콩알메주 model system에 4종의 Bacillus 균주를 접종하여 45시간 발효시킨 후 메주의 일반성분, 효소활성, 향기성분 등을 분석하고 제조된 메주로 청국장, 된장, 간장을 제조하여 제품의 관능을 평가하였다. 발효메주의 pH는 $7.98{\sim}8.68$ 이었으며 아미노태질소는 $286{\sim}439$ mg%, 암모니아태질소는 $0.11{\sim}0.23%$, 환원당은 $0.65{\sim}2.24%$ 그리고 유리지방산은 $0.33{\sim}1.10%$의 수준이었다. 단백질과 당의 분해율은 B. subtilis구간에서 높았으며 암모니아태질소와 유리지방산의 생성율은 B. natto 구간에서 높게 조사되었다. 효소활성은 시간에 따라 증가하였다가 발효 40시간대부터 정체되는 양상이었으며 B. subtilis구간의 효소활성이 높았다. 각 실험구간별로 유리당 5종, 지방산 5종, 유기산 6종을 검출하였으며 당에서는 stachyose와 raffinose 함량이 많았고 유기산은 각 균주별로 특징적인 구성비를 보였으며 아미노산과 지방산은 보고된 실험결과들과 유사하였다. 향기성분은 총 81종이 검출되었으며 pyrazine류와 3-methyl-1-butanol, benzaldehyde등이 Bacillus 메주의 공통적인 향기성분으로 분석되었다. 각 메주를 혼합하여 제조한 장류제품의 관능평가를 실시한 결과 청국장은 B. natto와 B. licheniformis를 혼합한 구간이, 된장에서는 B. megaterium과 B. subtilis의 혼합구간이, 간장에서는 B. megaterium과 A. oryzae의 혼합구간이 양호한 평가를 받아 각 제품별로 적정한 균주를 사용할 필요성이 있음을 알 수 있었다.
Dehydropeptidase-I (DHP-I) was solubilized from porcine kidney by treatment with n-butanol and partially purified 19.25 fold by $(NH_4)_2SO_4$ precipitation, DEAE-Sepharose CL-6B ion exchange chromatography and Sephacryl S-300 HR chromatography with an overall yield of 19.16. DHP-I showed its optimal activity at pH 7.5 and 25$^{\circ}C$. Its activity was stable under neutral and alkaline conditions, but was disappeared under acidic condition. And DHP-I was heat-labile and its activity remained at 45$^{\circ}C$ for 3hrs. The enzyme was not inhibited by dicationic ions, while its activity was increased by $Co^{2+}$(1mM) and $Zn^{2+}$ (0.1mM). The enzyme was inhibited by EDTA and N-ethylmaleimide. The relative molecular mass of DHP-I was estimated to be approximately 100kDa by gel filtration chromatography. The $K_m$ value of DHP-I for glycyldehydrophenylalanine (GDHP) was 1.98mM. DWP20418 [(1R, 5S, 6S)-6-[1-(R)-Hydroxyethyl]-1-methyl-2-[(2S, 4S)-2-(piperazinylcarbonyl)-1-(R)-hydroxyethyl)pyrrolidine-4-thio]carbapen-2-em-3-carboxylic acid], compared with meropenem (MEPM), was rather easily hydrolized by DHP-I, while it was four times more resistant than imipenem (IPM) to DHP-I.
식용 및 약용으로 이용되는 산초(Zanthoxylum schinifolium)의 줄기로부터 항암활성 성분을 분리하기 위하여, 산초 줄기를 유기용매로 추출하고 각 추출물의 인체 급성백혈병 암세포에 대한 독성 및 세포자살 유도 활성을 조사하였다. Methanol (SS-7), methylene chloride (SS-8), ethyl acetate (SS-9), n-butanol (SS-10)로 추출한 각 시료와 유기용매 추출 후 잔여분획 (SL-14)의 세포 독성을 인체 급성백혈병 Jurkat T 세포주를 대상으로 조사한 결과, 암세포에 대한 세포독성이 주로 methylene chloride 추출분획인 (SS-8)에서 확인되었다. Methylene chloride 추출물 (SS-8)의 Jurkat T 세포주에 대한 세포독성의 기전은 mitochondria로부터cytochrome c 방출, caspase-9 및 caspase-3의 활성화, PARP 분해, internucleosomal DNA fragmentation 등의 일련의 생화학적 반응을 수반하며, 항 세포자살단백질인 Bcl-xL단백질의 과발현에 의해 억제되는 세포자살 기전임을 확인하였다. FADD가 disruption된 Jurkat T cell clone I2.1 ($FADD^{-/-}$) 및 caspase-8가 결핍된 Jurkat T cell clone I9.2 (caspase-$8^{-/-}$)와 함께 the wild-type Jurkat T cell clone A3에 미치는 SS-8의 세포독성작용을 비교 분석한 결과, wild-type Jurkat A3, FADD-deficient Jurkat clone I2.1및 caspase-8-deficient Jurkat clone I9.2 모두는 SS-8의 세포독성에 대해 유사한 정도의 감수성을 나타내었다. 이는 SS-8에 의해 유도되는 apoptosis에 있어서, Fas/FasL system이 관계되지 않음을 시사한다. 한편, SS-8를 GC-MS 분석하여, 9,12-octadecanoic acid (18.62%), 2,4-dihydro-5-methyl-4-(1-methylethylidene)-2-(4-nitrophenyl)- 3H-pyrazol-3-one (14.97%), hexadecanoic acid (14.23%), (z,z)-6,9-pentadecadien-1-ol (13.73%), 5,6-dimethoxy- 2-methyl benzofuran (10.95%), 그리고 4-methoxy-2-methylcinnamic acid (5.38%) 등을 포함한 16가지의 구성 성분과 그 조성비를 확인하였다. 이상의 연구결과는 산초 줄기에 함유된 항암 활성에 대한 규명과 이해를 증진시킨다.
