Pleurotus속 균주들의 미토콘드리아 플라스미드 특성

Characterization of Mitochondrial Plasmids from Pleurotus spp.

백색 부후균인 plaurotus ostreatus 의 4가지의 균주로부터 각각 10.2 kb 와 7.2 kb (NFFA 2), 두 종류의 10.2 kb (NFFA 4001) 11.2 kb (NFFA 4501), 10.2kb 와 11.2 kb(KFCC 11635) 크기의 미토콘드리아 플라스미드들을 분리해 내었다. NFFA 2 의 변종인 NFFA 2m1 과 NFFA 2m2 에서는 이들 플라스미드가 관찰되지 않았다. 분별 원심분리에 의해 얻은 미토콘드리아에서 핵산을 추출하여 agarose gel 에서 전기영동시키면 플라스미드가 관찰되지 않았으나 proteinase K 를 처리하고 핵산을 추출하여 전기영동한 결과 이들 플라스미드가 관찰되었는에, 이는 플라스미드상에 단백질인 결합되어 있음을 시사한다. Proteinase K 를 처리한 플라스미드 DNA 와 exonuclease 를 반응시킨 결과, 이들 플라스미드들은 5'말단에 단백질이 결합된 성형 이중가닥 DNA의 구조를 가진 것을 확인하였다. 각 플라스미드들의 상호관계를 조사하기 위하여 Southern hybridization 을 수행한 결과 최소 3가지 종류의 플라스미드들로 분류할 수 있었다. 이중 한 그룹 (group I) 은 모든 P. ostreatus 균주들에서 공통적으로 발견되었다. Pleurotus 속의 5가지 다른 종(P. cornucopiae, P. florida, P. pulmonarius, P. sajor-cuja, P. spodoleucus) 의 균주들로부터 미토콘드리아 플라스미드들을 분리하였다. 이들은 한균주당 1-4 개 까지의 플라스미드를 가지며, 플라스미드의 크기는 7.2 kb-14kb 범위에 있었다. P. ostreatus 의 NFFA 2 의 10.2 kb(group I) 플라스미드와 hybridization 을 수행한 결과 P. cornucopiae ASI 2011을 제외한 다른 모든 균주들이 유사한 염기서열의 플라스미드를 갖고 있음을 알았다.

Plasmid DNAs were detected from the mitochondrial fraction of four strains of whiterot fungus, Pleurotus ostreatus. The size of the plasmids were 10.2 and 7.2 kb in strain NFFA 2, 10.2 kb in NFFA 4001, 11.2 kb in NFFA 4501, and 10.2 and 11.2 kb in KFCC 11635. The two strains,NFFA 2ml and NFFA 2m2, which are mutant derivatives of NFFA 2, did not contain any plasmids. The cleavage by proteinase K indicated that these plasmids have DNA ends associated with proteins. In digestion with proteinase K all the plasm ids remained resistant to lambda exonuclease which hydrolyzes DNA from 5' ends and were sensitive to exonuclease III which hydrolyzes DNA from 3' ends. This suggests that the plasmids are linear double-stranded DNA and the terminal proteins are covalently linked to 5' ends of plasm ids. In order to find relationship between these plasmids, hybridization of plasm ids by each separate plasmid DNA was done. The result indicated that the plasmids can be classified into at least 3 groups. Plasmids of group I were present in all the P ostreatus. More mitochondrial plasmids were detected in P cornucopiae. P ,florida, P pulmonarius, P sajor-caju, and P spodoleucus. The size of plasmids ranged between 7.2 kb and 14 kb. All the species except P cornucopiae contained plasmids of approximately 10 kb which hybridized with the 10.2 kb plasmid (group I) of P ostreatus NFFA 2.