The lactate dehydrogenase (EC 1.1.1.27, LDH) $A_4$ isozyme in skeletal muscle of mandrin fish (Siniperca scherzeri) was successfully purified by affinity chromatography and ultrafiltration. The molecular weight of the purified LDH $A_4$ isozyme was 140.4 kDa and its isoelectric point (pI) was 7.0. Optimal pH for enzymatic reaction was 7.5. ${K_m}^{PYR}$ and $V_{max}$ value of the purified LDH $A_4$ isozyme were $4.86{\times}10^{-5}$ M and 13.31 mM/min using pyruvate as a substrate, respectively. These kinetic properties of the purified LDH $A_4$ isozyme supported the fact that the mandrin fish was a warm-adapted species. The antibody against the purified LDH $A_4$ isozyme may be used in the metabolic physiological studies of ectothermic vertebrates and in the diagnosis of several human diseases.
Thirty six strains of Pleurotus spp., from world-wide nations, were examined for interspecific isozyme variation. A comparison of isozymes in mycelial extracts of the fungal genus Pleurotus was made by polyacrylamide gel isoelectric focusing. A total of one hundred and sixty six bands was resolved from six isozymes. A cluster analysis was done based on the zymograms for esterase, glucosephosphate isomerase, leucine aminopeptidase, malate dehydrogenase, peroxidase, and phosphoglucomutase. From the isozyme analysis, esterase showed higher degree of variability, while it was observed less variability for the enzymes such as glucosephosphate isomerase, malate dehydrogenase, and phosphoglucomutase. The species P. ostreatus, whose taxon is controversial, was discriminated from P. pulmonarius, while P. florida was classified as a distinct taxon. The clustering of P. sapidus and P. spodoleucus strains appeared to be more difficult. It was found that some strains were included to another cluster based on electrophoretic banding patterns. These results show that this lack of congruence among data sets may help explain the taxonomic difficulty within the genus Pleurotus. A dendrogram of genetic similarities was presented, and applications of isozyme data to the systematics of these commercially important fungi was discussed.
The kinetic properties and isozyme expression of lactate dehydrogenase (EC 1.1.1.27; LDH) in tissues from Rana catesbeiana I and II collected from February (I) and August (II) were studied. LDH activities, A4 isozyme, and LDH/citrate synthase (EC 4.1.3.7; CS) were high in skeletal muscle from R. catesbeiana I, and LDH $B_4$ isozyme increased in several tissues of R. catesbeiana II. In particular, LDH activities were high in heart and brain tissues from R. catesbeiana II. LDH eye-specific C isozyme, detected by native polyacrylamide gel electrophoresis after immunoprecipitation, was expressed in eye tissue and was more similar to the $B_4$ than $A_4$ isozyme. LDH $A_4$ isozyme was purified by oxamate-linked affinity chromatography, and the molecular weight of subunit A was 32.0 kDa. In R. catesbeiana II, levels of $Km^{PYU}$, $Vmax^{LAC}$, and tolerance to lactate of LDH were high in all tissues, and $Vmax^{PYU}$ of LDH in heart and brain tissue was highly detected. Purified $A_4$ isozyme and LDH in eye tissue were highly tolerate compared to others. The $Km^{LAC}$ value was highly measured compared to $Km^{PYU}$. The degree of inhibition by 10 mM of pyruvate on LDH activities in tissues from R. catesbeiana I and II was more pronounced as the ratio of subunit B increased. As a result, characteristic expression of LDH eye-specific C was found in R. catesbeiana. Anaerobic metabolism seemed to predominate as the LDH of skeletal muscle from I showed higher activity. It also appeared that R. catesbeiana II adapted well to incremental increases in LDH B, becoming tolerant to the lactate of LDH in tissues.
Four polymorphic allozymes were used for genetic analysis of overwintering populations of field diamondback moth, Plutella xylostella (Linne). Different allele frequencies were found among three local populations of Andong, Youngchon, and Yangsan in all loci. Two allozyme loci (acid phosphatase and phosphoglucomutase) showed significant deviation from Hardy-Weinberg equilibrium in allele frequencies among these populations. Estimated Nei's genetic distance varied from 0.0151 between Yangsan and Youngchon to 0.0877 between Andong and Youngchon. Compared with the previous genetic distances in this moth, a little higher genetic differentiation among these overwintering populations suggests that there would be a specific genetic bottleneck in each local population during overwintering period.
Subcellular location of five isozymes in Populus species was studied by isozyme analysis with plant and mitochondria. Isozymes analyzed were ADH, 6-PGD, MDH, PGI, and Diaptrorase. ADH seems to be cytosolic isozyme encoded with nuclear genes at one locus, while 6-PGD seems to be mitochondrial one. MDH showed three hands in cytosol and four other bands in mitochondria. Three cytosolic hands were showed for PGI. Diaphorase showed one mitochodrial band and two cytosofic bands which seemed to the encoded by nuclear genes at one locus.