목단피의 mouse 복수암에 대한 항암성을 다른 생약제의 항암성과 비교하여 연구하였다. 천연생약제(목단피, 주목, 울금, 인경쓱, 여정실, 맥문동) methanol 추출물을 hexane, chloroform ($CHCl_3$), ethylacetate (EtOAc), butanol (BuOH)로 fractionation하여 mouse leukemia L1210 cell과 Sarcoma 180 (S-180) cell에 강한 독성을 나타낸 fraction에 대해 mouse 복수암 억제실험을 실시하였다. 복수형 종양세포 S-180을 ICR mouse (male, $6{\sim}7$주령, $23g{\pm}3g$, 처리당 7마리)의 복부에 주사 ($1{\times}10^{6}$ cells/0.1 ml PBS)한 1일 후 부터 10% DMSO에 용해한 시료 ($30{\mu}g/g$ body weight)를 매일 0.1ml씩 10일간 주사하고 수명연장 효과와 몸무게의 변화를 조사하였다. 처리 fraction 중에서 목단피의 EtOAc fraction이 가장 강한 항암성을 보였는데, 수명연장에서는 대조구의 17.2일 (100%)에 비하여 28.7일로서 167%로 연장되었으며, 체중 증가율도 대조구보다 낮았다 (p<0.05). 목단피의 농도별 (5, 10, 30, $60{\mu}g/g$ body weight) 항암효과는 $30{\mu}g$에서 가장 높았고, $60{\mu}g$처리구 에서는 독성이 나타났다. 목단피의 EtOAc fraction으로부터 GC-MS에 의해 잠정적으로 동정된 2-methoxyphenol, 1-(4-hydroxy-3- methoxyphenyl)-ethanone, 8-methyl-2,4(1H,3H)-pteridinedione, 2,5-furandicarboxylic dimethyl ester 가 mouse 복수암 억제에 관련이 있는 주요 화합물로 추정된다.
올벚나무 잎 추출물을 제조하고 LPS로 자극시킨 RAW 264.7 대식세포에 대한 항염 효과를 조사하였다. 추출물 및 분획물(n-hexane, ethyl acetate, n-butanol 및 water)에 대하여 활성 실험을 진행한 결과, $100{\mu}g/mL$ 농도에서 ethyl acetate (EtOAc) 분획물이 세포독성 없이 76.3%의 NO 생성 억제 효과를 나타내었다. 또한 EtOAc 분획물이 농도 의존적으로 NO 생성을 효과적으로 억제하고 있음을 확인하였다. 이러한 항염 효과에 대한 추가적인 기전 연구를 진행한 결과, EtOAc 분획물이 $PGE_2$, $IL-1{\beta}$ 및 IL-6의 생성을 감소시켰으며, iNOS와 COX-2 단백질의 발현도 억제시키는 것을 확인하였다. EtOAc분획물에서 활성 성분을 규명하기 위하여 column chromatography를 진행하였으며 5개의 화합물을 분리 동정하였다. ursolic acid (1), prunasin (2), methyl p-coumarate (3), kaempferol (4), astragalin (5). 분리된 compound 1 - 5는 모두 올벚나무 잎에서 처음 분리된 물질이다. 분리된 화합물을 대상으로 활성 실험을 진행한 결과, 플라보노이드 compound 4와 5가 NO 생성을 억제하고 있음을 확인하였다. 이상의 결과를 바탕으로, 플라보노이드를 유효성분으로 함유하는 올벚나무 잎은 항염 효과를 갖는 천연 소재로서 활용이 가능할 것이라 사료된다.
