본 연구는 생물발광단백질인 aequorin을 표지물질로 사용해 신경전달물질인 serotonin에 대한 생물 발광면역분석법을 처음으로 개발하였다: serotonin-avidin 접합체는 Mannich 법으로 합성하였으며, 최적화된 avidin: formaldehyde: serotonin의 초기 몰 비는 1:12,000:25 이었다. 개발된 serotonin에 대한 생물발광면 역분석법은 좋은 감도(LOD of 0.68 ng/mL)와 넓은 검출 범위($5.0{\times}10^{-10}\;M\sim5.0{\times}10^{-7}\;M$)를 나타내었다(참고, 혈청 내 serotonin의 양은 $151{\pm}45\;ng$/mL 이다.). 교차반응성에 대한 연구 결과, 5-methoxytryptamine은 28.0% 의 교차반응성을 보인 반면, 3-methylindole, melatonin 그리고 5-hydroxylindole-3-acetic acid 은 교차반응성을 보이지 않았다. 또한, 혈청에서의 회수율은 만족할만한 값이 얻어졌다. 그러므로, 본 연구에서 제안된 생물발광면역분석법은 혈청 내의 serotonin 을 모니터링 하는데 좋은 분석법으로 사용될 수 있다.
Objectives Internet gaming disorder (IGD) is known to be related to stress and the serotonin-transporter-linked polymorphic region (5-HTTLPR) that is known to be associated with stress and has been studied to affect various psychiatric illness outbreaks. We tried to examine the relationship between stress, 5-HTTLPR and IGD. Methods A total of 59 participants with IGD, diagnosed according to the 5th edition of the Diagnostic and Statistical Manual of Mental Disorders (DSM-5) criteria and 67 normal controls (NC) were enrolled. The IGD group and the NC were compared using chisquare test and independent sample t-test, and logistic regression analysis was used to examine the relationship between stress, the 5-HTTLPR, and IGD. Results The mean scores for anxiety, impulsivity and stress were significantly higher in the IGD group than in the NC. In addition, there was a significant association between stress and IGD [odds ratio (OR) = 1.172, 95% confidence interval (CI) = 1.008-1.362]. Conclusions This study showed that stress would affect IGD. Therefore, the evaluation and management of stress should be included in the diagnosis and treatment of IGD.
단백질 전달체로 이용하기 위한 폴리(에틸렌 글리콜)-폴리(락타이드-co-글리콜라이드) 공중합체는 카비톨 (134 g/mole)과 550, 2000 및 5000g/mole의 각기 다른 분자량을 가진 메톡시 폴리(에틸렌 글리콜)을 개시제로 하여 촉매인 Sn(Oct)$_2$를 사용하여 L-락타이드와 글리콜라이드의 개환중합에 의해 합성되었다. $^1$H-NMR, GPC, 그리고 XRD를 이용하여 합성된 블록 공증합체의 특성을 결정하였다. 이식형 웨이퍼를 준비하기 위하여 동결분쇄기를 이용하여 형광이 결합된 1% 소 혈청 알부민과 고분자를 균일 혼합 후에 3mm${\times}$1mm의 크기로 웨이퍼를 제조하였다. 형광 알부민의 방출 거동과 pH 변화는 pH 7.4의 인산염완충용액을 이용하여 37$^{\circ}C$, 100rpm의 항온조에서 30일 동안 관찰하였다. 알부민의 방출양은 형광분광기를 통하여 FITC의 강도에 의해 결정되었다. 알부민의 방출 거동은 블록 공중합체내에서 MPEG의 분자량이 증가할수록 빠른 초기방출을 보였고, PLGA의 분자량을 조절함으로서 약물의 방출기간을 결정할 수 있었다. 이러한 결과로 생분해성 PLGA에 친수성인 MPEG의 도입을 통해 약물의 방출거동을 조절할 수 있었다.
