Extracellular enzymes from Lentinus edodes M290 on normal woods (Quercus mongolica) and waste logs from oak mushroom production were comparatively investigated. Endoglucanase, cellobiohydrolase, ${\beta}$-glucosidase, and xylanase activities were higher on waste mushroom logs than on normal woods after 1. edodes M290 inoculation. Xylanase activity was especially different, with a three times higher activity on waste mushroom logs. When the waste mushroom logs were used as a carbon source, a new 35 kDa protein appeared. After the purification, the optimal pH and temperature for xylanase activity were determined to be 4.0 and $50^{\circ}C$, respectively. More than 50% of the optimal xylanase activity was retained when the temperature was increased from 20 to $60^{\circ}C$, after a 240 min reaction. At $40^{\circ}C$, the xylanase maintained 93% of the optimal activity, after a 240 min reaction. The purified xylanase showed a very high homology to the xylanase family 10 from Aspergillus terreus by LC/MS-MS analysis. The highest Xcorr (1.737) was obtained from the peptide KWI SQGIPIDGIG SQTHLGSGGS WTVK originated from Aspergillus terreus, indicating that the 35 kDa protein was xylanase. This protein showed low homology to a previously reported L. edodes xylanase sequence.
The use of genetically cloned xylanase acquired from Bacillus strearthermophillus improves bleachability for oak kraft pulps. Combination of xylanase(X). oxygen(O), ozone(Z). peroxide(P), alkaline extraction(Eo. Eop), and chlorination(C/D, D) have been tested in a variety of bleaching sequences. The effectiveness of xylanase pre-treatment(XO) and post-treatment(OX) in oxygen bleaching is mainly compared. With xylanase treatment the brightness increase by 1.5-2.1% ISO in OZEP, OZEoP, OZEopP and OPZP sequences. There is only numerically difference of brightness gains between OX and XO sequences. With xylanase treatment chemical requirements for bleaching decrease by 42.6-48.6% in OC/DEoD sequence and 47.9-54.7% as active chlorine in OC/DEopD sequence at the same brightness. the reduction of bleaching chemicals is higher in XO sequence than those in OX sequence. Following xylanase treatment the viscosity increases from 11.7-12.0 mPa·s to 12.4-13.5 mPa·s and the brightness stability is considerably improved however the difference of effectiveness between XO and OX sequence is not present. Compared to tensile index vs tear index, the physical properties are similar for TCF bleaching sequences with and without xylanase treatments. However in OC/DEoD and OC/DEopD sequences the physical properties decrease with xylanase treatment. There is no difference in the physical properties between XO and OX sequences. COD, BOD and color of bleaching effluents increase slightly with xylanase treatment, however the discharge of COD end-load into environmental impact decrease.
Objective: This study was designed to investigate the effects of an Aspergillus sulphureus xylanase expressed in Pichia pastoris on the growth performance, nutrient digestibility and gut microbes in weanling pigs. Methods: A total of 180 weanling pigs (initial body weights were $8.47{\pm}1.40kg$) were assigned randomly to 5 dietary treatments. Each treatment had 6 replicates with 6 pigs per replicate. The experimental diets were wheat based with supplementation of 0, 500, 1,000, 2,000, and 4,000 U xylanase/kg. The experiment lasted 28 days (early phase, d 0 to 14; late phase, d 15 to 28). Results: In the early phase, compared to the control, average daily gain (ADG) was higher for pigs fed diets supplemented with xylanase and there was a quadratic response in ADG (p<0.05). In the entire phase, ADG was higher for the pigs fed 1,000 or 2,000 U/kg xylanase compared to the control (p<0.05). The gain to feed ratio was higher for pigs fed diets supplemented with 1,000 or 2,000 U/kg xylanase compared to the control (p<0.05). Increasing the amount of xylanase improved the apparent total tract digestibility of dry matter, crude protein, neutral detergent fiber, calcium, and phosphorus during both periods (p<0.05). Xylanase supplementation (2,000 U/kg) decreased the proportion of Lachnospiraceae (by 50%) in Firmicutes, but increased Prevotellaceae (by 175%) in Bacteroidetes and almost diminished Enterobacteriaceae (Escherichia-Shigella) in Proteobacteria. Conclusion: Xylanase supplementation increased growth performance and nutrient digestibility up to 2,000 U/kg. Supplementation of xylanase (2,000 U/kg) decreased the richness of gut bacteria but diminished the growth of harmful pathogenic bacteria, such as Escherichia-Shigella, in the colon.
