Bacillus thuringiensis var. alesti (H. Serotype III)로부터 분리된 단백질 독소의 물리화학적 성질 및 누에에 대한 생물학적 검정에 있어서 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. Nutrient agar 배지를 사용하여 항온기에서 3$0^{\circ}C$에 세균을 배양했을 때 완전한 Bacterial lysis는 30일 걸렸고 액체 배지를 사용하여 발효기(Fermentation Jar)에 배양했을 때는 그 기간이 반으로 단축되었다. 2. 분리된 결정체들만으로부터 추출된 단백질 독소와 포자-결정체의 혼합들로부터 분리된 독소와는 단백질 독소의 순수도에 있어서 차이가 없었다. 3. 단백질 결정체를 알카리(pH 9.5)에 용해시켜 Sodium Lauryl Sulphate Polyacrylamide gel을 사용한 전기영동 을 행했을 때 분자량이 120,000, 87,000, 74,000의 3개의 단백질의 분리되었다. 4. 분리된 독소의 누에에 대한 생물학적 검정에 있어서 4령기 누에 체중 g당 LD$_{50}$는 0.080$\mu\textrm{g}$이었다.
지금까지 많은 연구가 되어 있지 않던 Bacillus thuringiensis serovar. darmstadiensis의 내독소를 Renografin-76 단계적 기울기 원심분리로 분리하여 전자 현미경으로 관찰하여 이중피라미드 구조를 가진 독소 단백질을 확인하였으며 B. thuringiensis serovar. kurstaki HD1의 독소 생성유전자와 B. thuringiensis serovar. darmstadiensis의 유전자가 유사성이 있다는 보고를 근거로 하여 B. thuringiensis serovar. HD1의 독소 생성유전자를 가진 프로브(pUYBT 9044)로 이용하여 colony hybridization 및 Southern hybridization 한 결과 2.6Kb EcoRI 단편 및 3.6Kb Hind III 단편을 선발할 수 있었다. 이들 단편들은 B. thuringiensis serovar. kurstaki HD1 독소 유전자와 hybridization시 유사성이 있었다. 특히 3.5Kb HindIII 단편은 2.6Kb EcoR I 단편에 클로닝되어 있는 1.8Kb의 HD1 독소 유전자와 유사성이 있는 부분을 공유하고 있었으며 1.0Kb 정도의 EcoR I-HindIII 부분이 더 삽입한 것을 알 수 있었다.
Kim, Kyoung-Mi;Kim, Hye-Ju;Ryu, Jae-Ha;Sohn, Dong-Hwan
Journal of Ginseng Research
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제24권2호
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pp.79-82
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2000
사포닌은 인삼의 약리작용을 매개하는 인삼의 주요 성분이다. 인삼의 뿌리는 여러 가지 독소에 의하여 유발되는 독성에 대한 보호작용이 있는 것으로 알려지고 있다. 본 연구에서는 세균독소(lipopolysaccharides)에 의하여 유도되는 종양괴사인자 생성에 미치는 인삼 사포닌의 영향을 살펴보았다. 독소를 투여한 생쥐의 혈청중 종양괴사인자의 농도는 상승하는데, 인삼 사포닌 50 mg/kg을 독소와 함께 복강으로 투여한 경우는 독소만 투여하였을 때에 비하여 혈정 중 종양괴사인자의 농도가 현저히 낮았다. 이러한 인삼 사포닌의 효과는 사포닌의 용량, 투여방법과 투여시간에 영향을 받았는데, 사포닌을 경구로 투여하거나 독소를 주사한 후에 투여하였을 때에는 종양괴사인자 농도에 유의성 있는 차이를 나타내지 않았다. 이러한 결과는 인삼이 간 손상에 대한 보호작용이 있을 가능성을 시사하였고, 사포닌이 이러한 인삼의 보호효과를 매개하는 활성 성분임을 의미한다.
위생환경이 좋지 못하고 보건사업의 혜택이 원활치 못한 지역의 소아 및 국민학동에게서 분리한 장내 세균 중 이열성 장내 독소생성 대장균주의 분포를 배양된 부신암 세포를 이용하여 살펴보았다. 이 열성 장내독소의 존재아래 부신암 세포는 세포의 원형화 및 seroid 생성력의 항진을 보이기에 이 두 성질에 기처를 두어 독소생선균주를 감별하였다. 실험의 결과 조사대상자의 약 10%에 해당하는 균주들이 독소 생성 균주로 밝혀졌다. 분리한 균주의 화학요법제에 대한 감수성 내지 내성도를 측정하였는데 특히 주목할 것은 이열성 장내독소 균주들의 대부분이 gentamycin(10mg)과 nalidixic acid(5mg)에 감수성이 있는데 비해, colistin(10mg), novobiocin(30mg), sulfa drug(50mg)에는 내성을 나타냈으며, 장내 질환에 널리 쓰이는 chloramp-henicol(10mg)에 대해서는 균에 따라 감수성 또는 내성을 보인데 있다. 이상의 조사로 우리나라 정상아동이 상당의 이열성 장내독소 생성균주를 보유하고 있음을 알수 있다. 이를 균주중 몇개는 장내질환 치료제로 널리 사용하는 항생제에 대해 내성을 지니고 있음을 볼 수 있었다.
