One of the objectives of this work is to obtain information relevant to the industrial production of alcohol from sugar. The fermentation of alcohol by a strain of saccharomycess cerevisiae ATCC 24858 was studied In a continuous single-stage process with recycle of the cells via tangential flow microfiltration membranes. The experimental results reported in this study pertain to continuous cultures with total cell-recycle by varying the dilution rate (D=0.3, 0.5, and 0.7 $hr^{-1}$) and glucose concentration (50, 100, 150, and 200g/l sugar solution). Productivity using a repeated cell recycle system was found extremely high, 1.e., over 10 to 29 times higher than that of a smile batch system. When a sugar concentration of 200g/1 at dilution rate, 0.7 hr-1 was used, 83.9g/l ethanol was formed with an ethanol yield of 0.42(82% of theoretical) based on sugars utilized.
A gene(GeneBank AF 135796) coding for a trehalose synthase from Thermus caldophilus GK24 was cloned into Escherichia coli K12 using five vector systems. The constitutive expression system(pHCETS) which shows the highest trehalose synthase activity from flask culture of recombinant E. coli was selected for the production of trehalose from maltose. For the shake flask culture, the final dry cell weight was 0.9 g/L and the trehalose synthase activity was 25 U/mL. Fed-batch culture of recombinant E. coli harboring plasmid pHCETS which uses the glycerolas a carbon source was performed in jar fermentor: the dry cell weight of 20 g/L and the trehalose synthase activity of 13.7 U/mL were attained in 48 h.
Protein productivities of a cloned gene ($\beta$-galactosidase) and the cultural performances of two recombinant Escherichia coli strains, which use different host-vector systems, were studied. E. coli JM109/pTBG10 strain which carries Tac promoter had higher protein productivity than E. coli MH3000 (pRKc1857)/pASI(lacZ) strain which carries pL promoter. Induction of protein syn-thesis was optimum at the initial-and mid-logarithmic growth phases for both strains. Oxygen demand was observed to be very high during the cloned gene expression, and could be alleviated to some extent through pH control. The ratio of specific growth rates of plasmid-harboring to plasmidfree cell, $\mu$+ /$\mu$-, of the high productivity strain was observed to be lower than that of the low productivity one. Plasmid stability was analyzed for 20-30 generations, and it was found that the traction of plasmid-harboring cells dropped to l0% level in about 25 generations for both strains when the cloned gene expression was induced.
The effects of variation in composition of the medium on the conversion of Gluconacetobacter hanseii PJK cells producing cellulose ($Cel^+$) to non-cellulose producing ($Cel^-$) mutants and the production of bacterial cellulose (BC) in an agitated culture were investigated. The impeller speed greater than 500 rpm was required to decrease the population of $Cel^-$ mutants to minimum in a basal medium containing $1.5\%$ ethanol because the optimum impeller speed to minimize the population of $Cel^-$ mutants increased with the concentration of ethanol added to a basal medium. Ethanol fed-batch culture could not increase the BC production in an agitated culture unlike that of a shaking culture. The amount of BC produced in a basal medium containing $1\%$ ethanol was $39\%$ more than that of the same medium with $0.27\%\;Na_{2}HPO_4$. Increase in the concentration of acetic acid in a basal medium decreased the BC production. The pH control of the culture broth increased the cell mass in the batch culture and improved the production yield of water-soluble polysaccharide (WSPS), but did not affect the production of BC.
The effectiveness of resting cells of a photosynthetic bacterium, Rhodospirillum rubrum N-1, was investigated on the production of extracellular ${\delta}-aminolevulinic$ acid(ALA). The ALA generating system required 3hr-incubation in the presence of 10mg of resting cells per ml to obtain the maximal yield of extracellular ALA. and also, under this condition the effect of ALA inducers, i.e., 30mM levulinic acid (LA) and L-glutamic acid($C_5$ pathway precursor) was relatively higher than that of produced extracellular ALA($83{\mu}M$). The volume of system and proper cell density appeared to be important factors for the effective production of extracellular ALA.
During the biodesulfurization of dibenzothiophene to 2-hydroxybiphenyl by Rhodococcus erythropolis IGTS8, a surfactant-like substance was secreted into the medium resulting in the decrease of the surface tension of the medium. Due to the substance, the optical density (at 600 nm) of the medium had no co-relation with dry cell weight during cultivation. The growth rate of IGTS8 increased by the addition of 1 % Tween 80, but it was inhibited over Tween 80 concentration of 2 % (v/v).
The batch and fed-batch cultivations of Brevibacteriurn CHI were carried out for the production of nitrile hydratase. In batch culture, with pH control the cell mass and the specific activity increased more 20% and 30%. respectively. The maximum growth rate was obtained at a glucose concentration of $20g/{\ell}$ because of substrate inhibition. The fed-batch culture of Brevibacteriurn CHI with constant substrate feeding gave a cell density of up to $68g/{\ell}$ and nitrile hydratase activity was maintained at above 6.1units/mg. The cell growth yield on carbon .source was ca. 0,68 g/g glucose consumed. The total nitrile hydratase activity in this fed-batch mode increased up to 414.8 units/m${\ell}$, which amounted to 4.4 times that of the batch culture.
