Background: It is well known that oxygen free radicals(OFR) play a vital role in the various type of acute lung injury. Among various antioxidant defense mechanisms, the superoxide dismutases(SOD) are thought to be the first line of antioxidant defense by catalyzing the dismutation of two superoxide radicals to yield hydrogen peroxide and oxygen. Eukaryotic cells contain two types of intracellular SOD : cytosolic, dimeric copper/zinc- containing enzyme(CuZnSOD) and mitochondrial, tetrameric manganese-containing enzyme(MnSOD). The purpose of this study is to evaluate the time-dependent gene expression of MnSOD and CuZnSOD in the endotoxin-treated rats, and to compare with the manifestations of LPS-induced acute lung injury in rats. Methods: Total RNA from rat lung was isolated using single step phenol extraction 0, 1, 2, 4, 6, 12, 18, 24 hours after E. coli endotoxin injection(n=3, respectively). RNA was separated by formaldehyde-containing 1.2% agarose gels elctrophoresis, transblotted, baked, prehybridized, and hybridized with $^{32}P$-labeled cDNA probes for rat MnSOD and CuZnSOD, which were kindly donated by Dr. Ho(Duke University, Durham, NC, USA). The probes were labeled by nick translation. Blots were washed and autoradiography were quantitated using laser densitometry. Equivalent amounts of total RNA/gel were assessed by monitoring 28S and 18S rRNA. Results: Endotoxin caused a rise in steady-state MnSOD mRNA levels by 4h with peak mRNA accumulation by 6h. Continued MnSOD mRNA expression was observed at 12h. CuZnSOD mRNA expression was observed from 1h to 24h with peak levels by 18h. Conclusion: These results suggest that SOD palys an important defensive role in the endotoxin-induced acute lung injury in rats.
Antioxidants and antioxidants with somatic cell co-culture, bovine oviduct epithelial cells(BOEC) and buffalo rat liver cells(BRLC), were studied as a mean of increasing the development and intracellular glutathione(GSH) concnetrations of bovine embryos derived from in vitro matured(IVM) and in vitro fertilized(IVF) oocytes. Cell numbers and intracellular GSH concentrations of blastocysts were also counted. The developmental rate beyond morula stages in CRlaa containing taurine(2.5mM), superoxide dismutase(SOD, 600U) and catalase(250U) were 1%, 75.0%, 64.8% and 62.3%, respectively. The developmental rate in antioxidant groups was significantly higher than in control(P<0.05). The intracellular GSH concentrations of blastocysts cultured in 0, 2.5mM taurine, 600U SOD and 250U catalase were 33.8pM, 39.3pM, 42.3pM and 54.8pM, respectively. This result indicated that the developmental rates and intracellular GSH concentrations of catalase group was significantly higher than any other groups(P<0.05). The developmental capacity in CRlaa plus various antioxidants co-cultured with BOEC were 55.3%(control), 74.1%(2.5mM taurine), 66.7%(600U SOD) and 70.7%(250U catalase) and in CRlaa plus various antioxidants co-cultured with BRLC in control, 2.5mM taurine, 600U SOD and 250U catalase were 63.8%, 75.5%, 71.0% and 73.5%, respectveily, the intracellular GSH concentrations of blastocyst embryos co-cultured with BOEC and BRLC in CRlaa with 0.25mM taurine, 600U SOD and 250U catalase were 73.4pM and 64.4pM, 79.9pM and 67.5pM, 82.3pM and 71.7pM, and 83.0pM and 80.0pM, respectively. Cell numbers of blastocysts were not difference in all experimental groups. These studies indicate that andtioxidants and antioxidant with somatic cell co-culture can increase the proportion of embryo that developed into morula and blastocysts, and the intracellular GSH concentrations of blastocyst embryos.
Journal of the Korean Society of Food Science and Nutrition
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v.30
no.6
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pp.1215-1219
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2001
The present study was conducted to investigate effect of powdered herb of Aster scaber Thunb. (chamchwi) on antioxidant system in ethanol-administrated rats. Four week-old Sprague Dawley male rats which had initial body weights of 97.10$\pm$4.50 g were randomly divided into three groups: control (ethanol treated, vitamin E-deficient group); 5% chamchwi (ethanol-treated, 5% chamchwi powder-supplemented group): 10% chamchwi (ethanol-treated, 10% chamchwi powder-suplemented group). Three groups of rats were suplemented with three experimental diets for 4 weeks and orally administrated 10% ethanol (v/v) daily via drinking water in the last experimental week. Contents of TBARS (thiobarbituric acid reactive substance). glutathione in liver and kidney and serum albumin were determined. The activities of superoxide dismutase (SOD), catalase and glutathione peroxidase (GSH-px) in liver and kidney were also analyzed. Relative weight of liver and spleen to body in chamchwi groups was lower than that in control group (p<0.05). The most remarkable result was that liver TBARS contents in chamchwi groups (5% chamchwi group, 46 $\mu\textrm{g}$ in MDA value; 10% chamchwi group, 35 $\mu\textrm{g}$) were significantly lower (p<0.05) than that in control group (66 $\mu\textrm{g}$). The supplement of chamchwi powder lowered the activity of manganese- superoxide dismutase (Mn-SOD), catalase in liver and GSH-px in kidney. The levels of glutathione in liver and kidney and serum albumin were not significantly different in all experimental groups (p<0.05). These results indicate that powdered herb of Aster scaber decreases lipid peroxidation and acitvity of Mn-SOD increased by alcohol-induced oxidative stress in liver of rats.
