저선량 방사선에 의한 생물학적 효과를 규명하기 위하여, 쥐의 전신에 저선량 X-Ray을 조사하여 쥐의 정자에 미치는 생물학적효과를 관찰하였다. 실험용 동물인 Sprague-Dawley(SD) rat 총 36마리를 6마리씩 구분하여, 각각 대조군, 10 mGy, 20 mGy, 50 mGy, 100 mGy, 200 mGy의 X-Ray을 전신 조사하였다. 0.1g 당 정자수는 각각 $14.216{\times}10^6,\;13.901{\times}10^6,\;14.153{\times}10^6,\;13.831{\times}10^6,\;14.137{\times}10^6,\;14.677{\times}10^6$로 통계적인 차이는 나타나지 않았고, 정자의 운동성은 각각 50.9%, 49.5%, 55.1%, 54.3%, 48.0%, 52.2%이었다. 그리고 남성호르몬은 대조군에 비하여 모두 증가함을 보였고, 현미경 시야에서 고환조직을 확인한 바로는 정세관, 정소세포에서 공포화가 나타나지 않았다. 이 같은 결과로부터 과학기술부와 보건복지부의 법령에서 제한하는 선량이하에서 피폭선량이 관리된 SD rat에게 유해한 효과가 나타나지 않았다. 그러나 이와 같은 연구의 결과는 제한된 숫자의 동물에게서 확인한 결과이므로 인체에서 동일한 효과가 나타난다고 주장할 수 없다. 그러므로 향후 다른 동물과 궁극적으로 인체에 나타나는 효과에 대한 추가적인 연구가 이루어져야 할 것이다.
In IVF-ET program, intracytoplasmic sperm injection(ICSI) has been performed with testicular sperm extraction(TESE) in case of no normal spermatozoon could be retrieved from the epididymis. We wished to see whether the quality of testicular sperm affect the fertilization and pregnancy rate in TESE-ICSI cycles(n=40). These cycles were classified into three groups by the total number of normal motile spermatozoa(TNMS) in the TESE sample: i) good sperm(GS) group(n=12), TNMS > 10,000; ii) moderate sperm(MS) group(n=19), 1,000 < TNMS < 10,000; iii) poor sperm(PS) group(n=9), TNMS < 1,000. Among 423 injected oocytes, 307(72.6%) oocytes were normally fertilized and 43 zygotes were cryopreserved. The fertilization rates of GS group(79.3%) and MS group(75.9%) were significantly(p<0.005) higher than PS group(60.2%). After the embryo transfer(n=40), clinical pregnancy was obtained in 14 cycles(35.0%) and on-going pregnacy in 13 cycles(32.5%). The clinical and on-going pregnancy rates were similar in each group. From these results it can be concluded that testicular spermatozoa are successfully used with ICSI in IVF-ET program in spite of very poor quality of TESE sample.
This case report describes the pregnancy following the transfer of embryos generated from intracytoplasmic sperm injection (ICSI) using frozen-thawed sperms obtained by testicular sperm extraction (TESE) in patient with hypoplasia of vas deferens.
