• 제목/요약/키워드: ${U^{K'}}_{37}$

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Expression and Purification of GFPuv/Cytochrome c-552 Fusion Protein in E. coli

  • 홍을재;이상온;최정우;홍억기
    • 한국생물공학회:학술대회논문집
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    • 한국생물공학회 2003년도 생물공학의 동향(XII)
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    • pp.550-553
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    • 2003
  • $Hisx_6-GFPuv-Cyt$ c fusion protein을 E. coli 균주 JM109과 BL21 각각에서 발현시킨 결과 발현온도는 $30^{\circ}C$보다 $37^{\circ}C$에서, BL21보다 JM109에서의 발현량이 더 많았다. 그러나 JM109, $37^{\circ}C$에서 발현시킨 fusion protein의 $Ni^{2+}-IDA-agarose$ purification결과 약 45kDa 부근의 fusion protein의 density가 감소되었음을 SDS-PAGE analysis을 통해 알 수 있었다. 또한 western blotting analysis를 통해 이 impurity가 degraded fusion임을 확인 할 수 있었다. degraded fusion은 BL21 균주에서 발현시킨 fusion protein에서도 생성됨을 확인하였다. 모든 결과를 종합해 볼때 $Hisx_6-GFPuv-Cyt$ c fusion protein의 발현은 IM109, $37^{\circ}C$에서 더 많았지만, BL21, $37^{\circ}C$에서 expression시킨 fusion protein이 보다 안정하다고 판단 되어진다. 향후 fusion protein이 bioelectronic device에 적용되려면 degraded fusion protein의 생성을 줄여 activity를 유지하도록 안정한 형태로 발현되어 순수하게 분리정제 되어야 하겠다.

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재조합 대장균에서 호알칼리성,고온성 Bacillus sp. TA-11의 세포내 Invertase의 생산 (Production of Intracellular Invertase from Alkalophilic and Thermophilic Bacillus sp. TA-11 in the Recombinant E. coli)

  • 이성훈;이대형;노재덕;이재원;이종수
    • 한국미생물·생명공학회지
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    • 제34권4호
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    • pp.318-322
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    • 2006
  • 알칼리와 고온에 대한 내성을 가진 invertase를 대량생산하기 위하여 호알칼리성이며 고온성 세균인 Bacillus sp. TA-11의 세포내 invertase유전자를 pUC 19벡터를 이용하여 E. coli HB101에 클로닝 시키고 발현시켜 invertase를 강력하게 생산하는 재조합 E. coli (pYC17)를 얻었다. 재조합 E. coli(pYC17)를 이용한 invertase 생산 최적조건을 검토한 결과 E. coil(pYC17)를 0.25% sucrose, 0.5% yeast extract, 0.1% $K_2HPO_4$와 0.1% $KH_2PO_4$을 함유한 SY배지(초기 pH 9.0)에 접종하여 37$^{\circ}C$에서 9시간 배양하였을 때 친주보다도 많은 47.7 U/ml-cell free extract의 invertase가 생산되었다.

정상인(正常人) 및 당뇨병환자(糖尿病患者)에서의 경구당부하시(經口糖負荷時) 혈중(血中) Insulin과 C-Peptide의 변동(變動) (A Study of the Insulin and the C-Peptide Responses to Oral Glucose Load in Nondiabetic and Diabetic Subjects)

