본 연구는 낙엽송 (Larix leptolepis)의 종자배로부터 배배양을 통한 식물체 재분화까지의 최적조건을 구명코저 수행되었는데 그 결과는 다음과 같이 요약할 수 있다. 최대 부정아 유도율은 SH배지에 1.0mg/L zeatin을 첨가한 처리구에서 가장 높은 91.7%의 부정아 유도율을 보였으며, cytokinin 혼용처리를 한 부정아 유도는 1.0mg/L zeatin + 1.0mg/L TDZ처리구에서 40.3%로 가장 높은 유도율을 보였다. 그리고 평균 부정아 유도수는 1.0mg/L zeatin+1.0 mg/L 2iP 및 1.0mg/L zeatin+1.0 mg/L kinetin 처리구에서 종자배당 1.9개로 동일한 유도수를 보여 그 효과는 비슷하였다. 부정아의 길이생장은 염류량을 절반으로 줄인 1/2LM배지에서 계대배양하였을 때 가장 높은 27mm의 신초가 생장되어 가장 효과적인 처리구 나타났다. 증식된 신초의 발근율은 5.0 mg/L IBA 및 0.2mg/L NAA 첨가시 23.3%로 가장 높았고 신초에서 유도된 뿌리수는 5.0mg/L IBA처리구에서 신초당 3.5개로 가장 많았다.
작물 원형질체를 배양하면서 세포의 생존과 노화 그리고 고사의 상태를 대사적으로 정확히 판단이 가능한 marker물질을 확인하고 간편한 측정법을 확립하기 위하여 일련의 연구를 수행하였던 바 그 결과를 요약하면 다음과 같다. 1. 담배와 벼의 원형질체를 나출하여 MS와KM-8P를 기본배지로 하여 2,4-K와 CM을 첨가하였던 바, ABA는 경시적으로 감소하였으며 CM첨가에 의해서 더 많이 감소하였다. GA$_3$, IAA, zeatin은 반대로 증가하는 경향을 나타내었다. 특히 ABA의 감소율과 zeatin의 증가율이 가장 크게 나타났다. 2. Osmoticum(mannitol)을 적정 농도 이상으로 처리하였을 때 ABA는 일시적으로 증가되었다가 감소되었고, 다른 성장 호르몬은 모두 증가폭이 농도가 증가될수록 둔화되었다. 3. Supermine 10mM과 NaCl을 처리하였을 때 담배와 벼에서 각 호르몬의 증감은 서로 반대로 나타났다. 특히 담배는 NaCl의 stress가 크게 나타났다. 그리고 배양 후반기에는 원형질체의 분열이 중지되었다. 4. 원형질체의 배지 성분을 제거하고 32$^{\circ}C$로 고온 배양에 의해서 인위적으로 노화를 촉진시켰을 때 세포의 활력은 48시간 이후에 크게 감소되었다. 세포의 활력 상실과 반비례적으로 ABA는 배양 10일까지 크게 증가되었다. 이와 반대로 성장 호르몬들은 모두 증가되지 않고 감소가 이루어졌다. 특히 zeatin의 감소가 크게 나타났다. 5. 이상의 결과에 따라서 식물 호르몬은 원형질체가 처한 환경 요인이나 부여된 어떤 조건에 따라서 민감하게 변동하고 있음을 확인하였다.
참나무류의 효율적인 기내 번식법 개발을 위하여 상수리나무 유묘와 수형목을 재료로 액아를 배양하였다. 5가지 배지 가운데 WPM 배지에서 줄기 분화 및 생장이 가장 양호하였다. 싸이토키닌중 zeatin 3.0mg/L의 농도에서 줄기 분화 및 생장에 효과를 보였으나 대체로 BAP의 처리가 다경 줄기 분화 및 생장에 주효하였다. BAP와 zeatin의 공조처리는 다경줄기 유도 및 생장에 더욱 효과가 있었으며, 적정 농도는 BAP 0.5, zeatin은 0.05-1.0mg/L이었다. 기내발근은 1/2 GD 배지에 0.5mg/L IBA 처리로 90% 이상 발근되었고 인공 배양토에서 70% 이상 활착되었다. 유령 대목에 2회 접목된 27개 수형목 클론을 재료로 시험한 결과는 4개 클론만이 기내 증식의 가능성을 보였다. 재유령화된 수형목의 기내 번식은 모수령의 영향보다는 클론간의 차이에 크게 좌우되었다. 기내 반응이 우수한 수형목 클론은 증식후 90% 이상 발근되었다. 발근배지는 염류를 반감시킨 GD배지에 IBA 0.2-2.0mg/L 처리시 주효하였다. 발근묘는 인공 배양토에 이식하여 5개월 후 60% 이상 활착되었다.
