For biotechnological production of high-valued ${\beta}-{\text\tiny{D}}$-hexyl glucoside, the catalytic properties of Hanseniaspora thailandica BC9 ${\beta}$-glucosidase purified from the periplasmic fraction were studied, and the transglycosylation activity for the production of ${\beta}-{\text\tiny{D}}$-hexyl glucoside was optimized. The constitutive BC9 ${\beta}$-glucosidase exhibited maximum specific activity at pH 6.0 and $40^{\circ}C$, and the activity of BC9 ${\beta}$-glucosidase was not significantly inhibited by various metal ions. BC9 ${\beta}$-glucosidase did not show a significant activity of cellobiose hydrolysis, but the activity was rather enhanced in the presence of sucrose and medium-chain alcohols. BC9 ${\beta}$-glucosidase exhibited enhanced production of ${\beta}-{\text\tiny{D}}$-hexyl glucoside in the presence of DMSO, and 62% of ${\beta}-{\text\tiny{D}}$-hexyl glucoside conversion was recorded in 4 h in the presence of 5% 1-hexanol and 15% DMSO.
To improve stability of recombinant DNA pLC1 encoding endoglucanase gene and pGL1 encoding $\beta $-glucosidase gene, DNA fragments of genes coding endoglucanase and $\beta $-glucosidase were cloned within the recA gene on a pDR1453, and the pDRE10 and pDRG20 of recombinant plasmids were integrated into the recA gene on the E. coli 1100 chromosomal DNAs. The stability of inheritance was completely maintained in E. coli 1100; Transformants E. coli 1100/pDREIO and pDRG20 were expressed well by recA promoter and increased endoglucanase and $\beta $-glucosidase activities. This method can be used as a model to improve the stability of recombinant plasmid in large scale culture.
Aspergillus nid$\mu$tans 의 분생포지에는 두 종류의 $\beta$.glucosidase, 즉 tightly-bound enzyme(TBE)과 loosely-bound enzyme(LBE)이 존재한다. 포자수와 효소활성도가 정비례함을 보아 이 효소의 존재을 확인할 수 있었으며, 배양조건 하에서 의 오랜기잔 방치에도 얼정 수준의 활성을 유치하는 높은 안정성을 보였다. 분생포자에 여러가지 물리.화학적 처리를 한 뒤에도 TBE의 환성도에는 큰 변화가 없었으며, TBE의 최적 pH 및 온도는 각각 6.0, $55^{\circ}C$였다.TBE의 열안정성은 균사체의 $\beta$-glucosidase보다 높았으며, $H^{2+}$이온에 대한 내성도 비교적 높은 수준을 보였다. LBE와 균사체 $\beta$-glucosidase의 전기영동 양상이 유사한 것으후 보아 율사체와 동일한 효소가 포자의 표면에 존재후L을 알 수있었다.
Aspergillus niger유래의 $\beta$-glucosidase를 (1)glutarald-ehyde를 가교제로 한 chitin과 chitosan담체에 covalent linkage (2)Amberite IRA93과 DEAE-cellulose담체에 succinylation시킨 후 흡착, 그리고 (3)alginarte, polyacry-lamide를 각종 가교제를 이용 entrapment등의 방법으로 고정화 하였다. Glutaraldehyde를 가교제로써 chitosan을 활성화시킨후 $\beta$-glucosidase를 고정화 시켰을때 효소활성 회수율이 31.5%로 가장 높았고, 또한 column형 반응기에서의 15일 경과 후 효소활성 유지도도 69%로서 가장 우수하였다. 또한 succinylation시킨 효소를 Amberite IRA93 담체에 흡착시켰을 때 효소활성 회수율은 24.7%였고 효소 활성유지도는 62%였다. 반면에 entra-pment 방법에 의한 $\beta$-glucosidase의 고정화는 효소의 계속적인 용출로 $\beta$-glucosidase의 고정화에는 적합하지 않았다. Chitosan담체에서의 고정화 최적조건을 조사한 결과 가교제인 glutaraldehyde의 최적농도는 0.4%였고, glutaraldehyde의 최적 반응 pH는 4.8이었다. 또한 column형 반응기를 이용하여 cellobiose로부터 glucose로의 전환율을 조사하여 고정화 효소의 효용성을 검토하였다.
Trichoderma koningii ATCC 26113에서 분비되는 효소인 $\beta$-glucosidase를 cellobiose, sophorose, laminaribiose 및 gentiobiose 등의 기질과 반응시킨 후 효소의 transglycosylation 반응 산물을 분석하였다. 각각의 기질로부터 생성된 이당체(dimer)들을 HPLC로 분리하고 $^(1)H$-NMR spectroscopy를 통하여 분석하였다. Cellobiose를 기질로 사용하여 효소와 반응시켰을 때 그 산물에는 laminaribiose, sophorose 및 gentiobiose가 포함되었음을 확인할 수 있었다. Laminaribiose, sophorose 및 gentiobiose를 기질로 사용하였을 경우에 효소는 transglycosylation 반응을 통하여 새로운 $\beta$-glycosidic 결합을 갖는 이당체들을 생성하였다. 효소반응에 의하여 누적되는 이당체의 양은 생성속도보다는 분해속도에 의하여 결정되는 것으로 나타났다.