Kang, Kyu-Tae;Sullivan, Jennifer C.;Pollock, Jennifer S.
Toxicological Research
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v.34
no.4
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pp.363-370
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2018
Many studies reported reduced antioxidant capacity in the vasculature under hypertensive conditions. However, little is known about the effects of antihypertensive treatments on the regulation of vascular antioxidant enzymes. Thus, we hypothesized that antihypertensive treatments prevent the reduction of antioxidant enzyme activity and expression in the small vessels of angiotensin II-induced hypertensive rats (ANG). We observed the small mesenteric arteries and small renal vessels of normotensive rats (NORM), ANG, and ANG treated with a triple antihypertensive therapy of reserpine, hydrochlorothiazide, and hydralazine (ANG + TTx). Systolic blood pressure was increased in ANG, which was attenuated by 2 weeks of triple therapy (127, 191, and 143 mmHg for NORM, ANG, and ANG + TTx, respectively; p < 0.05). Total superoxide dismutase (SOD) activity in the small mesenteric arteries of ANG was lower than that of NORM. The protein expression of SOD1 was lower in ANG than in NORM, whereas SOD2 and SOD3 expression was not different between the groups. Reduced SOD activity and SOD1 expression in ANG was not restored in ANG + TTx. Both SOD activity and SOD isoform expression in the small renal vessels of ANG were not different from those of NORM. Interestingly, SOD activity in the small renal vessels was reduced by TTx. Between groups, there was no difference in catalase activity or expression in both the small mesenteric arteries and small renal vessels. In conclusion, SOD activity in the small mesenteric arteries decreased by angiotensin II administration, but not by hypertension, which is caused by decreased SOD1 expression.
The objective of this research was to increase phytoprotective effects by combined treatment of uniconazole and free radical scavengers such as ascorbic acid or sodium benzoate on $SO_2$ injury in P. occidentalis. The plant injury, chlorophyll content and enzyme activity of superoxide dismutase(SOD) and peroxidase(POD) affected by combined treatment were also investigated. The phytoprotective role of uniconazole was nullified by spray of Diethyldithiocarbamate(DDTC) resulting in the decrease of SOD and POD activities. Free radical scavengers, sodium benzoate and ascorbic acid, did not affect SOD and POD activity, but significantly inhibited the development of visible injury, degradation of chlorophyll, and SOD and POD activity in leaves exposed to $SO_2$. The spray of ascorbic acid decreased plant susceptibility to $SO_2$ induced by DDTC application. These results indicate that uniconazole application increase SOD activity that play a role of antioxidant in plant body, but sodium benzoate and ascorbic acid do not affect enzyme activities of SOD or POD.
Background: Oxidative stress caused by the generation of reactive oxygen species plays an important role in human carcinogenesis. Manganese superoxide dismutase (MnSOD) Val-9Ala in the mitochondrial target sequence is the best known polymorphism of this enzyme. The purpose of the current research was to assess the association of MnSOD Val-9Ala genotypes with the risk of gastric cancer. Materials and Methods: This case-control study covered 54 gastric cancer patients compared to 100 cancer free subjects as controls. Extraction of DNA was performed on bioptic samples and genotypes were identified with a polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP) method. Results: The frequencies of MnSOD Ala/Ala, Ala/Val and Val/Val genotypes in healthy individuals were 24.3, 66.7 and 9%, respectively. However, in gastric cancer patients, Ala/Ala, Ala/Val and Val/Val were observed in 24.0, 48.0 and 28.0% (p=0.01). In patients the frequency of MnSOD Val allele was higher (52%) compared to that in controls (42%). Conclusions: The results of this study show a positive association between MnSOD Val-9Ala gene polymorphism and risk of gastric cancer disease in Iranian population.
