부손상정도와 일치하게 관찰되었다. 방사선 조사 후 COX-2 발현은 방사선의 용량이 증가할수록 발현이 증가하였고 시간이 증가할수록 증가하였다. 이러한 조직학적인 변화와 함께 방사선 손상을 일으키는 신호전달에 관여하는 COX-2 발현이 방사선조사 용량에 비례하여 증가하며 이러한 단백질의 발현은 피부손상과 관련성이 높은 것으로 사료된다.
무균돼지 생산을 위하여 임신 111일령에서 113일령 사이의 미니돼지 모돈 22두에 대하여 자궁적출술을 실시하였다. 모돈 14두에 대하여 Ketamine 50®과 CO2 가스를 사용하였고 모돈 8두에 대하여는 slaughter pistol을 사용하여 고정 한 후 복부 정중선을 절개하여 자궁을 적출하고 적출된 자궁을 다시 절개하여 신생자돈을 생산하였다. 1. Ketamine 50®을 0.09㎖/kg과 0.03㎖/kg 용량으로 주입하였을 경우 자궁적출까지 소요된 수술시간은 각각 146초와 283초로서 앞의 경우가 짧았지만, 생산된 신생자돈 1두가 완전히 소생되기까지는 427초와 64초가 소요되어 용량이 적을수록 자돈이 빠르게 활력을 회복하였다. 2. Ketamine 50®과 slaughter pistol을 사용하여 자돈 작출완료 까지의 수술경과시간은 각각 470초와 155초로서 slaughter pistol을 사용한 경우가 매우 짧았다. 3. 자돈의 생존율에 있어서는, Ketamine 50®을 사용한 경우에서 111두 중 93두(83.8%)를 소생시켰으나 slaughter pistol을 사용한 경우는 66두 중 64두(97%)를 소생시켜 훨씬 높아보였지만 통계처리 결과 유의성이 없는 것으로 나타났다. 4. 자궁적출술을 실시한 임신 111일령의 자돈의 폐사두수는 0.29두였고 임신 113일령의 자돈은 0.50두였으나 서로간의 유의성이 없었기 때문에 분만 3일전의 모돈도 자궁적출술을 이용한 무균돼지 생산에 아무런 문제없이 사용될 수 있을 것으로 판단되었다. 5. 자궁내 산자수가 많음에 따라 자돈작출에 시간이 더 소요되는 경향이 있었으나 자돈의 생존율과는 큰 관련이 없었다.
The purpose of this study is to investigate normal hepatobiliary functions in healthy miniature pigs. $^{99m}Tc-DISIDA$ hepatobiliary scintigraphy(HBS) was used for it. Five mCi dose of $^{99m}Tc-DISIDA$ was injected intravenously into 3 healthy adult miniature pigs, and dynamic images were obtained during 1 hour. $^{99m}Tc-DISIDA$ HBS in a miniature pig was evaluated for 6 variables. A cardiac washout occurred within 1 min in all miniature pigs and radioactivities in the gallbladder were not detected in two miniature pigs. Thus, the initial radioactivity and Tmax of the gallbladder were non-available to identify. Mean Tmax of liver was $8.67{\pm}2.08$ min and initial small intestinal radioactivity was seen at $9.67{\pm}2.52$ min after $^{99m}Tc-DISIDA$ injection. Mean hepatic washout time was not detected in 60 min dynamic images. Therefore, $^{99m}Tc-DISIDA$ HBS is the effective diagnostic method to evaluate the function of hepatocyte and bile flow rate. However, it was not a proper method to evaluate the function of gallbladder, which indicates that an additional study is needed to further specify the reasons for the absence of radioactivities in gallbladder of two miniature pigs.
