1. S. choleraesuis, S. typhimurium, S. dublin에서 순수 분리한 flagella protein의 분자량은 각각 53.4 kDa, 51 kDa, 54.6 kDa으로 나타났다. 2. 산란계의 혈청 중 항체역가 수준은 면역 후 2주경 부터 급격히 증가하기 시작하였고 난황 중 항체역가의 수준은4 주경 부터 급격히 증가하기 시작하였다. 6주와 8주경 이 후 부터는 난황항체역가가 혈청 항체역가보다 높은 수준을 유지하거나 계속 증가하였다. 3. Salmonella flagella protein을 면역원으로 산란계에 면역하여 생산된 난황항체는 150,000배 희석 시 각각의 Salmonella 균주에서 특이적으로 각각의 항원에 반응하였다. 4. 난황 1 ml당 IgY의 함량은 약 31 mg∼33 mg이었으며, IgY의 함량은 단백질 함량의 약27%를 차지하는 것으로 나타났다. 5. 실험실조건하에서 난황항체의 항원결합능력을 조사한 결과 동결건조한 WSF을 2∼4 mg/ml첨가 시 균체의 농도가 $10^{9}$ CFU/ml에서 $10^{5}$∼$10^{6}$ CFU/ml로 급격하게 감소하였다.다.
본 연구는 가금에서 호흡기 질환, 심낭수종, 봉입체 간염, 산란저하증 등을 유발하는 가금 아데노바이러스의 fiber 2 유전자에 대한 특이 난황 항체를 개발하고자 실험을 실시하였다. Fiber 2 유전자를 클로닝한 뒤, 대장균 발현 시스템을 이용하여 약 22 kDa의 재조합 fiber 2 단백질을 생산하였다. 이를 산란계에 3주 간격으로 총 4회 면역하여 혈청 및 난황 내 항체가를 측정한 결과, 면역 후 12주경에 항체가가 최고치에 달하였으며, 산란계로부터 획득한 난황 항체를 이용한 Western blot analysis 결과, 가금 아데노바이러스 내 fiber 2 단백과 특이적으로 반응한다는 것을 규명하였다. 결론적으로, 가금 아데노바이러스 fiber 2에 특이적인 난황 항체 생산에 성공하였으며, 이러한 특이적인 난황 항체는 가금 아데노바이러스로 인한 질병의 예방 및 치료에 활용 가능할 것으로 사료된다.
난황과 난백을 냉동저장 할 경우 발생하는 이화학적 변화를 조사함으로써 계란의 효율적인 저장기법을 확립하고자 실시 한 본 실험의 결과를 요약하면 다음과 같다. 1. 난황액을 냉동저장할 경우 Gel화가 발생하였으며 난백액의 경우 포립성과 포립안전성이 감소하였다. 2. 난자액의 동결저장중 Gel화 방지를 위한 각종 동결방지제(소금, 포도당, 설탕, 각종 amide류) 종에서 소금이 가장 효과적이었다. 3. 난황액과 난백액을 $-5^{\circ}C$와 $-20^{\circ}C$에서 냉동저장할 경우 점도가 증가하였으며 색택의 변화가 일어났는데 난백액의 색택변화는 미약하였다. 4. 난황액에 5% NaCl(소금)을 첨가하여 $-5^{\circ}C$에서 저장하는 방법이 난황의 Gel화를 방지하고 경제적으로 저장할 수 있는 방법이었다. 5. 소금을 첨가하여 냉동저장할 경우 난황액의 유화특성은 다소 감소하였다.
전복의 난황단백질의 특성을 조사하기 위하여 성숙한 참전복 암컷의 난소난 추출물로부터 sepharose Cl-4B gel chromatography을 사용하여 난황단백질을 분리하였다. 암컷과 수컷의 혈청과 난소난 추출물에 대한 항혈청을 이용하여 암수혈청과 난소난 추출물을 면역전기영동과 Ouchterlony 면역확산을 한 결과, 성숙한 암컷 혈청에는 암컷 특이 혈청 단백질(female specific serum protein) 이 존재하였으며, 이것은 난소난 추출물과 동일한 항원성을 가지고 있었다. 한 종류의 난황단백질이 난소난 추출물로부터 분리되었으며, 이 난황단백질은 SDS 전기영동에 의해 분자량이 각각 181kDa과 113kDa이 되는 2개의 subuit로 구성되어 있었다. 이들 난황단백질에 대한 항혈청은 성숙한 암컷 특이 혈청단백질과 간췌장 추출액과 침강반응을 보였으며 서로 교차반응이 일어났으나, 성숙한 수컷 간췌장 추출물에 대해서는 반응이 일어나지 않았다.
본 연구는 식중독은 물론, 아토피성 피부염의 원인물질로 알려져 있는 포도상구균 장내독소 B(Staphylococcal enterotoxin B; SEB)에 대한 특이 난황항체를 개발하고자 실험을 실시하였다. 우선, SEB 유전자를 클로닝한 다음, 대장균 발현시스템을 이용하여 약 30 kDa 정도의 재조합 SEB 단백질을 생산하였다. 재조합 SEB 단백질을 산란계에 2주 간격으로 3회 면역접종을 실시하고, 혈청 및 난황 내 항체가를 측정한 결과, 면역 후 4주경에 항체가가 최고치에 달하였으며, 산란계로부터 획득한 난황항체를 이용한 Western blot 결과, 재조합 SEB 단백질은 물론, 상용화 SEB 단백질과도 특이적으로 반응한다는 것을 규명하였다. 결론적으로, 식중독과 아토피성 피부염 등의 원인물질로 알려진 SEB에 특이적인 난황항체를 생산에 성공하였으며, 이러한 특이적인 난황항체는 식중독 및 아토피성 피부염의 예방 및 치료에 활용 가능할 것으로 사료된다.