소금생산을 위해 25% 이상의 함수를 저장해 놓는 염전의 해주로부터 호염성 세균 4균주를 분리하고 높은 염분농도에서도 ${\beta}$-glucosidase를 생성하는 HJS1과 HJS6 균주를 선발하였다. 이들 ${\beta}$-glucosidase 생성세균은 NaCl 1-10%에서 70-79U/mg의 최적 활성을 나타내었고, NaCl 3%에서 최대 활성을 나타내었으며 NaCl 0-20% 농도에서 최대 효소 활성대비 75%이상의 효소활성을 유지하는 내염성 ${\beta}$-glucosidase를 생성하는 것으로 확인되었다. 내염성 ${\beta}$-glucosidase 생성 HJS1과 HJS6 균주의 16S rRNA 유전자 염기서열을 검토한 결과, Roseivivax roseus $BH87090^T$ (FJ897782)와 99.8%의 상동성을 나타내었고 상기 균주들의 염기서열은 NCBI GenBank에 각각 AB971835와 AB971836로 등록하였다. 계통학적으로 근연종인 Roseivivax roseus $BH87090^T$와의 DNA-DNA 상동성을 비교 검토한 결과, 90.1-90.3%를 나타내었다. 이들 균주의 주요 균체지방산은 $C_{16:0}$, $C_{18:1}$${\omega}7c$, $C_{19:0}$ cyclo ${\omega}8c$ 그리고 11-methyl $C_{18:1}$${\omega}7c$를 함유하고 Quinone종은 Q-10로 근연종 Roseivivax roseus $BH87090^T$ 균주와 동일한 특징을 나타내어 Roseivivax roseus로 동정되었다. 반면, 비교 균주 Roseivivax roseus $BH87090^T$는 ${\beta}$-glucosidase 생성하지 않는 것으로 나타났다. 본 연구에서 분리된 Roseivivax roseus HJS1과 HJS6 균주는 내염성 ${\beta}$-glucosidase 효소 개발을 위한 유전자원으로 활용 가능하리라 사료된다.
생물전환은 친환경적이며 생물이용성을 증가시킬 수 있는 효과적인 방법이다. 백하수오 추출물을 이용해 보리 흰가루병에 대한 항균활성을 증진시키기 위하여 본 연구자들은 ${\beta}$-glucosidase를 이용하여 wilfoside C1G의 생물전환을 수행하였다. Wilfoside C1G와 cynauricuoside A(K1G)가 포함된 G 시료로부터 glucopyranosyl moiety를 분해하기 위하여 ${\beta}$-glucosidase를 처리하였다. 효소반응을 통해 wilfoside C1G와 K1G는 각각 wilfoside C1N과 wilfoside K1N으로 완전히 전환되었다. G 시료를 이용한 생물전환의 최적 조건은 에탄올 10%, 1,555 ${\mu}U$${\beta}$-glucosidase/ml, pH 5 및 $45^{\circ}C$로 결정되었다. 최적조건을 통해 생물전환을 실시한 후 흰가루병에 대한 방제효과를 조사한 결과, ${\beta}$-glucosidase에 의해 생물전환된 G 시료는 ${\beta}$-glucosidase가 처리되지 않은 G 시료보다 보리 흰가루병에 대해 우수한 방제효과를 나타냈다. 따라서 ${\beta}$-glucosidase를 이용한 생물전환은 흰가루병 방제 효과가 있는 백하수오 추출물의 항균활성을 증가시키는데 유용한 기술로 적용이 가능할 것으로 추정된다.
Recombinant $\beta$-glucosidase from Thermus caldophilus GK24 was easily purified partially by a heat treatment procedure, resulting in 8-fold and recovery yield of 80% from crude enzyme. When the $\beta$-glucosidase was incubated with a 80% glucose solution (w/w), gentiobiose ($\beta$1,6-glucobiose) was the major product in the reaction mixture. The optimal conditions for producing gentiobiose (11% yields of total sugar) were pH 8-9 and 7$0^{\circ}C$ for 72 h.
Park, Ah Reum;Park, Jeong-Hoon;Ahn, Hye-Jin;Jang, Ji Yeon;Yu, Byung Jo;Um, Byung-Hwan;Yoon, Jeong-Jun
Mycobiology
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제43권1호
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pp.57-62
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2015
${\beta}$-Glucosidase, which hydrolyzes cellobiose into two glucoses, plays an important role in the process of saccharification of the lignocellulosic biomass. In this study, we optimized the activity of ${\beta}$-glucosidase of brown-rot fungus Fomitopsis pinicola KCTC 6208 using the response surface methodology (RSM) with various concentrations of glucose, yeast extract and ascorbic acid, which are the most significant nutrients for activity of ${\beta}$-glucosidase. The highest activity of ${\beta}$-glucosidase was achieved 3.02% of glucose, 4.35% of yeast extract, and 7.41% ascorbic acid where ascorbic acid was most effective. The maximum activity of ${\beta}$-glucosidase predicted by the RSM was 15.34 U/mg, which was similar to the experimental value 14.90 U/mg at the 16th day of incubation. This optimized activity of ${\beta}$-glucosidase was 23.6 times higher than the preliminary activity value, 0.63 U/mg, and was also much higher than previous values reported in other fungi strains. Therefore, a simplified medium supplemented with a cheap vitamin source, such as ascorbic acid, could be a cost effective mean of increasing ${\beta}$-glucosidase activity.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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