카드뮴 (Cd)의 투여가 흰쥐의 임상적인 중독 정도와 청자능력 및 장기조직에 미치는 영향을 조사하였다. 카드뮴의 임상적인 중독증 유발을 위한 시험사료는 흰쥐용 purified diet(AIN-76)에 CdCl를 이용하여 Cd 농도가 각각 0, 25, 50, 100 및 250ppm이 되도록 첨가하였다. 생후 7주령 ( 평균체중 231$\pm$14g) 된 Sprague-Dawley계 웅성 흰쥐 30 수를 체중에 따라 완전임의 배치법으로 6수씩 5군으로 나누어 8주간 사육하였다. 중체량, 사료섭취량 및 음수량은 카드뮴 첨가수준이 높을수록 유의하게 감소한 것으로 나타났으며, 장기무게에 있어서 특히 신장과 정소의 무게는 카드뮴 첨가수준이 높을수록 비대하였고 처리구간 유의한 차이가 있었다 (P<0.05). Hematocrit 치와 hemoglobin 함량 역시 Cd 첨가수준이 높을수록 감소하였고 처리구간 유의한 차이가 있었다 (P<0.05). 식이중 카드뮴의 간과 신장조직에의 평균 축적율은 간 조직이 34.1%, 신장조직이 54.3% 이었고, 저수준의 Cd 투여군이 고수준의 Cd 투여군 보다 간과 신장조직에의 축적율이 대체로 높았다. 간 조직중 metallothionein(MT) 함량은 대조군 (A) 이 30.0 $\mu\textrm{g}$/g 인데 비해 250ppm 투여군 (E) 에서는 138.6 $\mu\textrm{g}$/g 으로 카드뮴 투여수준에 따라 MT 합성은 유의한 영향을 받은 것으로 나타났다. 정자농도는 대조군에 비해 Cd 투여수준에 따라 유의한 감소 경향 (P<0.05) 이었고, 정자 활력은 비록 통계적인 차이는 없었으나 대조군에 비해 Cd 투여군에서 낮은 경향이었다. 한편 카드뮴 투여가 조직병변에 미치는 결과를 보면 육안병변의 경우 대조군에 비하여 Cd l00ppm과 250ppm 투여군의 흰쥐에서 외관상 수척되어 있었고, 특히 250ppm 투여군의 흰쥐에서 신장과 고환의 현저한 위축이 관찰되었다. 병리조직학적 검사에서 Cd 투여군에서 간상간세포의 변성, 간세포와 간세포사이의 모세혈관이 sinusoid에서의 호산성물질의 저류 및 Kupffer cell의 활성화가 관찰되었다. 신장의 경우 Cd 투여군에서 세뇨관 상피세포의 변성 및 호염성병변이 관찰되었으며 고환에서는 Cd 투여 농도에 의해서 세포변성, 정자세포수의 감소 및 거핵세포의 출현이 관찰되었다. 따라서 카드뮴에 장기간 노출은 성선조직의 변화에 의해 정자활력 및 농도의 감소가 일어나고 이로 인해 번식효율이 저하되는 한 요인으로 작용되는 것으로 사료된다.
Nicotine(2~15mg/kg 2주간, 100mg/kg 회 투여)을 생후 4개월령 수컷 생쥐에 투여한 후, 고환에 미치는 광학현미경적 소견은 다음과 같다. 1. Nicotine 2mg/kg 투여군에서는 정세관과 정세관 주위의 Leydig 세포도 핵과 세포질이 뚜렷한 정상적인 소견을 나타내었으나, 5 mg/kg 투여군에서는 Leydig 세포의 핵과 세포질이 다소 비후되었으며, 염색정도가 약하였다. 2. 10 mg/kg 투여군은 대부분 정세관내의 정자발생의 배열이 불규칙적으로 존재하여, 정세관의 단계를 구분할 수 없었고, Leydig 세포도 핵이 융해되어 관찰되지 않았고, 세포질 역시 불명확하게 나타났다. 3. 15 mg/kg 투여군에서는 정모세포 및 정자세포의 핵과 세포질이 파괴되었으며, 정세관의 내강이 관찰되지 않을 정도로 섬유화된 결합조직이 채워져 있었다.
Objective: The purpose of this study was to evaluate outcome of intracytoplasmic sperm injection (ICSI) using epididymal and testicular sperm in patients with azoospermia. Methods: From March, 1993 to May, 1999, a retrospective clinical analysis was done of a total of 140 cycles in 112 patients who underwent ICSI. Subjects were divided into three groups: ejaculated-ICSI group included 42 cycles in 34 patients with ejaculated sperm who underwent ICSI due to severe oligospermia and past history of failed or poor fertilization in the previous in vitro fertilization and embryo tranfer (IVF-ET) cycles, microsurgical epididymal sperm aspiration and intracytoplasmic sperm injection (MESA-ICSI) group included 50 cycles in 42 patients with congenital absence of the vas deferens (CAVD) or unreconstructable obstructive azoospermia and testicular sperm extraction and intracytoplasmic sperm injection (TESE-ICSI) group included 48 cycles in 36 patients with no spermatozoa which can be retrieved from epididymis or non-obstructive azoospermia. Results: Normal two-pronuclear fertilization rates were similar in three groups: 64.4% for ejaculated-ICSI group, 59.4% for MESA-ICSI group and 60.4% for TESE-ICSI group. The pregnancy rates were 26.2%, 26.0% and 25.0% respectively. There were no significant differences in the fertilization, cleavage, and clinical pregnancy rates among ICSI cycles using ejaculated, epididymal and testicular sperm. Conclusion: Epididymal and testicular sperm obtained in azoospermic patients can fertilize oocyte successfully and may lead to be similar fertilization rates and clinical pregnancy rates to ejaculated sperm.