온시디움 'Aloha'에 $GA_3$를 비롯하여 cytokinin류인 BA, zeatin 및 kinetin을 농도별로 2회(6월1일과 6월 15일) 엽면 살포한 결과 화경수, 소화경수, 소화수 등이 뚜렷하게 증가되었을 뿐만 아니라 개화도 촉진되었다. 특히 BA처리는 꽃대의 수와 소화경수를 가장 많이 증가시켰으며 소화수와 크기는 50mg/L 처리구에서 현저하게 증가되었고 개화소요일수는 무처리구에 비해 100mg/L 처리구에서 26일이나 단축되었다.
본 실험은 식물생장조절제인 TDZ, BA, TAh, IBA, zeatin, GA$_3$가 사과대목 M.25의 기내증식에 미치는 영향을 구명하기 위해서 실시하였다. 또한 시토카닌과 오옥신의 역할을 동시에 하는 것으로 알려진 potassium humate가 뿌리형성에 미치는 효과를 알아보기 위해서 몇가지 농도로 배지에 첨가했다. 생장점 배양으로부터 건전한 산소를 얻기 위해서 BA, TDB, zeatin을 단독으로 기본배지에 첨가한 결과, zeatin 1.0 mg/L 첨가한 배지에서 100% 생존을을 나타냈고 신초생장 또한 양정하였다. 생장점 배양을 통해서 얻은 신초의 증식을 위해서 여러 종류의 생장조절제를 다양한 농도로 처리했을때 NAA 0.5 + TDZ 0.2 mg/L이 첨가된 배지에서 증식된 신소재가 평균 12.1개로 증식율이 가장 높았다. 형성된 신초로부터 발근유도는 IBA 0.6 mg/L이 첨가된 배지에서 가장 효과적이었다. 이러한 발근유도 배지에 potassium humate 250 mg/L이 첨가된 처리구에서 발근율과 부정근 돈는 IBA 0.5 mg/L 단독 처리구보다 각각 30%와 350% 이상 증가되었다.
Kim, Kyong-Ho;Park, Ho-Ki;Park, Moon-Soo;Yeo, Up-Dong
Journal of Plant Biotechnology
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제3권2호
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pp.95-100
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2001
To select the section with shoot formation ability, the calli and shoot formation from three sections (first leaf including cotyledonary node, hypocotyl and cotyledon explants) of 5-days-seedlings of soybean were induced on MS medium supplemented with 1.0 mg/L BAP, 3% sucrose, and 0.3% gelrite for one month. The first leaf section exhibited the highest shoot formation rate (51%), followed the hypocotyl section (10%) and the cotyledon section (0%). The shoot formation rates and shoot number of the four excised sections (whole first leaf, a half of the first leaf, a third of the first leaf and only node) of the first leaf were also investigated on the same medium. A half of the first leaf explant and the third of the first leaf explant had higher shoot formation rates (76-80%) and numbers (3-4 / explants) than those in other two explants. Effects of six cytokinins (kinetin, zeatin, BAP, 2iP, PBA, and TDZ) on shoot formation were determined, using the half of the first leaf explants. Zeatin (1.0 mg/L) exhibited the highest in shoot formation rate (94%) and numbers (8 / explant). In addition, the combined effects of three cytokinins (zeatin, BAP, and TDZ; 0.5, 1.0, 2.0 mg/L, respectively) and an auxin (IAA; 0.0, 0.5, 1.0, 2.0 mg/L) were determined. The combination (1:1, v/v) of zeatin (1.0 mg/L) and IAA (1.0 mg/L) exhibited the highest in shoot formation rate (96%) and numbers (16 / explant), twice more than zeatin (1.0 mg/L) alone. The shoot cuttings were transferred and cultivated on the rooting media supplemented with only auxin, IBA at various concentrations. The highest root formation (8 / shoot) was achieved on the medium supplemented with 1.5 mg/L. After 4 weeks of cultivation, the plantlets with an extensive root system were transplanted in pots with a soil mixture of vermiculite and fine sand. Transferred to field, about 75% of the plantlets survived.