In spore rec-assay using B. subtillus H17(rec) and M 45(rec) , the ethanol extract of buckwheat leaves showed antimutagenicity in condition of low concentrations, but its did comutagenicity in condition of high concentrations. In Ames test, the ethanol extract of buckwheat leaves reduced the mtabenicity of N-methyl-N' -nitro-N-nitrosoguaidine (MNNG), benzo (a) pyrene(B($\alpha$)P), 2-amino-fluorene(2AF), and 3-amino -1, 4-dime-thyl-5-H-pyrido(4, 3-b) indol(Trp-P-1) in Salmonella typhimurium TA98 and TA100. The ethanol extract was fractionated by hexane, ethylacetate, butanol and water. Among Them hexane fraction showed the highest inhibition rate on the mutagenicity of B($\alpha$)P, and so did chloroform fraction on the mutagenicity of MNNG in S. typhimurium Ta98 and TA100. To elucidate the antimutagenic mechanism of the ethanol extract, it was mixed and co-incubated with various metagens, S9 mix, and the bacteria with different experimental orders and different reaction times. The ethanol extract did not affect reversion rate of pre-mutated. S.typhimurium. However, when the ethanol extract was added to the mutagens before their interaction with S.typhimurium , it reduced the mutation rate to 152$\pm$12-273$\pm$18 colonies/plates in case of MNNG, and 135$\pm$13-195$\pm$10 colonies/ plates in case of B($\alpha$)P), showing strong desmutagenic activity.
Prajapati, Ritu;Seong, Su Hui;Kim, Hyeung Rak;Jung, Hyun Ah;Choi, Jae Sue
Natural Product Sciences
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제26권3호
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pp.214-220
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2020
Brassica oleracea var. gongylodes (red kohlrabi) is a biennial herbaceous vegetable whose edible bulbotuber-like stem and leaves are consumed globally. Sliced red kohlrabi tubers were extracted using methanol and the concentrated extract was partitioned successively with dichloromethane (CH2Cl2), ethyl acetate (EtOAc), n-butanol (n-BuOH) and water (H2O). Repeated column chromatography of EtOAc fraction through silica, sephadex LH-20 and RP-18 gel led to isolation of eleven compounds of which compound 1 was a new glycosylated indole alkaloid derivative, 1-methoxyindole 3-carboxylic acid 6-O-β-D-glucopyranoside. Others were known compounds namely, β-sitosterol glucoside (4), 5-hydroxymethyl-2-furaldehyde (5), methyl-1-thio-β-D-glucopyranosyl disulfide (6), 5-hydroxy-2-pyridinemethanol (7), (3S,4R)-2-deoxyribonolactone (8), n-butyl-β-D-fructopyranoside (9), uridine (10) and three fructose derivatives, D-tagatose (11), β-D-fructofuranose (12) and β-D-fructopyranose (13). Similarly, isolation from CH2Cl2 fraction gave two known indole alkaloids, indole 3-acetonitrile (2) and N-methoxyindole 3-acetonitrile (3). The structure elucidation and identification of these compounds were conducted with the help of 13C and 1H NMR, HMBC, HMQC, EIMS, HR-ESIMS and IR spectroscopic data, and TLC plate spots visualization. Compounds 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 and 9 are noted to occur in kohlrabi for the first time. Different bioactivities of these isolated compounds have been reported in literature.
효과적으로 선충 방제에 사용되던 토양훈증제 methyl bromide와 비훈중제 농약이 환경오염 문제로 인해 사용이 금지됨에 따라 선충의 방제는 어려워지고 있다. 따라서 이를 대체할 수 있는 생물 기반의 살선충제의 개발이 시급히 요구된다. 본 연구는 화학적 농약의 대안으로서 방선균을 이용한 살선충제 개발을 목적으로 2,700개의 토양방선균 배양액의 50% 메탄올 추출액의 뿌리혹선충에 대한 살선충 활성을 스크리닝하였다. AN110065 균주는 배양액 10%에 해당하는 50% 메탄올 추출액 20% 처리 1일 후 78.9%의 치사 활성을 보였으며, 처리 3일 후 94.1%의 살선충 활성을 보였다. 선발 균주의 분자생물학적 동정을 위해 16S rRNA sequencing 분석을 수행한 결과 S. netropsis와 99.78%의 상동성을 보였다. S. netropsis AN110065 배양액을 에틸 아세테이트, 부탄올을 이용하여 용매 분획하여 에틸 아세테이트와 부탄올, 물 추출물에 대한 살선충 활성을 조사한 결과 에틸 아세테이트 추출물의 $1000{\mu}g/ml$농도에서 83.5%로서 가장 우수한 살선충 활성을 보였다. AN110065 배양액의 토마토작물에 대한 뿌리혹선충병 방제 활성을 조사한 결과 10배 희석액 처리구에서 눈에 띄게 뿌리혹형성을 저해하였다. 이와 같은 결과로 AN110065 균주는 유기농업에서 사용할 수 있는 미생물 제제로서의 가능성이 있음을 나타내었다.