The study was conducted to determine the optimal glucose, superoxide dimutase(SOD) and catalase levels during the in vitro culture of porcine oocytes matured and fertilized in vitro for morulae and blastocyst development. Oocytes were cultured for 0~8 days in TCM-199 medium supplemented with 20% FCS, different glucose, SOD and catalase levels. The results are summairzed as follows ; 1. The in vitro developmental rates of porcine oocytes cultured in TCM-199 medium containing 0.1, 0.3, 0.5, 1.0, 3.0 mM glucose levels 0~3 and 0~8 days after insemination were 22.8, 24.2, 21.9, 20.0, 12.1 and 21.9, 26.7, 25.0, 22.6, 16.7%, respectively. 2. The in vitro developmental rates of porcine oocytes cultured in TCM-199 medium containing 100, 200, 300, 500 $\mu\textrm{g}$/ml SOD levels 0~3 and 0~8 days after insemination were 16.7~23.3 and 16.7~25.0%, respectively. High levels of SOD(500 $\mu\textrm{g}$/ml) significantly reduced the rates of molurae and blastocysts stage(P<0.05). 3. The in vitro developmental rates porcine oocytes cultured in TCM-199 medium containing 100, 200, 300, 500 $\mu\textrm{g}$/ml catalase levels 0~3 and 0~8 days after insemination were 18.8~26.7 and 19.4~28.1%, respectively, and there was significant differences on the development to the molurae and blastocysts stage among the cumulus cells and glucose levels.
The nonenzymatic glycation of copper, zinc-superoxide dismutase (Cu,Zn-SOD) led to inactivation and fragmentation of the enzyme. The glycated Cu,zn-SOD was isolated by boronate affinity chromatography. The formation of 8-hydroxy-2'-deoxyguanosine (8-OH-dG) in calf thymus DNA and the generation of strand breaks in pBhiescript plasmid DNA by a metal-catalyzed oxidation (MCO) system composed of $Fe^{3+}$, $O_2$, and glutathione (GSH) as an electron donor was enhanced more effectively by the glycated CU,Zn-SOD than by the nonglycated enzyme. The capacity of glycated Cu,Zn-SOD to enhance damage to DNA was inhibited by diethylenetriaminepentaacetic acid (DETAPAC), azide, mannitol, and catalase. These results indicated that incubation of glycated CU,Zn-SOD with GSH-MCO may result in a release of $Cu^{2+}$ from the enzyme. The released $Cu^{2+}$ then likely participated in a Fenton-type reaction to produce hydroxyl radicals, which may cause the enhancement of DNA damage.
We tried to analyze the growth time for secretion of the iron containing superoxide dismutase by comparing the intra-and extracellular enzyme activity from Streptomyces subrutilus P5 and analyze possible genetic information for this enzyme secretion. The mycelial dry weights and glucose concentrations in culture filtrates were determined during growth. Glucose was consumed rapidly during logarithmic growth phase and almost exhausted at 24 h of cultivation. While the intracellular activity of iron containing superoxide dismutase was first appeared at three hours, the extracellular activity of this enzyme appeared from 7.5 h of cultivation, early logarithmic growth phase. This early presence of the superoxide dismutase might not be the result of cell lysis but active secretion pathway. There was no information for signal peptide responsible for the enzyme secretion in sodF. However, we found a type three secretion box in the promoter region of sodF that has been known for the genes of type III secreted proteins in other bacteria. This is the first report on the possible existence of type III secretion in Streptomyces.
A balance between production and degradation of reactive oxygen species (ROS) is critical for maintaining cellular homeostasis. Increased levels of ROS during oxidative stress are associated with disease conditions. Antioxidant enzymes, such as extracellular superoxide dismutase (EC-SOD), in the extracellular matrix (ECM) neutralize the toxicity of superoxide. Recent studies have emphasized the importance of EC-SOD in protecting the brain, lungs, and other tissues from oxidative stress. Therefore, EC-SOD would be an excellent therapeutic drug for treatment of diseases caused by oxidative stress. We cloned both the full length (residues 1-240) and truncated (residues 19-240) forms of human EC-SOD (hEC-SOD) into the donor plasmid pFastBacHTb. After transposition, the bacmid was transfected into the Sf9-baculovirus expression system and the expressed hEC-SOD purified using FLAG-tag. Western blot analysis revealed that hEC-SOD is present both as a monomer (33 kDa) and a dimer (66 kDa), as detected by the FLAG antibody. A water-soluble tetrazolium (WST-1) assay showed that both full length and truncated hEC-SOD proteins were enzymatically active. We showed that a potent superoxide dismutase inhibitor, diethyldithiocarbamate (DDC), inhibits hEC-SOD activity.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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