Five different poplar hybrids were tested for rescuing embryo to elongate in vitro plantiets after hybridization. Ovaries and ovules were cultured on Woody Plant Medium (WPM) supplemented with cytokinins, 6-benzylamine (BA) and zeatin. Multiple shoots were initiated from half section of capsule with immature embryos after 21 days from pollination and tiny shoots were formed after the expansion of cotyledons in ovule cultures. Germinating response was better in intraspecific hybrids $(6.53\pm1.66)$ than interspecific crosses $(0.93\pm0.54)$ from half section of capsules on WPM medium. In general, zeatin was better than BA in inducing multiple shoots from isolated ovules. The highest average number $(19.40\pm4.53)$ of shoots was produced from immature ovules of 21 days post-pollination of WPM medium supplemented with 5.0 mg/L zeatin. The highest percentage of germination was 93% from the half section of in vitro ovary cultures. Soil acclimation was successfully conducted in cell tray containing artificially mixed soil with 96% survival rate.
Actinidia deliciosa ${\times}$ A. arguta clone 118의 엽조직을 0.5 mg/L 2,4-D, 0.1 mg/L NAA 및 0.05 mg/L BA가 첨가된 MS 배지에서 8주간, 광조건하에서 배양하여 캘러스를 유기시켰다. 유도된 캘러스는 현탁배양을 위해 0.5 mg/L 2,4-D, 0.1 mg/L NAA 및 0.05 mg/L BA가 첨가된 액체 MS배지로 접종시켰다. 현탁배양세포의 대수생장기 혹은 생장 정체기 시기는 세포배양 5-11일, 12일경에 각각 관찰되었다. 현탁세포로부터 유도된 캘러스의 생중량은 생장조절물질 조합에 따라서 차이를 보이지 않았다. 가장 높은 신초유도율 (88.3%)은 2.0 mg/L zeatin의 첨가구였으며 TDZ과 BA 혹은 zeatin이 혼합처리된 처리구에서 또한 신초유도에 효과가 있는 것으로 나타났다. 유도된 신초를 MS +0.2 mg/L zeatin으로 옮겨 더욱 신초생장을 유도하였으며 발근유도를 위해 1.0 gm/L IBA가 첨가된 St배지로 옮겼다. Actinidia deliciosa ${\times}$ A. arguta clone 118의 세포배양으로부터 식물체 재분화까지 가능하였다.
옻나무의 근삽에 의한 묘목생산성을 높이기 위하여 BA, kinetin 및 zeatin 등의 생장조절물질과 삽수의 길이 및 직경 등을 공시하여 신초발생율과 묘소질을 조사하였다. 옻나무의 근삽처리 후 3∼5주 사이에 삽수로부터 신초가 발생하여 지상부로 출현하였다. 발생하는 신초의 수는 대부분이 1개였으나 2∼3개의 신초가 발생하기도 하였다. 한편 신초가 발생하지 않은 삽수들은 대부분 신초분화능이 포함된 피층부가 부패 한 것이 그 원인이었다. 생장조절물질 처리에 있어서 zeatin처리가 가장 양호한 신초발생율을 보였고 농도가 높을수록 신초발생율도 높았다. BA와 kinetin처리 역시 농도가 높을수록 신초발생율이 높았으나 zeatin처리에 비하여 낮았다. 생장조절물질 처리에 의한 묘소질은 처리간에 통계적인 유의성이 인정되지 않았지만 대조구보다는 양호하였다. 삽수의 길이 별 신초의 발생은 삽수의 길이가 길수록 일찍 시작되었고, 묘소질은 15 cm의 삽수가 가장 양호하였고 삽수의 길이가 작아질수록 묘소질이 불량하였다. 그러나 단위길이 당 유묘 생산량은 10 cm의 삽수가 가장 양호하였다. 삽수의 직경에 따른 신초의 발생율은 삽식 10주 후에 0.3∼0.5 cm의 삽수가 76%로써 가장 양호하였고 묘소질은 통계적인 유의성이 인정되지 않았다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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