우리나라 주요 담수 어종인 미꾸라지(Misgurnus mizolepis)를 실험 모델로 이용하여 실험적으로 설정한 고온 노출($32^{\circ}C$)에 특이적으로 반응하는 유전자들을 cDNA microarray 분석을 통해 탐색하였다. 미꾸라지 간조직 expressed sequence tag (EST) 데이터베이스 분석을 통해 1,124개의 unigene들을 선발하여 제작한 cDNA microarray을 이용하여 $23^{\circ}C$ 및 $32^{\circ}C$에 4주간 노출된 실험어의 간(liver)조직의 전사 발현 양상을 3반복 분석하였다. 다양한 유전자군이 $32^{\circ}C$ 고온 노출에 전사 발현의 증감 또는 감소 양상을 보였으며 $23^{\circ}C$에 비해 $32^{\circ}C$군에서 2배 이상의 발현 증가를 보인 클론들은 총 93종류로서 에너지 대사, 단백질 대사, 면역/항산화 기능, 세포골격 및 구조, 물질수송 및 세포 신호전달등에 관여하는 단백질들을 암호화하는 유전자들이었고 최대 15배 이상의 전사발현이 관찰되었다. 반면 고온 노출군에서 유의적인 발현 감소(50% 이하)를 보인 유전자들(n=85) 역시 탐색되어 상기 단백질 분류군외에 vitellogenin 전구체들 및 리보좀 단백질류에서 특이적인 전사활성의 저하가 관찰되었고, vitellogenin 유전자에서 가장 많은 mRNA 수준의 감소가 관찰되었다.
본 연구는 임신횐쥐에서 운동이 혈중 인슐린과 렙틴 농도, 그리고 골격근의 GLUT-4와 VAMP-2단백질 발현에 변화를 조사하기 위하여 수행되었다. 본 연구에서 비임신 횐쥐에 비해 임신 횐쥐에서 혈중 인슐린 농도가 유의하게 증가되었고, 렙틴 농도는 유의하게 감소하는 것으로 나타났다. 임신횐쥐에게 달리기 운동을 적용한 결과 임신으로 증가된 인슐린 농도를 유의하게 감소시키면서 렙틴 농도의 감소를 억제시키는 것으로 나타났다. 골격근에서 GLUT-4와 VAMP-2 단백질 발현량을 조사한 결과 비임신 횐쥐에 비해 임신 횐쥐에서 이러한 단백질 발현이 유의하게 감소되었지만, 임신 중 달리기운동을 경험한 횐쥐에서 GLUT-4와 VAMP-2 발현 모두 유의하게 증가되는 것으로 나타났다. 이와 잘이 임신으로 인한 혈중 인슐린 및 렙틴의 변화가 골격근에서 당을 근조직으로 흡수하는 신호 전달 경로와 수송체의 발현 손상과 연관되어있음을 보여주는 것이다. 하지만 임신 횐쥐에서 달리기 운동은 인슐린과 렙틴 농도의 변화를 완화시킴으로써 골격근의GLUT-4와 VAMP-2발현을 유의하게 증가시키는 것으로 나타났다.
DNA와 histone 단백질의 변형은 식물 발달에 상당히 중요한 역할을 하는 것으로 알려져 있다. 식물 조직 배양 및 식물 발달 단계에서 methylation의 영향을 알아보고자 벼 종자로부터 캘러스 형성 및 식물체 재분화 단계에서 demethylation 물질인 5-azacytidine을 처리하여 유전자 발현 양상을 분석하였다. 식물체로의 재분화 능력이 있는 벼 배상체 캘러스는 5-azaC가 첨가된 H6A 배지에서는 형성되지 않았으며 갈색을 띠는 캘러스가 형성되었다. 또한 정상적인 캘러스를 5-azaC가 첨가된 MSRA 재분화 배지에서 배양했을 때도 대조구와는 달리 식물체 재분화는 이루어지지 않았다. 이러한 결과는 5-azaC가 정상적인 배상체 캘러스 및 shoot 분화에 부정적인 영향을 미친다는 것을 나타냈으며 따라서 DNA methylation이 식물 조직배양에서의 정상적인 세포 dedifferentiation과 differentiation에 필수 요인이라는 것을 알 수 있었다. 벼 캘러스 형성 및 재분화 과정 동안의 methylation 영향을 알아보고자 각 단계별로 5-azaC를 처리 후 $GeneFishig^{TM}$ DEG와 DNA chip을 사용하여 유전자 발현 양상을 분석하였다. Epigenetic regulation, 전자전달, 핵산대사, 스트레스 반응에 관여하는 일부 유전자들의 발현이 증가하거나 감소하는 것을 알 수 있었다. 발현 차이가 있는 일부 유전자를 클로닝하여 확인하였고 RT-PCR 및 northern 분석으로 각 단계에서의 발현 차이를 할인하였다.
