To study the mechanism of syncytium formation, novel syncytia-inducing ecotropic murine retrovirus was used. Our previous result showed that amino acid substitutions at the RBD (receptor binding domain) of envelope glycoprotein contribute to syncytium formation. In this study, we have investigated if this fusion phenomenon could occur with retroviral vectors pseudotyped with the novel syncytia-inducing ecotropic murine leukemia virus Env. We have found that these vectors were not able to mediate virus-to-cell fusion in M. dunni murine cell lines. These findings indicate that syncytia-inducing ecotropic murine leukemia virus is capable of generating syncytia during its replication. There was also no correlation between the level of ecotropic murine leukemia virus receptor (mCAT-1) and the fusogenic effect.
A serum-free media for CRIP/MFG-LacZ retrovirus production was developed and applied to continuous packed-bed culture system. The serum-free media developed by fractional factorial design contains indulin ($10\mug/mL$), transferrin ($5\mug/mL$), BSA (4 mg/mL), EGF (25 ng/mL), and linoleic acid ($10\mug/mL$). Operation of continuous packed-bed reactor using Fibra-cel enabled the packging cell to stably maintain retrovirus titer for about 1 week. The optimal operation conditions for dilution rate and temperature were 0.67(h(sup)-1) and $32^{circ}C$, respectively. Using this media, the retrovirus titer(cfu/mL) in the packed continuous culture was about 50% that of continuous culture with serum containing DMEM media.
To verify enchancing effect of polycation of polycation on the retroviral infecivity, we directly measured the binding affinity of retroviruses to the target cells in the presence or in the absence of polybrene with R18 fluorescence assay and examined the effect of the polymers on the relationship between the host cell and the retroviral infecity. There was no difference in the effect of the types of charge of the polymer on the binding affinity. However, polycations, in general, show effect on the retrovirus infecity. This results suggest that the enhancing effect of polybrene and other polycations on the infecity is not due to the binding step but due to the post-binding steps, especially the internalization step. With the result of the internalization of FITC-labeled poly-L-lysine into the host cells, it is suggested that the uptake of polycations into the host cells would play a crucial role in the intermalization of retroviruses.
Human endogenous retroviruses (HERVs) are fossil viruses that began to be assimilated into the human genome some 30~40 million years ago, and now constitute nearly 8% of the human genome. These ancient retroviruses have since accumulated mutations that have rendered them defective; thus, they have been termed junk DNA. However, recent research indicates that not all HERVs remain silent passengers. Although they have not been shown to be causative of any human disease, endogenous retroviral sequences may become expressed under select pathological circumstances such as neurological disorders, including multiple sclerosis (MS), schizophrenia, and Amyotrophic Lateral Sclerosis (ALS); viral infections, including human immunodeficiency virus (HIV) and herpesvirus; and multiple types of cancers. This review focused on the possible interactions of HERVs and neurological diseases.
We studied to improve the stability of retrovirus during freeze-drying. Through selection of the additives, we chose the trehalose, trehalose-PVP colyophilized mixture which were most effective additive on retrovirus storage. Through thermal analysis by DSC. in case of adding trehalose, thermal change shift to $15^{\circ}C$ from $10^{\circ}C$. As a result, we found it that Tg have important role to improve the stability of retrovirus. When retrovirus was storaged at the different temperature, the activity of freeze-dried retrovirus with trehalose sustained for 8 week below $4^{\circ}C$, But freeze-dried retrovirus without additives showed the activity less than 40% at all temperature.
에이즈 치료제로 강력한 항레트로바이러스 치료(highly active antiretroviral therapy;HAART)가 시작된 지 10년이 지났다. 그동안 효과적인 항레트로바이러스제의 가지 수도 늘었지만 좀 더 먹기 편하고, 부작용이 적은 약제 개발로 많은 발전이 있어왔다. HIV감염에 대한 최상의 치료는 효과적인 항레트로바이러스제를 적어도 3가지 약제 이상, 또한 2가지 계열 이상 병용하여 사용하는 칵테일요법이다. 현재의 이 약물치료는 효과적으로 에이즈 바이러스를 억제하고 기회 질환의 발생이나 사망을 현저하게 줄이는데 공헌하였다. 그러나 아직까지는 완치의 개념에는 도달하지 못하고 있다. 항레트로바이러스제의 적절한 사용은 혈중 HIV를 검출한계 미만으로 억제할 수 있고, CD4+ 림프구의 수를 증가시키는 치료효과를 보이지만 부수적으로 소수의 부작용이 동반될 수 있다. 여기서는 최근 국내에 들어와 있지 않거나 임상시험이 진행 중인 신약들과 기존 약제들 간의 차이점을 소개하고자 한다.
We investigated the effect of various additives on the freeze-drying efficiency of recombinant retrovirus. Trehalose was the more effective protectant compared with sucrose or glucose and the optimize trehalose concentration was 300 mM. To improve the effect of trehalose, trehalose-polymers mixtures were tested as protectants so that Poly(vinylpyrollidon)(PVP) improved the recovery yield slightly, but dextran and Poly(ethylenglycol)(PEG) showed a negative effect.
A new RNA virus isolated from abnormally swimming behavior has caused mortalities in salmonid fish (Oh et al., 1995 a), A reverse transcriptase (RTase) activity of the virus was determined by using poly r(A) : oligo d(T) as templete : primer. This RTase activity was associated with virus particles of buoyant density of 1.16 g/ml. The virus particles in sucrose fractions were enveloped and were about 85 nm diameter with central electron-dense core. The brain and kidney samples of artificially infected fish showed RTase activity. Virus particle associated proteins about 120, 80, 65, 61, 48, 42, 35, 30, 25, 19, and 15 kDa were observed when examined by polyacrylamide gel electrophoresis analysis. This study showed the presence of a new retrovirus in salmonid fish, which tentatively called RVS (Retrovirus of salmonid).
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[게시일 2004년 10월 1일]
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