Xylanase from Bacillus sp. GS was purified through acetone precipitation, DEAE-Sephadex A-50 ion exchange chromatography and Sephadex G-100 gel filtration. The optimum reaction temperature of purified xylanase was 50t . Its optimum pH was between pH 6.0 and pH 6.5. This enzyme was stable below 5$0^{\circ}C$ for several hours and stable at between pH 5.5 and pH 8.0. The enzyme activity of xylanase was remarkably increased by Co++ and Cu++ ions. According to the study of hydrolysis mode of this enzyme, it was turned out to be ends type xylanase that can produce xylooligosaccharides, known as bifidogenic factor, from xylan.
숙성한 퇴비에서 16종의 사상균을 분리하고 이들의 xylanase 및 cellulase의 활성을 측정하였다. 이 결과 효소활성이 강한 6 균주를 선별하고 이들의 형태학적 특성을 속까지 동정하고 선별된 균주가 생산하는 xylanase와 cellulase의 성질을 비교 검토하였다. 선별된 균주의 배양기질에 따른 효소생산량 산량을 비교하기 위해 cellulose와 xylan으로 배양한 후 이들을 분해하는 효소활성의 비 즉 xylanase/cellulase 비를 계산하고 이들 효소의 일반 성질을 검토하였다. 차후 연구에서 이들 효소를 분리, 정제하기 위해 acetone에 의한 침전성을 아울러 실험하였다.
고온 호알카리성 Bacillus K-17의 xylanase유전자의 구조해명과 대량 생산 균주를 개발하기 위채 Bacillus K-17의 염색체를 pER 322를 사용하여 E. coli에 형질전환시켜 xylanase 활성을 나타내는 형질전환체를 얻었다. 이 형질전환체에서 hybrid plasmid를 분리하여 제한효소로 mapping하였고 이 유전자가 Bacillus K-17유래인가를 hybridization에 의해 확인하였다. Recombinant plasmid pAX 1113은 5.1kb HindIII 절편을 가졌으며 BgIII site가 두곳, ECoRI과 pst site가 한곳이었으며 효소를 정제한 결과 Bacillus K-17이 생산하는 두 가지 xylanase중에서 xylanase I과 동일하였다.
Bacillus pumilus PJ19 isolated from Pinus leaves showed optimum xylanase production when grown in yeast tryptone broth at $37^{\circ}C$, pH 7.2, and shaken at 200 rpm after 48 h of incubation. Xylanase production was induced by xylan and xylose but repressed in the presence of glucose. Xylanase production by B. pumilus PJ19 was not growth-associated and the maximum enzyme production was found after 36 h of incubation.
Carboxymethylcellulose (CM-cellulose)와 Beechwood xylan을 각각 기질로 사용하여 trypan blue를 첨가하여 제작한 Agar-LB 배지 상에서 명확한 활성환을 형성하는 균주를 cellulase와 xylanase 생산 균주로 단리하였다. 단리한 균주 유래의 16S rRNA 유전자 및 API 50 kit를 분석한 결과 Bacillus subtilis와 약 99.5%의 높은 상동성을 보였기에 본 균주를 Bacillus subtilis로 동정하여 B. subtilis NC1로 명명하였다. B. subtilis NC1 유래 cellulase와 xylanase는 CM-cellulose와 Beechwood xylan에 대하여 각각 높은 효소 활성을 보였으며, 두 효소 모두 pH 5.0과 $50^{\circ}C$의 조건하에서 가장 높은 효소 활성을 보였다. B. subtilis NC1 균주 유래 cellulase와 xylanase 유전자를 cloning하기 위하여 shot-gun cloning 방법을 이용하여 B. subtilis NC1 염색체 DNA로부터 효소 유전자를 cloning하여 유전자 배열을 규명한 결과 cellulase 유전자는 아미노산 499개를 암호화하는 1,500 bp의 open reading frame (ORF)으로 이루어져 있었으며, 아미노산 배열로부터 추정되는 분자량은 55,251 Da 이었다. 그리고, xylanase에 대한 유전자는 아미노산 422개를 암호화하는 1,269 bp의 ORF로 이루어져 있었으며 유전자 유래 아미노산 배열로부터 추정되는 단백질 분자량은 47,423 Da 이었다. 두 효소의 아미노산 배열을 이용하여 상동성을 검토한 결과 cellulase는 glycoside hydrolase family (GH) 5에 속하는 cellulase와 xylanase는 GH30에 속하는 xylanase와 높은 상동성을 나타내었다.