복분자, 산수유 및 토사자를 일정한 비율로 배합하여 열수추출로 얻어진 KH-305를 일반쥐에 투여해서 해면체 평활근 이완에 관련된 세포 내 신호전달체계 NO-cGMP pathway에 관여하는 NOS, 혈액내의 testosterone, BVSMCs cell에서 cGMP농도를 측정하여 음경발기 지속 및 촉진에 미치는 영향을 보았으며 음경조직의 활성산소제거와 관련하여 SOD/Mn, SOD/Cu의 단백질 발현정도를 측정하였다. KH-305는 NO-pathway에 관여하는 NOS의 발현증가, 낮은 농도에서의 cGMP농도 증가, testosterone의 수치를 증가시킴으로써 발기유지 및 촉진시키고, 동시에 음경조직내의 활성산소 및 NO 합성에서 나타나는 독성을 조절하여 주는 SOD발현이 증가됨으로써 활성산소에 의한 음경피로도를 경감시켜 음경해면체 평활근의 이완장애를 일으키는 발기부전 증상을 개선시킬 것으로 생각된다.
세포막 단백질 중 가장 큰 family를 형성하는 G protein-coupled receptor (GPCR)는 세포 외부의 다양한 신호를 세포 내 G 단백질의 활성화를 통하여 전달한다. 외부 신호자극이 없는 조건에서도 활성을 나타내는 항활성 돌연변이(constitutively active mutants, CAM)는 GPCR 신호전달 이상으로 인한 질병 치료나 GPCR의 활성화 구조연구에 좋은 대상이다. 본 연구는 시각수용체 로돕신에서 약한 항활성을 보이는 CAM의 하나인 E134Q/M257Y를 대상으로, inverse agonist와 agonist 존재 하에서 형성하는 두 가지 chromophore의 특성을 연구하였다. 이 CAM은 11-cis-retinal과 all-trans-retinal 존재 하에서 각기 최대흡광도가 500 nm와 380 nm인 로돕신을 형성한다. 두 가지 retinal을 다양한 비로 혼합한 조건과 연속적으로 결합하는 조건 하에서 각 형태의 로돕신 형성을 조사한 결과 E134Q/M257Y mutant는 11-cis-retinal과 우선적으로 결합함을 보여준다. E134Q/M257Y mutant는 wild type 옵신에 비해 11-cis-retinal에 대한 친화도는 별다른 차이가 없으나 옵신과 로돕신 상태의 안정성이 낮음이 확인되었다. 본 연구 결과는 GPCR의 활성화 시 일어나는 부분적 구조변화에 대한 정보를 제공하고, 구조정보에 기반한 GPCR신호를 미세하게 조절하는 물질의 발굴이나 개발에 유용하게 이용될 것이다.