  • 이명철;최성재;김응진;민헌기;고창순
    • 대한핵의학회지
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    • 제11권1호
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    • pp.17-32
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    • 1977
  • The present study was undertaken to evaluate the significance of the insulin and the C-peptide rseponse to oral glucose loads in normal and diabetic subjects and to establish the effects of the obesity. In this study, the authors have measured plasma insulin and C-peptide by means of radioimmunoassay in 10 nonobese normal, 5 obese normal, 13 nonobese moderate diabetic patients, 9 obese moderate diabetic patients and 9 severe diabetic patients. The results obtained were as follows; 1. In 10 nonobese normal subjects, the plasma insulin level at fasting state and at 30, 60, 90, and 120 min after oral glucose loads were $15.7{\pm}3.4,\;48.3{\pm}9.8,\;40.4{\pm}6.7,\;37.4{\pm}6.5\;and\;26.0{\pm}4.2uU/ml(Mean{\pm}S.E.)$ and C-peptide were $1.9{\pm}0.3,\;3.9{\pm}0.6,\;6.3{\pm}0.6,\;5.7{\pm}0.5\;and\;4.0{\pm}0.5ng/ml$. The change of C-peptide was found to go almost parallel with that of insulin and the insulin value reaches to the highest level at 30 min whereas C-peptide reaches to its peak at 60min. 2. The plasma insulin level in 5 obese normal subjects were $38.9{\pm}12.3,\;59.5{\pm}12.3,\;59.2{\pm}17.1,\;56.1{\pm}20.0\;and\;48.4{\pm}17.2uU/ml$ and the C-peptide were $5.5{\pm}0.4,\;6.8{\pm}0.5,\;7.9{\pm}0.8,\;7.9{\pm}0.8\;and\;7.8{\pm}2.0ng/ml$. The insulin response appeared to be greater than nonobese normal subjects. 3. In 13 nonobese moderate diabetic patients, the plasma insulin levels were $27.1{\pm}4.9,\;44.1{\pm}6.0,\;37.3{\pm}6.6,\;35.5{\pm}8.1\;and\;34.7{\pm}10.7uU/ml$ and the C-peptide levels were $2.7{\pm}0.4,\;4.9{\pm}0.7,\;6.5{\pm}0.5,\;7.0{\pm}0.3\;and\;6.7{\pm}1.0ng/ml$. There was little significance compared to nonobese normal groups but delayed pattern is noted. 4. In 9 obese moderated diabetic patients, the plasma insulin levels were $22.1{\pm}7.9,\;80.0{\pm}19.3,\;108.0{\pm}27.0,\;62.0{\pm}17.6\;and\;55.5{\pm}10.1uU/ml$ and the C-peptide levels were $5.2{\pm}0.4,\;8.0{\pm}1.0,\;10.4{\pm}1.6,\;10.4{\pm}1.7\;and\;10.1{\pm}1.0ng/ml$ and its response was also greater than that of nonobese moderate diabetic patients. 5. The plasma insulin concentrations in 9 severe diabetic subjects were $8.0{\pm}3.8,\;12.1{\pm}3.5,\;16.8{\pm}4.6,\;19.6{\pm}5.2\;and\;15.0{\pm}5.0uU/ml$ and the C-peptide levels were $1.6{\pm}0.3,\;2.4{\pm}0.4,\;4.1{\pm}0.6,\;4.0{\pm}0.8\;and\;4.5{\pm}0.7ng/ml$ and the insulin and C-peptide responses were markedly reduced in severe diabetic groups. 6. There were-significant differences between each groups of patients on the magnitude of total insulin or C-peptide areas, the insulinogenic index and the C-peptide index.

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유향흑호단(乳香黑虎丹)이 난소적출로 유발된 흰쥐의 골다공증 모델에 미치는 영향 (Effects of Yoohyangheukho-dan ($R{\check{u}}xi{\bar{a}}ngh{\bar{e}}ih{\check{u}}-d{\bar{a}}n$) on Osteoporosis Induced by Ovariectomy in Rats)