수의사들은 수캐와 고양이를 구입하기전 수캐의 번식력에 대한 검사를 요청 받을 때가 가끔 있다. 미국의 경우 Kennel club 지침에서는 7개월 보다 어린 개 또는 12세 이상된 개를 종견으로 등록할때는 번식력에 대한 소견서 혹은 증명서를 제출하여야만 한다고 되어있다. 번식력 검사에는 수캐의 완전한 병력을 수집해야하며 병력으로 과거 상처, 질병, 예방접종, 투약상태, 고환이 음낭으로 하강한 상태, 년령, 음낭부종 또는 외상의 발생상태 등이 포함되어야한다. 또한 애완동물의 가계에 대한 번식력에 대해서도 찾아보도록 노력해야 한다. 환축을 검사하기전 병력을 축주에 문의하는 것도 하나의 좋은 방법이다. 건강한 수컷이 암캐와 교미를 하지 못할 경우에는 번식관리의 검사에 세심한 주의를 기우려야 한다. 또한 산자의 최종출생일, 산자수, 교미회수, 번식시킨 암컷의 수, 교미형태, 수컷의 성욕 및 승가행위 등에 과한 것들을 조사해야 할 것이다. 이러한 병력으로 수컷은 항상 불임성을 최초에 불임성을 보였는지 또는 저임성을 보였는지를 알수있게 된다. 새끼를 낳아보지 못한 개와 고양이는 선천적으로 불임이 되고 이러한 수컷도 예후는 불량하다. 개와 고양이가 과거에 새끼를 임신한 경험이 없다면 생식기의 전염성 또는 염증과 관련이 있을 수도 있다. 축주는 개 인공수정을 하기 위하여 정액을 채취할 때 물, 소독약 및 윤활제 등으로 인하여 정자의 사멸을 의식하지 못하고 있기 때문에 채취방법을 상세하게 설명하여 주어야 한다. 또한 암컷의 번식문제에 대해서도 상세하게 검사하여야 하며 개와 고양이가 불임되는 가장 흔한 이유는 번식관리에 문제점이 있으며, 이와 같은 경우에는 암컷을 검사하기 전에 수컷을 검사하는 것이 중요하다. 수컷의 검사는 사진으로도 용이하므로 비용도 절감되나 암컷은 생식기관을 검사하여야 되기 때문에 많은 경비가 든다. 그러나 번식력의 유일한 증거는 태아를 생산하는 것이며 많은 다른 검사 방법으로 평가 할 수도 있으나 번식력을 증명할 수는 없다.
TCDD로 유발할 수 있는 남성 난임 원인 중 가장 큰 비율을 차지하는 것은 정자형성 장애와 정자의 질적 저하가 있다. 이를 해결하기 위해 GYB의 한의학적 처방을 이용하여 TCDD-유도 생식독성을 유발한 랫드에서 내분비기능 및 생식독성 관련 지표에 미치는 영향을 조사하고자 본 연구를 시행하였다. 수컷 SD 랫드를 5개의 그룹으로 7마리씩 나누어 실험하였다. 정상 대조군은 vehicle 및 saline을 투여하였으며, TCDD 단독투여그룹은 TCDD(2 ㎍/kg, weeks) 및 생리식염수를 복강 내 투여하였으며, 시험 군은 6주 동안 GYB (75, 150, 300 mg/kg)를 3가지 농도로 나누어 경구로 투여하였다. TCDD를 투여한 모든 군에서 체중 감소가 나타났으며, 호르몬 변화에서 GYB 300 mg/kg 투여군에서 free testosterone의 유의한(p<0.01) 감소가 나타났다. 또한 GYB 투여군의 고환조직에서 생식세포 일부 파괴, 정세관 위축 그리고 정자 수의 감소가 농도 의존적으로 개선되는 것이 관찰되었다. 또한 Johnsen's score, serotoli cell index(SCI)에서도 농도 의존적으로 개선되었다(p<0.05). 이러한 발견은 향후 남성 난임의 해결방안으로 의학적 시술이 아닌 약물요법을 효과적으로 사용할 수 있을 것으로 기대할 수 있다.