Suaeda (S.) asparagoides $M_{IQ}$, one of the halophyte groups, has been used as a folk remedy for digestive disturbances in Korea. However, its pharmacological activity on gastrointestinal motility has not been reported yet. In this study, the effects of this halophyte extracts with various solvent fractions (ethanol, hexane, chloroform, ethyl acetate, butanol, and water) on mice ileal spontaneous motility was examined. All solvent fractions at the concentration of $100{\mu}g/ml$ showed inhibitory actions on spontaneous motility of ileum with the potency order of water > 70% ethanol > hexane ${\gg}$ chloroform ${\geq}$ butanol ${\geq}$ ethyl acetate, respectively. In addition, the water fraction of extracts from S. asparagoides $M_{IQ}$ (WFSA) dose-dependently ($1-100{\mu}g/ml$) inhibited the amplitude of spontaneous phasic contraction and area under the contractile curve (AUC). The inhibitory effect of water fraction at the concentration of $10{\mu}g/ml$ was not affected by tetrodotoxin (TTX), $Na^+$ channel blocker ($1{\mu}M$), and $N^w$-nitro-L-arginine Methyl Ester (L-NAME), nitric oxide synthase inhibitor ($100{\mu}M$). However, cyclopiazonic acid (CPA, $10{\mu}M$), inhibitor of sarcoplasmic reticulum $Ca^{2+}$-ATPase, almost blocked the inhibitory effects of WFSA ($10{\mu}g/ml$) on the spontaneous phasic contraction of mouse ileum. But, CPA did not inhibit the lowering basal tone effects of WFSA. The result of this study showed that various extracts of S. asparagoides $M_{IQ}$ induce inhibitory effects on spontaneous contraction of mice ileal segments. More over, the polar solvent fractions were shown to be more potent than non-polar solvent fractions. The effects of S. asparagoides $M_{IQ}$ extracts are not mediated by nerve or nitric oxide. The inhibitory effects of WFSA at least partially mediated by sarcoplasmic reticulum $Ca^{2+}$-ATPase. However, further study is required to determine the exact pharmacological mechanisms of this halophyte on its gastrointestinal motility inhibitory effects.
A great variety of the volatile metabolic by-products was formed in yeast cell during alcohol fermentation. The seibel grape (Vitis labrasca) which was grown in the Southern Korea used for wines. The objective of this research was to identify the volatile flavor compounds during alcohol fermentation and aging at 12$^{\circ}C$. saccharomyces cerevisiae and Schizosaccharomyces pombe were inoculated and fermented in seibel grape must. The volatile flavor compounds of logarithmic, stationary and death phases were extracted, concentrated and identified by gas chromatography/mass spectrometer (GC/MS). The volatile flavor compounds were determined by a Hewlett-Packard 5890 II Plus GC which was equipped with Supelcowax 10 fused silica capillary column (60m$\times$0.32mm$\times$0.25${\mu}{\textrm}{m}$ film thickness) wall coated with polyethyleneglycerol. The scan detection method allowed the comparison of the spectrum from the chromatogram of volatile flavor compounds to those in data Wileynbs base library. Among the volatile compounds collected by ether-hexane extraction method, the evolution of 20 main compounds, such as 9 esters (ethyl butyrate, isoamyl acetate, ethyl caproate, n-hexyl acetate, ethl caprylate, ethyl caprate, diethy succinate, ethyl hexadecanoate, 2-pheneethyl acetate), 4 alcohols (3-methyl-1-butanol, 1-hexanol, 1-heptanol, benzoethanol), 4 ketones and acids (2-octanone, caproic acid, caprylic acid, capric acid), 2 furan and phenol (2,6-bis(1,1-dimethyl ethyl)phenol, 2,3-dihydrobenzofuran) were observed during alcohol fermentation and aging. The production of the esters during alcohol fermentation with S. cerevisiae was higher than those of Sch. pombe. The sensory scores of the aged wine samples in aroma, taste and overall acceptability were not significantly different(p<0.05).
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[게시일 2004년 10월 1일]
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