  • 금창준;조창영;임정민;송대욱;김재현;이비나;정혁상
    • 한방재활의학과학회지
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    • 제24권3호
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    • pp.29-37
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    • 2014
  • Objectives Osteoporosis is an impending problem in the rapidly aging society. The purpose of this study is to identify the effects of Yoohyangheukho-dan ($R{\check{u}}xi{\bar{a}}ngh{\bar{e}}ih{\check{u}}-d{\bar{a}}n$) on osteoporosis induced by ovariectomy in rats. Methods 24 rats were randomly assigned to a SHAM group, a control group, and a Yoohyangheukho-dan ($R{\check{u}}xi{\bar{a}}ngh{\bar{e}}ih{\check{u}}-d{\bar{a}}n$) group (n=8). Ovaries were extracted and for 8 weeks, the rats were given dry feeds and Yoohyangheukho-dan ($R{\check{u}}xi{\bar{a}}ngh{\bar{e}}ih{\check{u}}-d{\bar{a}}n$) group were given a mixture of dry feeds and Yoohyangheukho-dan ($R{\check{u}}xi{\bar{a}}ngh{\bar{e}}ih{\check{u}}-d{\bar{a}}n$). At 8 weeks, their body weight, femur mass, tibia ash per body ratio, overall surface area and thickness of the trabeculae, overall surface area of the osteoblasts, and the number of osteoclasts were measured and levels of albumin, aspartate transaminase (AST), alanine transaminase (ALT), alkaline phosphatase (ALP), total-cholesterol, calcium and estradiol were recorded. Results There was no significant difference in the weight of the femur and the tibia ash per body ratio. The Yoohyangheukho-dan ($R{\check{u}}xi{\bar{a}}ngh{\bar{e}}ih{\check{u}}-d{\bar{a}}n$) group had significantly thicker trabeculae than the control group and showed a minimal increase of overall surface area of the trabeculae. The overall surface area of the osteoblasts and the number of osteoclasts decreased in the Yoohyangheukho-dan ($R{\check{u}}xi{\bar{a}}ngh{\bar{e}}ih{\check{u}}-d{\bar{a}}n$) group. There were no statistically significant differences in AST, ALT, ALP, total cholesterol, phosphorus, and estradiol levels. On the contrary the Yoohyangheukho-dan ($R{\check{u}}xi{\bar{a}}ngh{\bar{e}}ih{\check{u}}-d{\bar{a}}n$) group had significantly higher levels of Albumin, triglyceride, and calcium. Conclusions It can be concluded that oral intake of Yoohyangheukho-dan ($R{\check{u}}xi{\bar{a}}ngh{\bar{e}}ih{\check{u}}-d{\bar{a}}n$) prevents the thinning process of the trabeculae. Thus, it may have positive effects on the treatment and prevention of osteoporosis in postmenopausal women.

식물 유래 조효소에 의한 감소 Liquiritin의 Liquiritigenin으로의 변환 (Biotransformation of Liquiritin in Glycyrrhiza uralensis Fisch Extract into Liquiritigenin by Plant Crude Enzymes)

  • 박민주;나인수;민진우;김세영;양덕춘
    • 한국약용작물학회지
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    • 제16권2호
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    • pp.74-78
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    • 2008
  • 감초의 에틸아세테이트 분획 중 flavonoid 지표물질인 liquiritin이 들어있는 분획 (GUE6)에 살구 및 복숭아 종자로부터 얻은 조효소액 (PDE, PAE, PPE)을 법제 처리하였다. 각 조효소액에서 ${\beta}-glucosidase$ 활성도는 아몬드 (P. dulcis) 259.6 U/g 살구 (P. persica), 복숭아 (P. persica) 조효소액의 ${\beta}-glucosidase$ 활성도가 가장 높게 관찰되었다. PDE, PAE, PPE를 이용한 발효 법제 후 liquiritigenin의 함량 비교 결과, 효소중의 ${\beta}-glucosidase$에 의해 liquiritin이 대사되어 항산화, 향군, 세포 독성 억제, 항치매, 항피부암 등 많은 약리효능을 가진 활성 물질인 liquiritigenin이 생산됨이 확인되었으며, 세효수 모두 liquiritin에 1.2배의 효소 처리 시 가장 대사가 활발한 것으로 나타나 변환을 위한 최적 농도로 결정되었다 세효소 중 특히 PPE 처리 시 liquiritin이 모두 liquiritigenin으로 변환됨으로써 liquiritin의 변환에 복숭아 종자 유래 효소가 가장 효율적인 것으로 밝혀졌다.

U-251-MG 세포에서 PSA 경로에 작용하는 Hepatocyte Growth Factor의 효과 (Effects of Hepatocyte Growth Factor on the PSA Signaling Pathway of U-251-MG Cells)