To study the effects of metal ions on the activities of antioxidative enzymes, the activities of superoxide dismutase(SOD), peroxidase(POD), catalase(CAT) of Persicaria vulgaris has been studied after treating with Cd, Cu, Zn and Al. 1. The activities of SOD in leaf and stem were decreased, but that in root was increased. Among the metal ions studied in this report, Al gave the highest increase in SOD activity in root. 2. The activities of POD after treating with Cd or Cu did not show any significant differences. POD activities after treating with Zn and Al has been decreased, however, that in root showed increased activities after treating with Zn 5,000 ppm or Al 500 ppm. 3. The activity of CAT in leaf was decreased with every metals studied. The CAT activity in root was increased with increased concentration. The root treated with Al showed highest activity. 4. The presence of isozymes after treated metal ions has been studied in gel electrophoresis. The POD treated plant did not show any new isozymes, but the intensity of one of pre-existent band was increased. The SOD treated plant showed the several new isozymes.
The effect of various stressors such as reductant ascorbic acid, signalling molecules (salicylic acid and methyl jasmonic acid), heavy metals $(NiCl_2,\;and\;MnSO_4)$ and NaCl on the glutathione peroxidase (GPX) activities and isoenzyme expression patterns were investigated in rice seedling roots. Total GPX activity increased according to the increase of ascorbic acid concentration. Prominent enhancement of GPX1 isozyme due to ascorbic acid contributed to the increase of total GPX activity. GPX showed different reactivity toward salicylic acid and methyl jasmonic acid. GPX activity increased at 0.1 mM salicylic acid, and then decreased thereafter. However, GPX increased gradually in a methyl jasmonic acid concentration-dependent manner, and 3 fold increase of GPX activity was found at 1 mM methyl jasmonic acid. Moreover, GPX1 isozyme increased according to the increase of salicylic acid, while GPX1 isozyme decreased according to the increase of methyl jasmonic acid. When metal ions were treated, GPX activity increased considerably according to the increase of $NiCl_2$ concentration, however, GPX activity increased about 2 fold at 0.5 mM $CuSO_4$ and then decreased. Enhancement of GPX1 isozyme contributed to the increase of total GPX activities in $NiCl_2-treated$ and $MnSO_4-treated$ rice seedlings. Total GPX activity increased 1.7 fold in response to 300 mM NaCl. Especially GPX2 isozyme showed gradual increase according to the increase of NaCl concentration.
Degenerate primers corresponding to the sequences of the N-terminal regions of Mn-peroxidase isozymes were used to isolate the genomic fragments encoding the isozymes of Mn-peroxidase, CVMP1, CVMP2, CVMP3 and CVMP5 from the white-rot fungus Trametes versicolor KN9522. Three isozymes except one gave the expected PCR products (cmp1, cmp2 and cmp5) of about 900 base pairs, respectively. DNA sequence data obtained from each PCR products were used to analyze the BLAST program search on the National Center for Biotechnology Information. cmp1, cmp2 and cmp5 were similar to MPG-I (GenBank accession number Z30668) and PGV-II (GenBank accession number, Z54279) gene T. versicolor PRL572. PCR products of cmp1 and cmp2 showed 77%, 95% base sequence similarities to MPG-I gene and cmp5 showed about 88% similarity to PGV-II gene from T. versicolor PRL572. From this experiment, we could isolate genomic DNA fragments with degenerate primers designed from the N-terminal amino acid sequences of Mn-peroxidase isozyme family.
Culexpfpfens pollens에 존재하는 superoxide dismutase의 연구를 위한 적정 분석 조건과 우화 전후. 시간 경과에 따른 superoxide dismutase 활성 경향에 대해서 연구하였다. C. pipiens에 존재하는 superoxide dismutase의 활성은 부화 직후부터 지속적으로 감소하다가. 우화 후 흡혈 자극에 의해서 급격하게 증가한다 흡혈 후 36시간이 경과했을 때. 최대의 논성도를 보인 후 급격히 감소하였다. 기관별 분석에서 흡혈 후 가장 높은 활성 증가는 중장에서 일어나고, 머리 흥부. 지꼴체 및 난소에서도 활성의 증가가 나타났다. 흡혈 전에는 2개의 동위효소(SOD-1, soD-2)가 존재하였으나. 흡혈후 36시간된 성체에서는 3개의 동위효소 밴드가 보이는데, 머리에서는 SOD-1만이 나타나고, 가슴에서는 SOD-2. 지방체와 난소에서는 SOD-1과 SOD-2이 존재하였고. 중장에서는 SOD-3가 나타났다. 그러므로 흡혈 후 나타나는 새로운 동위효소는 중장에서 합성됨을 알 수 있다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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