Bacillus cereus 설사독소 전사조절유전자인 plcR 및 papR의 특이적 프라이머 쌍을 사용한 PCR로 설사 독소유전자 함유 B. cereus 균의 검출 가능성을 조사하였다. 적어도 한 종류 이상의 독소유전자들(hblACD, nheABC, cytK)을 함유한 96균주의 B. cereus를 대상으로 plcR-papR 유전자에 특이적인 프라이머들을 이용하여 PCR을 한 결과 모두 양성을 나타냈다. 그러나 독소 유전자를 함유하지 않은 48균주의 Bacillus들로 같은 분석을 한 결과 모두 음성을 보였다. PCR에 의한 plcR-papR 유전자 검출법은 설사독소 유전자를 함유한 B. cereus를 확인하는데 간편하면서도 정확한 결과를 제공하였다.
고추, 마늘 및 배추등(等)의 연작지토양(連作地土壤)에서 식물독소(植物毒素)의 분별정량(分別定量), 독소물질(毒素物質)이 고추 발아(發芽) 및 생육(生育)에 미치는 영향등(影響等)을 알고져 질내시험(窒內試驗)한 결과(結果)는 다음과 같다. 1. 불휘발성(不揮發性) 방향족(芳香族) 유기산(有機酸)인 Hydroquinone, Benzoic-, P-hydroxybenzoic- 및 Vanillic 산등(酸等)은 BSA(N, O-bis(trimethylsily1)acetamide)로 Silyl 화(化) 시켜 Gas chromatogphy 방법(方法)에 의하여 분별(分別) 정량(定量)이 가능(可能)하였다. 2. 고추, 마늘 및 배추 연작재배지(連作栽培地) 토양(土壤)에서 Hydroquinone, P-hydroxybenzoic- 및 Benzoic 산(酸)이 검출(檢出) 되었으며 특(特)히 고추 연작재배지토양(連作栽培地土壤)에서 작물(作物)의 장해한계농도(障害限界濃度) 이상(以上)의 독성물질(毒性物質)이 검출(檢出)되었다. 3. 고추 발아(發芽) 및 생육(生育)에 미치는 각종(各種) 식물독소(植物毒素) 피해농도(被害濃度)는 200 ppm 정도(程度)였으며 식물독소중(植物毒素中) Benzoic acid에 의한 피해(被害)가 가장 심(甚)하였다. 4. 식물독소(植物毒素)에 의한 고추 유식물(幼植物)의 피해징상(被害徵象)은 줄기 신장억제(伸長抑制), 유엽(幼葉)의 갈변(褐變), 생육정지등(生育靜止等)의 현상(現象)을 볼 수 있었다.
탄저 치사독소는 생쥐 대식세포 (RAW 264.7)의 유전자 발현에 많은 변화를 초래한다. 이들 변화를 초래하는 치사독소의 역할은 아직 확실하게 밝혀지지 ???았다. 본 연구에서는, 치사독소가 처리된 생쥐 대식세포의 단백질 프로파일을 이차원 전기영동으로 분석하였고, MALDI-TOF 질량분석기를 사용하여 해당 단백질의 질량을 측정하였다. 펩타이드 질량 분석 데이터는 ProFound 데이터베이스를 이용하여 동정하였다. 차별화되어 발현된 단백질 중에서 절단된 mitogen-activated protein kinase kinase (Mek1)와 glucose-6-phosphate dehydrogenase (G6PD)가 치사독소 처리된 대식세포에서 각각 증가하였다. 치사독소를 처리하였을 경우, Mek1의 절단은 신호전달과정을 방해하고, 증가된 G6PD는 생성된 활성산소로부터 세포를 보호하는 역할을 하는 것으로 보인다. 단백질체 분석기술은 치사독소처리에 의한 생쥐 대식세포의 세포사멸 관련 단백질을 동정하는데 도움을 주어, 치사독소의 잠정적인 기질을 찾는데 유용할 것이다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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