비방사구와 방사구 달걀 난황을 가열 압착하여 얻은 난황유를 정제한 후 화학적 성질과 지질조성에 관하여 실험한 결과는 다음과 같다. 난황의 일반성분은 비방사구, 방사구가 각각 수분이 49.50%, 47.06%,조단백질은 16.53%, 16.98%,조 지방은 31.05%, 33.34%로 주성분을 이루었고, 조지방, 조단백의 함량은 방사구가 비방사구 보다 더 높았다 난황유의 화학적 성질은 비방사구, 방사구가 각각 산가 8.95, 9.85, 요오드가 57.64, 58.15, 비누가 240.14, 223.92로. 나타났다. 난황유 총지질의 조성은 비방사구, 방사구 각각 중성지질 76.60%, 71.23%,당지질 3.95%, 5.03%, 인지질 19.45%, 23.74%였다. 중성지질 중에는 비방사구, 방사구 각각 triglycride가 59.3%, 56.3%로 주성분을 이루었고 그 외에 monoglyceride와 diglyceridr의 함량이 높았다. 당지질은 비방사구, 방사구 각각 digalactosyl diglyceride가 98.3%, 97.8%로 대부분을 차지 하였다. 인지질은 방사구, 비방사구 각각 phosphatidiyl choline + phosphatidyl serine이 58.6%, 59.8%로 주성분을 이루었고, 그 외에 lecithin + sphingomyelin과 미확인 성분이 존재하였다.
난황형성(vitellogenesis)은 난생동물의 번식에서 매우 중요한 과정으로 간에서 난황전구물질(vitellogenin,Vg)의 생성과 단백질 수준에서 Vg의 변형과 난자내 축적 및 난황물질(vitellin)로의 전환을 포함한다. 난황은 경골어류의 배아의 영양물질 및 삼투압 조절을 통한 부유특성의 조절에 관여한다. 척추동물의 Vg유전자는 lipoprotein계열의 유전자로 복수의 Vg유전자가 존재하며 서로 다른 크기의 Vg단백질을 암호화한다. 에스트로젠에 의해 이들 단백질이 발현되는 정도에는 차이가 있다. 난생 척추 동물의 암컷에서 에스트로젠의 조절하에 생성되는 Vg은 천연 에스트로젠 및 합성에스트로젠에 의해 어류, 양서류, 파충류, 조류 등 다양한 척추동물의 수컷 체내에서도 형성되며 수온 및 생식주기에 의존적이다. 따라서 수컷에서 일어나는 난황전구물질의 생성은 환경오염물질 가운데 여성호르몬과 유사한 작용을 하는 물질의 규명과 위해성 여부를 판정할 수 있는 생물학적 지표로서 전세계적으로 이용되고 있다. 국내의 경우 Vg유도여부를 통한 야생생태계에서 환경호르몬 오염과 동물의 번식장애에 대한 연구에 있어서 번식주기, 동물의 지리적 분포와 생물다양성의 차이에 대한 고려가 중요하다.
가금 및 가축의 살모넬라중을 일으키는 에서 편모항원을 순수분리하고 이를 면역원으로 산란계에 면역하여 난황 중에 형성된 항체와 혈청간에 면역 반응을 조사하고 생산된 에 대한 특이난황 항체의 특이성 검사와 항체회수율 검사를 실시한 결과S. enteritidis는 다음과 같다. 1. S. enteritidis에서 순수 분리한 flagella protein 의 분자량은 54.6 kDa으로 나타났다. 2. 산란계의 혈청중 항체가 형성은 면역 후 2주경부터 급격히 증가하기 시작하여 6주경에 최고의 항체가 수준에 도달하였다. 반면에 난황중 항체가는 면역 후 4주경부터 급격히 증가하기 시작하여 6주경에 혈청항체가 수준과 동일하게 도달되며, 10주 이후에는 혈청항체가 수준보다 높게 형성되어 일정한 수준을 유지하였다. 3. S. enteritidis의 flagella protein을 면역원으로 산란계에 면역하여 생산된 난황항체는 주로 S. enteritidis 균주에서만 특이적으로 반응하며 E. coli (Kl2:K99, K88+, 987P) 균체에서는 반응이 전혀 없는 것으로 나타났다. 4. 한개의 난으로부터 분리한 IgY의 함량은 106 mg이었으며 회수율은 88.3%였다.
본 실험은 식용유와 계란노른자를 재료로 한 난황유를 이용하여 담배가루이에 대한 방제기술을 개발하기 위해 수행되었다. 파프리카의 담배가루이 약충에 난황유를 처리하였을 때, 94.5%의 높은 사충률을 보여 화학농약인 피리다벤과 유의차가 없었으나, 토마토의 담배가루이 약충에는 41.4%의 사충률로 식물추출물인 님오일보다 낮게 나타났다. 하지만 토마토에서 난황유 처리구와 님 처리구에서 성충의 사충률은 유사하였다. 난황유는 파프리카와 토마토에서 담배가루이의 산란에 각각 75.8%와 52.7%의 저해효과를 보여주었다. 친환경재배 포장에서 난황유를 2회 사용하였을 때 파프리카에서는 100%, 토마토에서는 무처리구 대비 38%의 가루이류 방제효과가 나타났다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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