  • 김환규
    • KSBB Journal
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    • 제24권5호
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    • pp.425-431
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    • 2009
  • 본 연구에서는 U-251-MG 세포를 이용하여 증식, 이동, 침윤 및 단백질분해효소의 분비에 미치는 PSA와 HGF의 효과를 확인하였다. 그 결과, PSA siRNA에 의해 U-251-MG 세포의 증식은 약 37% 억제되었으나, HGF 처리 (10 ng/mL)에 의해 증식이 약 1.4배 증가되었다. PSA siRNA에 의한 U-251-MG 세포의 이동은 약 60%가 억제되었으나, HGF 처리에 의해 이동이 약 1.3배 증가되었다. 또한, PSA siRNA에 의해 U-251-MG 세포의 침윤이 약 67% 억제되었으나 HGF 처리에 의해 세포의 침윤이 약 4.3배 증가되었다. PSA siRNA처리에 의해 MMP-2의 분비는 약 25%, MMP-9의 분비는 약 20% 억제되었으며, HGF에 의해 PSA siRNA에 의해 억제된 MMP-2 및 MMP-9의 분비가 약 2.8배 및 3.5배 증가되었다. HGF 처리에 의해 플라스민의 분비량은 약 14배 증가되었고, PSA를 억제한 U-251-MG 세포에 HGF를 처리한 결과, 플라스민의 분비가 약 1.6배 증가하였다. 또한, PSA siRNA에 의해 MMP-2의 발현은 유의할만한 변화가 없었으나, MMP-9의 발현은 약 85% 억제되었다. PSA를 억제시킨 U-251-MG 세포에 HGF를 처리한 결과, MMP-2의 발현은 약 5.7배, MMP-9의 발현은 약 6.3배 증가되었다. 한편, MMPs의 광범위 억제제인 BB-94 처리에 의해 U-251-MG 세포의 증식, 이동 및 침윤이 유의할만하게 억제 된 것은 MMP-2 및 MMP-9이 U-251-MG 세포의 증식, 이동 및 침윤에 관여할 것임을 시사해준다.

우리나라 특수건강진단 대상물질에 대한 6개 기관의 직업적 노출 기준 비교 (Comparison of Occupational Exposure Limits in Six Agencies for Hazardous Substances Related Workers' Periodic Health Examination in South Korea)

  • 이상윤;서춘희;김세영;예병진;설진곤;손준석;윤종완;홍석우;류지영;김대환
    • 한국산업보건학회지
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    • 제23권2호
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    • pp.148-155
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    • 2013
  • Objectives: This study was performed in order to compare the average levels and similarity of occupational exposure limits in South Korea, the U.S., the E.U., Germany, Japan and Finland. Methods: In this study, occupational exposure limits (OELs) for one hundred and seventy seven hazardous substances which are managed in the workplace by the Occupational Safety and Health Act in South Korea were matched with those of other countries. The units for the exposure limits of the same substance (identical CAS number) were unified and the exposure limits in each country were compared with threshold limit values (TLVs) of the American Conference of Governmental Industrial Hygienists (ACGIH) using a geometric mean method. Geometric similarity was calculated to assess the association by each country. Results: The exposure limits according to ACGIH TLVs in South Korea, the E.U., Germany, Japan, and Finland were 148, 37, 76, 90, and 110, respectively. When using TLVs of ACGIH as a standard, the geometric mean ratios of Germany, Finland, the E.U., South Korea, and Japan were 0.79, 0.80, 0.82, 1.19, and 1.27, respectively. Geometric similarity with TLVs of ACGIH was highest in South Korea (0.75) followed by Japan (0.56), the E.U. (0.52), Finland (0.50), and Germany (0.46). Conclusions: Through the comparison of levels of OELs and similarities among South Korea, the U.S., the E.U., Germany, Japan, and Finland, we could better understand the characteristics of occupational exposure limits by country.

마이크로파 용해장치를 활용한 토양 중 우라늄의 알파분광분석법 (Efficient Sample Digestion Method for Uranium Determination in Soil using Microwave Digestion for Alpha Spectrometry)

  • 김창종;조윤해;김대지;채정석;윤주용
    • Journal of Radiation Protection and Research
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    • 제37권4호
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    • pp.213-218
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    • 2012
  • 토양 중 우라늄 동위원소의 분석을 위해서 알파분광분석법이 보편적으로 사용되고 있다. 다수의 토양시료를 분석할 경우 시료분해 시간을 단축함으로써 전체 분석시간을 효과적으로 줄일 수 있으며, 이를 위해 본 연구에서는 단시간에 시료를 완전 분해할 수 있는 마이크로파 용해장치를 활용하였다. IAEA-375를 분석 대상 토양으로 하여 용해되지 않은 시료의 양과 분석한 $^{234}U$$^{238}U$의 방사능 농도 값을 통해 시료분해 방법을 최적화 하였으며, 0.5 g의 토양시료에 최소 3 ml의 불산을 가했을 때 80분 내에 효과적으로 분해되는 것을 확인하였다. 이는 2~3일의 분해시간이 필요한 통상적인 방법(open vessel 및 closed vessel을 이용하는 방법)에 비해 시간을 단축 할 수 있어 효율적이며, 불산 사용을 최소화 하여 시료용해 시 발생할 수 있는 유해 물질의 발생 및 접촉을 줄일 수 있다는 장점이 있다.