갑각류에서 탈피는 ecdysteroid와 juvenile hormone (JH) 신호 경로에 관여하는 유전자의 상호작용에 의해 조절된다. Ecdysteroid와 달리, 탈피 과정에서 JH 신호 경로 유전자의 역할은 부유성 갑각류에서는 잘 알려져 있지 않다. 본 연구는 기수산 물벼룩(Diaphanosoma celebensis)의 JH 신호경로에서 JH 합성, 수용체, 분해 등에 관여하는 3종의 유전자(JHAMT, Met, JHEH)의 염기서열 분석과 계통 분석을 실시하였다. 또한 탈피 주기에서 이들 유전자의 mRNA 발현양상을 분석하였다. D. celebensis의 JH 관련 유전자는 잘 보존된 domain을 가지고 있었으며, 아미노산 서열 분석과 계통 분석 결과는 이들 단백질이 곤충 및 다른 갑각류의 해당 단백질과 기능적으로 유사한 특징을 나타낸다. 또한 탈피 주기에 따른 유충 호르몬( JH) 신호전달경로 관련 유전자의 발현변화 결과를 통해 이들 유전자가 JH의 합성 및 분해에 관여함으로써 D. celebensis에서 성공적인 탈피에 기여할 것임을 제시하였다. 본 연구는 지각류에서 탈피 주기에서 JH 경로 유전자의 역할을 이해하는 데 도움이 될 것이다.
최근에 Synechocystis sp. PCC 6803 중에 한 균주가 고체 한천 배지상에서 일정한 조명(300-1000 lux) 방향을 따라 활주 운동하는 것을 관찰하여 이 종을 S. 6803 PTX라고 명명하고 이의 주광성 운동에 대한 생리학적 특징을 이해하기 위하여 몇 가지 대사 억제제와 신호 전달 차단제의 주광성 운동에 미치는 효과를 조사하였다. DCMU는 광계 II로부터 광계 I의 일차 전자 수용체인 플라스토퀴논으로의 비순환성 광합성 전자전달을 억제하는 억제자로서 $100\;\mu\textrm{M}$의 농도에서는 주광성 운동을 억제하지 못하였다. 그러나 호흡에 의한 전자전달 억제제인 sodium azide를 처리하였을 경우에는 S. 6803 PTX에서 심하게 장해를 받았다. 이러한 관찰 결과는 주광성 운동의 주동력원이 광인산화 과정보다는 호흡에 의한 산화적인 인산화과정에 주로 연관되어 있음을 보여주었다. 또한, 세포를 CCCP나 DNP와 같은 막상의 uncoupler를 처리하였을 때, 세포내 ATP 농도를 저하시키거나 세포질막에 수소 이온의 전기화학구배($\Delta\mu_{H}+$)를 제거시키나, 이러한 화합물들은 주광성 운동에 뚜렷한 영향은 주지 못하였다. 이러한 결과와는 달리, H+-F0F1 ATPase에 민감하게 억제 작용을 나타내는 DCCD나 NBD의 처리는 세포내 ATP만 고갈시키고 막상에서 $\Delta\mu_{H}+$는 그대로 유지시키는 작용을 하는데, 이러한 DCCD나 NBD는 주광성 운동에 대해서는 심하게 억제 현상을 나타내었다. 또한, 특이성 calcium ionophore 중의 하나인 A23187의 처리는 양성 주광성에 심하게 장해를 주었다. 아마도 Ca2+ 유동은 주광운동 방향성의 신호전달 과정에 중요하게 관련되어 있는 것으로 나타났다. 마지막으로 S-adenosyl methionine과 같은 메틸 공여체의 고갈이 S. 6803 PTX 균주의 주광성 반응에 영향을 주는지를 알아보기 위하여 에티오닌을 BG11을 한천 배지에 첨가하였다. 이 생물종의 광운동은 에티오닌의 농도가 증가됨에 따라 일정하게 억제되다가 0.5mM에서 주광성 운동을 완전히 억제시켰다. 이것은 광수용 기작이 Escherichia coil나 Salmonella typhimurium에서 발견된 메틸기 수용 주화성 단백질과 같은 메틸화/탈메틸화 과정에 의하여 조절될 가능성을 보여주고 있음을 의미한다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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