Objective: ICSI with testicular sperm could achieve optimal fertilization and pregnancy. This study was performed to observe the influence on fertilization and pregnancy of motility of fresh testicular sperm and sperm extracted from frozen-thawed seminiferous tubules in obstructive azoospermia. Materials and Methods: We analysed clinical outcome of ICSI using fresh testicular sperm and sperm extracted from thawed seminiferous tubules. The presence of motility were compared to determine the factor for optimal fertilization and pregnancy rates. Results: In 316 cases of TESE-ICSI in obstructive azoospermia, ICSI with fresh testicular sperm (fresh sperm group) were 163 cases and ICSI with sperm testicular sperm extracted from frozen-thawed seminiferous tubule (thawed sperm group) were 153 cases. The fertilization rates were 71.3% and pregnancy rates were 32.5% in fresh sperm group, in thawed sperm group, 65.1% and 33.3% respectively. The fertilization and pregnancy rates of motile and non-motile testicular sperm were 72.9% and 33.6%, 50.0% and 18.2%, respectively (p<0.05). The fertilization and pregnancy rates of motile and non-motile sperm extracted from the thawed seminiferous tubule were 67.8% and 34.7%, 55.1% and 28.1%, respectively (p<0.05). The comparative of the results of ICSI using motile fresh testicular sperm and motile sperm extracted from thawed seminiferous tubule, fertilization and pregnancy rates were not significantly different (72.9% and 33.6%, 67.8% and 34.7%, respectively). Conclusion: These results suggest that successful pregnancy in TESE-ICSI treatment is influenced by the motility of fresh testicular sperm and sperm extracted from thawed seminiferous tubule in obstructive azoospennic patients.
방사선 및 각종 독성물질에 의한 고환 정세관세포의 사멸은 apoptosis와 관련이 있다고 알려져 있으나 정세관상피주기에 따른 apoptosis 발생에 대한 변화연구는 미진하다. 본 연구에서는 감마선을 조사한 ICR 마우스의 고환에서 apoptosis 발생을 transferase-mediated end labeling (TUNEL) 과 periodicacid-Schiff (PAS) 염색을 동시에 실시하여 관찰하였다. Apptosis는 TUNEL 양성으로 나타났으며 특징적 형태변화를 보였다. 2 Gy (분당 2 Gy의 선량률)의 방사선을 조사하고 24시간동안의 변화를 관찰한바 방사선조사 후 12시간에 가장 높은 apoptosis 발생을 보였고 이후 감소하였다. 8 Gy까지의 방사선을 조사하고 8시간에 변화를 관찰한 결과 모든 정세관상피주기에서 방사선 용량에 비례한 apoptosis의 발생이 관찰되었다. 방사선 용량-반응은 linear-quadratic 곡선 [y=(-0.014${\pm}$0.009)$D^{2}$ +(0.31${\pm}$0.697)D+0.3575. Y는 정세관 당 TUNEL 양성세포의 수, D는 방사선 용량(Gy), $r^{2}$=0.9]에 가장 일치 하였다. 최대반응은 8 Gy에서 관찰되었으며, 0.5 Gy조사군에서도 변화가 나타났다. 이러한 변화는 정세관상피주기 V에서 B정조세포와 정세관상피주기 XII의 분열기 정자세포에서 가장 현저하였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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