Penicillin G Amidase생산을 위한 재조합 대장균의 유가배양에 관한 연구 (Fed-batch Culture of Recombinant E.coli for the Production of Penicillin G Amidase)

  • 이상만
    • 한국미생물·생명공학회지
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    • 제36권4호
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    • pp.314-319
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    • 2008
  • Penicillin G amidase(PGA, benzylpenicillinamidohydrolase, EC 3.5.1.11)는 penicillin G를 phenylacetic acid(PAA)와 6-aminopenicillanic acid(6-APA)로 분해하는 효소이다. Escherichia coli(E. coli) ATCC 11105의 PGA는 24 kDa의 small subunit과 65 kDa의 large subunit으로 구성되어 있고, precursor polypeptide에서 signal peptide와 spacer peptide가 절단되어 활성을 가진 heterodimer가 형성된다. 본 연구에서는 E. coli ATCC 11105에서 PCR(polymerase chain reaction)을 통해 증폭한 pga gene을 expression vector에 넣어 pET-pga plasmid를 제작하였고, 이것을 E. coli BL21 (DE3) 균주에 형질 전환하여 PGA를 발현하고 그 활성을 분석하였다. E. coli BL21(DE3)/pET-pga 균주의 고밀도 배양액을 SDS-PAGE로 분석 했을 때, PGA의 precursor, large subunit, 그리고 small subunit으로 보이는 protein band가 나타났으며, PGA가 soluble form의 precursor로 발현되어 processing을 거쳐서 large subunit과 small subunit으로 절단되기도 하고, 일부는 insoluble form의 precursor로 발현되기도 하는 것으로 생각된다. 유가배양시 온도변화 전략을 사용하여 고농도 배양에서 발현을 유도하였다. 온도변화 전략은 $37^{\circ}C$에서 $28^{\circ}C$를 거쳐 $22^{\circ}C$로 3단계로 변화시켰다. 이러한 전략으로 PGA활성은 19.6 U/mL이며 균체량은 600 nm에서 흡광도가 62까지 도달하였다.

치과용 콤포짓트 레진의 수분 흡수에 따른 압축강도와 굴곡강도의 변화에 관한 연구 (A STUDY ON CHANGE OF COMPRESSIVE STRENGTH AND FLEXURAL STRENGTH OF DENTAL COMPOSITE RESIN AFTER WATER STORAGE)

  • 정내정;김정욱;이상훈
    • 대한소아치과학회지
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    • 제28권1호
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    • pp.146-153
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    • 2001
  • 콤포짓트 레진의 다양한 성분은 기계적 성질에 많은 영향을 미치고, 수복물 주위의 환경 또한 재료의 성질에 많은 영향을 줄 수 있다. 구강 내에서 수복된 콤포짓트 레진은 항상 수분에 노출되어 있고, 콤포짓트 레진의 매트릭스는 수분을 흡수할 수 있으므로, 그 결과 콤포짓트 레진은 팽창하게 된다. 또한 콤포짓트 레진의 수분 흡수가 표면강도와 마모저항의 저하와 관계된 다고 알려져 있는바 저자는 치과용 콤포짓트 레진의 수분 흡수에 따른 압축강도와 굴곡강도의 변화에 관하여 알아보고자 하였다. 재료는 1군을 Z-100(3M, U.S.A.), 2군을 Spectrum(Dentsply, U.S.A.), 3군을 Clearfil AP-X(Kuraray, Japan), 4군을 Pyramid(Bisco, U.S.A), 5군을 Heliomolar(Vivadent, Germany)로 나누어 7일, 30일, 60일, 120일간 증류수에 넣어 $37^{\circ}C$에서 보관한 후 Instron 6022(Instron, U.K.)를 이용하여 압축강도와 굴곡강도를 측정하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. 7일, 30일, 60일, 120일로 기간이 증가함에 따라 모든 군에서 압축강도가 감소하였다(p<0.05). 2. 7일, 30일, 60일, 120일로 기간이 증가함에 따라 모든 군에서 굴곡강도가 감소하였다(p<0.05). 3. Hybrid type인 1, 2, 3군에 비해 matrix 비율이 높은 microfine type인 5군이 강도가 낮았다.

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