Xylanase는 선형복합다당인 ${\beta}$-1,4-xylan을 xylose로 가수분해하는 효소의 한 종류이며, 종이제조공정에 응용되고 미래에 바이오 연료의 생산에 사용 될 수 있다. 동해 심층 퇴적물로부터 신종세균으로 보고된 Paenibacillus donghaensis JH8은 배지중의 xylan을 분해한다고 알려져 있으며, 여기에서는 이 효소의 특성을 조사하였다. 효소는 0.1% xylan 존재에서 최고로 유도되었으며, xylanase의 생산은 초기 대수성장기에 효소를 생산하기 시작하여, 정지기에서 약 55 miliunit에 도달하였다. 세포외성 xylanase의 최적온도와 pH는 각각 $40^{\circ}C$와 pH 6.0이였다. Xylanase의 활성은 $Ca^{2+}$ 및 $Mn^{2+}$, $Fe^{2+}$, $Cu^{2+}$, $Al^{3+}$, EDTA의 존재에 의해 억제되었고, $K^+$, $Ag^+$, DTT에 의해 활성화되었다. 이 xylanase는 $40^{\circ}C$에서 120분간 활성을 유지하며 안정하였지만, $60^{\circ}C$에서는 30분에서 거의 모든 활성을 잃어버리는 특성을 보여주었다. 농축된 배양 상등액의 zymography 분석시 42 kDa의 주 밴드와 68과 120 kDa에 두 개의 아주 희미한 밴드를 나타내었다.
흰목이균, 공생균, 혼합균(흰목이균과 공생균)의 xylanase 생산 최적 탄소원은 xylose이었고 흰목이균, 공생균의 질소원은 $KNO_3$, 혼합균의 질소원은 $(NH_4)_2SO_4$이었다. Xylanase 생산 최적 배양일수는 흰목이균과 혼합균은 5일, 공생균은 6일이었으며 최적온도는 흰목이균과 공생균이 $40^{\circ}C$, 혼합균이 $45^{\circ}C$이었다. Xylanase 생산 최적 pH는 흰목이균과 공생균이 pH 6.0, 혼합균이 pH 7.0이었으며, 금속이온의 영향은 흰목이균에서는 $Hg^{2+}$, 혼합균에서는 $Pb^{2+}$를 제외하고는 금속이온이 저해적으로 나타났다. 흰목이균, 공생균, 혼합균의 xylanase 열안전성은 $50^{\circ}C$까지 80% 이상 안정하였으며, 기질(Birchwood) 특이성에 관해서는 Birchwood로부터의 xylan이 가장 활성이 높았다. 흰목이균, 공생균, 혼합균의 xylanase 기질농도는 20mg/ml, 반응시간은 45분까지 활성이 급속히 상승하다가 그후 매우 완만한 반응속도를 나타내므로서 이를 기초로 하여 Km값을 얻은 결과, 흰목이균은 $6.25{\times}10^{-5}\;M$, 혼합균은 $5.2{\times}10^{-2}\;M$, 공생균은 $5.6{\times}10^{-2}\;M$로 흰목이균, 혼합균, 공생균 순으로 효소 기질과의 친화력이 약하였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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