Journal of the Korean Association of Oral and Maxillofacial Surgeons
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제34권6호
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pp.588-593
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2008
There are increasing reports regarding regeneration of the defected tissues using tissue engineering technique. In this technique, multipotential stem cells are essential. There are many potential sources of adult stem cells, such as bone marrow, umbilical cord blood, fat, muscle, dental tissues and skin. Among them, skin is highly accessible and easily obtained with a minimum of donor site complications. Moreover, skin is an abundant adult stem cell sources and has the potential for self-replication and immune privilege. In this study, we isolated skin-derived precursor cells (SKPs) from the ear of adult miniature pigs. In these SKPs, the expression of transcriptional factors, Oct-4, Sox-2, and Nanog were detected by RT-PCR. In vitro osteogenesis and adipogenesis were observed at 3 weeks after transdifferentiations as assayed by positive von Kossa and Oil-red O staining, respectively. In addition, expression of osteocalcin and osteonectin in the osteogenic differentiation medium and $PPAR{\gamma}2$ and aP2 in the adipogenic differentiation medium were detected by RT-PCR. In vitro neurogenesis of porcine SKPs was observed during 24 and 72 hours after treatment of neurogenic differentiation medium. The results of this study suggest that SKPs demonstrate the properties of pluripotence or multipotence and multi-lineage differentiation. This indicates that autogenous SKPs are a reliable and useful source of adult stem cells for regenerative medicine.
The main purpose of this study is to estimate the effect of adding Tea-N-Tris (TES) to the freezing buffer for miniature pig sperm. In particular, we attempted to identify the association between the MMPs expression and the fertility and viability of frozen sperm from each extender (LEY (Lactose Egg-Yolk), TLE (TES + LEY), TFGE (TES + Fructose + Glucose Egg-Yolk)). In accordance with this, Hypoosmotic Swelling Test (HOST) respond test was the lowest among sperms frozen in LEY while the highest HOST respond was observed among sperms frozen in TLE. Furthermore, we observed MMPs expression in all sperm groups, with pro-MMP showing lower expression than active MMPs. The expression of MMP-9 and MMP-2 was the highest in sperms frozen in LEY, Meanwhile, sperms from the TFGE and TLE group showed lower level of MMP-9 and MMP-2 expression in the order of TLE being the lowest. LEY group showed lower rate of blastocyst development than the TES supplement group, although the difference was not statistically significant. Meanwhile the rate of blastocyst development appeared similar when sperms from TLE and TFGE group were used for IVF. Together, these results indicate that adding Tea-N-Tris to the sperm freezing buffer only suppresses MMPs protein activation but also maximize in-vitro fertility, providing a means to improve the success rate in the in vitro manipulation of miniature pig sperm.
The objective of this study was to evaluated the efficiency on sperm cryosurvival and ability of in vitro fertilization using Triladyl and Lactose Egg-Yolk(LEY) as extenders for cryopreservation of separated sperm by 65% percoll in miniature pig. Sperm viability was measured with SYBR-14/PI double stained sperm by flow cytometry. Ability on embryo cleavage rate and blastocyst development were observed by in vitro fertilization after frozen-thawing of sperm separated by 65% percoll. The experimental groups were designed that separated sperm by 65% percoll with Triladyl (ST) or LEY(SL) and unseparated sperm with Triladyl(UT) or LEY(UL) for cryopreservation. As a results, the viability was significantly(p<0.05) higher in ST(55.1%), SL(63.1%), UL(58.8%) than UT(38.2%) group. Sperm viability in SL(63.1%) group was significantly(p<0.05) higher than other experimental groups. On the other hand, embryo cleavage rate was significantly(p<0.05) higher in ST(79.1%), SL(83.2) than UT(74.1) and UL(75.7%) groups at 96h after in vitro fertilization. Blastocyst development was also significantly(p<0.05) higher in ST(21.5%), SL(20.9%) than UT(17.0%) and UL(18.8%) groups. In conclusion, cryopreservation of miniature boar sperm separated by 65% percoll were beneficial to viability and capacity on in vitro fertilization.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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