A large number of methanol-assimilating yeasts and bacteria were isolated from samples of soil, sewage, decomposed milk and spoiled sweet-radish pickles. Among the yeasts, one strain was selected and identified as a strain of Candida boidinii. In 1% (v/v) methanol Candida boidinii YF-3 grew well and could grow in as much as 5%. This yeast required boitin for grwoth. Maximum growth was observed at $30^{\circ}C$ and pH 6 in a semisynthetic medium. The productivity was 2.72g dry cells per liter in batch culture with 1%(v/v) methanol and the cell yield for methanol was $0.39\;gg^{-1}$. The specific growth rate was $0.11\;h^{-1}$ and the generation time was 6.4 hours. The protein content of the cell was 45.5% and total nucleic acid content was 5.9%. The amino acid profile was as good as FAO standard for food protein.
The optimal concentrations of salts in medium for cell growth and the production of carboxymethylcellulase (CMCase) by a recombinant E. coli JM109/DL-3 were established using two statistical methods: orthogonal array method (OAM) and response surface method (RSM). The analysis of variance (ANOVA) of data based on OAM indicated that $K_2HPO_4$ gave maximum sum of square (S) and percentage contribution (P) for cell growth as well as production of CMCase. The optimal concentrations of $K_2HPO_4$, NaCl, $MgSO_4{\cdot}7H_2O$, and $(NH_4)_2SO_4$ in medium for cell growth extracted by Qualitek-4 (W32b) Software were 10.0, 1.0, 0.2, and 0.6 g/l, respectively, whereas those for the production of CMCase by E. coli JM109/DL-3 were 5.0, 1.0, 0.4, and 0.6 g/l. The analysis of variance (ANOVA) resulting from RSM indicated that a highly significant salt for cell growth was $K_2HPO_4$ ("probe>F" less than 0.0001), whereas $K_2HPO_4$ and $MgSO_4{\cdot}7H_2O$ were significant for the production of CMCase. The optimal concentrations of $K_2HPO_4$, NaCl, $MgSO_4{\cdot}7H_2O$, and $(NH_4)_2SO_4$ for cell growth extracted by Design Expert Software were 7.44, 1.08, 0.22, and 0.88 g/l, respectively, whereas those for production of CMCase were 5.84, 0.69, 0.28, and 0.54 g/l. The optimal concentrations of salts and their influences on cell growth and production of CMCase extracted by OAM were almost the same as those by RSM. Production of CMCase by a recombinant E. coli JM109/DL-3 under optimized concentration of salts was 1.93 times higher than that by Bacillus amyloliquifaciens DL-3.
In order to obtain the basic informations on the production of single cell protein from ethanol, 145 yeast strains utilizing ethanol as a sole carbon source were isolated from 32 soil samples in Korea. A yeast strain showing the highest cell yield among the isolated strains was selected and identified. The optimum culture condition, utilization of other carbon sources and the cultural characteristics for the selected yeast, and the chemical analysis of the yeast cell composition, and utilization of ethanol by the selected yeast were investigated. All the culture was carried out in the shaking flasks. The results obtained were as follows: 1. The selected yeast strain was identified as Debaryomyces nicotianae-SNU 72. 2. The optimum composition of the medium for the selected yeast is : Ethanol 40 ml, Urea 0.5 g, Potassium phosphate (dibasic) 0.5 g, Ammoium phosphate (monobasic) 0.15 g, Magnesium sulfate 0.05 g, Calcium chloride 0.01g, Yeast extract 0.005 g, Tap water 1000 ml. 3. The optimum pH was 5.0-5.5, the optimum temperature $30-33^{\circ}C$ and the aerobic state was unimportant. 4. Utilization of methanol, n-propanol, iso-propanol, n-butanol, iso-butanol, tert-amyl alcohol and acetic acid by the selected yeast was very weak. So substitution of the subtrate was thought to be impossible. 5. Studies on the propagation of the yeast cells showed that the lag phase of the yeast cells lasted 16 hours, and the logarithmic growth phase extended 16 to 28 hours. The specific growth rate was about $0.19\;hr^{-1}$ and the doubling time was 3.6 hours during the logarithmic growth phase. 6. As the result of the chemical analysis of the dry yeast cells, the content rate of the crude protein was 55.19 %, the content of others was similar to the average content of the yeast component. 7. After 34 hours cultivation, under the optimum culture condition investigated, the dry cell yield against the amount of the added ethanol was 53.4 % (W/V%), the dry cell yield against the amount of the utilized ethanol was 73.6 % (W/V%), the evaporation rate of ethanol was about 19.1 %.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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