최근 국내 지황에서는 Rehmannia mosaic virus (ReMV), Youcai mosaic virus (YoMV), Broad bean wilt virus 2 (BBWV2), Plantago asiatica mosaic virus (PlAMV), Rehamnnia virus 1 (ReV1) 등 5종의 바이러스 감염이 확인되었다. 국내 주요 지황 재배지역의 포장에서 지황 바이러스의 발병률을 조사하기 위해 2017년부터 2018년까지 여섯 지역의 포장에서 바이러스병 조사를 실시하였다. 지황에 나타나는 주요 바이러스 증상은 잎에 모자이크와 노란 반점 및 변색이었으며 생육이 저조해지는 증상이 관찰되었다. 총 145개의 시료를 채집하여 5종 바이러스에 대한 유전자 진단을 실시한 결과, 전 시료에서 2종 이상의 바이러스가 복합 감염되어 있음을 확인하였다. 지황은 뿌리로 영양번식하는 재배 특성 상 품종별 종근에서도 바이러스 감염여부를 조사하였으며, 종근에서도 5종의 바이러스가 검정됨에 따라 지황에서의 바이러스병 관리를 위해서는 무병 종근의 생산 및 보급이 매우 중요할 것으로 판단된다.
Most orchids are propagated by tissue culture. To survey the viral infection of tissue cultured Orchids, total RNA was extracted from in vitro Cymbridium and Phalaenopsis spp. collected from companies producing tissue-cultured orchids, and RT-PCR analysis was conducted with primer pairs specific to Cymbidium mosaic virus (CymMV) and Odontoglossum ring spot virus(ORSV), which are infecting wide range of orchid genera. The bulb size of Cymbidium infected with CymMV and ORSV was compared with healthy one at 10 months after planting in vitro orchids in the glasshouse. The CymMV or ORSV infection in 97 Cymbidium and 55 Phalaenopsis plants was 84.5 and 89.1 %, respectively. Mixed infection was found in 52.6 and 47.3% of Cymbidium and Phalaenopsis tested, whereas virus-free orchids were 15.5 and 10.9%, respectively. The CymMV and ORSV reduced the bulb size by 2.7-50% depending on the cultivars of Cymbidium. The both viruses caused yellowing, mottle and mosaic with or without necrosis in 4 Cymbidium cultivars.
Satsuma dwarf virus (SDV) seriously damages citrus production by reducing the quality and yield of fruit. To avoid contamination with SDV, mother trees are checked to be SDV-free in advance of nursery tree distribution. In this study, we compared an immunochromatographic assay (ICA) kit with double-antibody sandwich enzyme-linked immunosorbent assay (DAS-ELISA) for large-scale diagnosis of SDV in orchardgrown trees in Shizuoka Prefecture, Japan. The two methods gave conflicting results for 11 of 1,705 samples, all of which were negative by DAS-ELISA but positive by ICA. The samples scored as positive by either DAS-ELISA or ICA were analyzed by reverse transcription polymerase chain reaction and all were confirmed to be positive. These results validate the use of ICA as a screening method for large-scale diagnosis. Strain discrimination revealed that 16 of 22 isolates belonged to SDV, while citrus mosaic virus (CiMV) infection only and co-infection (SDV and CiMV) were in a minority.
경산 묘목단지는 대단위 과수종묘를 생산하고 있어 경쟁력 강화를 위하여 무독묘 보증 생산이 요구되고 있다. 특히 생산규모가 큰 사과종묘에 대한 빠르고 정확한 바이러스 진단이 시급하다. 본 연구에서는 사과바이러스 진단을 위하여 다량의 시료를 동시 분쇄할 수 있는 bead beater를 이용하였으며 분쇄 bead는 저가의 산업용 glass bead (0.4 mm 직경)를 일회용으로 채택하였다. RNA추출을 위하여서는 guanidine thiocyanate 용액이 Trizol 용액보다 효과적인 것으로 나타났으며 silica membrane tube의 이용으로 RNA추출 간편성을 높일 수 있었다. 사과바이러스는 RT-PCR에 의하여 검증하였다.
Apple stem grooving virus (ASGV) is a high-risk viral pathogen that infects many types of fruit trees, especially pear and apple, and causes serious economic losses across the globe. Thus, rapid and reliable detection assay is needed to identify ASGV infection and prevent its spread. A reliable reverse transcription loop-mediated isothermal amplification (RT-LAMP) was developed, optimize, and evaluated for the coding region of coat protein of ASGV in pear leaf. The developed RT-LAMP facilitated the simple screening of ASGV using visible fluorescence and electrophoresis. The optimized reaction conditions for the RT-LAMP were 63℃ for 50 min, and the results showed high specificity and 100-fold greater sensitivity than the reverse transcription polymerase chain reaction. In addition, the reliability of the RT-LAMP was validated using field-collected pear leaves. Furthermore, the potential application of paper-based RNA isolation, combined with RT-LAMP, was also evaluated for detecting ASGV from field-collected samples. These assays could be widely applied to ASGV detection in field conditions and to virus-free certification programs.
Apple scar skin viroid (ASSVd), Apple chlorotic leaf spot virus(ACLSV), Apple stem pitting virus (ASPV), Apple stem grooving virus (ASGV)는 사과를 감염시키는 대표적인 바이러스로, 이러한 4종 바이러스에 복합 감염된 사과 '홍로'의 동절기 가지의 휴면아(측아)로부터 다양한 크기 (0.4 mm ~ 1.2 mm)와 발달단계 (이하 Stage 1, Stage 2, Stage 3라 칭함)의 경정 및 측부 분열조직을 절취하여 BA 3.0 mg/L 와 IBA 0.1 mg/L가 혼합된 배지에 배양하여 캘러스를 형성시킨 후, 감염 바이러스바이러스의 제거유무를 조사하였다. 직경 10 mm이상 증식된 캘러스 31 계통을 RT-PCR 분석으로 제거효율을 알아 본 결과, ACLSV는 100%, ASSVd와 ASPV는 93.5%의 높은 제거 효율을 보인 반면, ASGV는 25.8%로 상대적으로 제거효율이 낮았다. 4종 바이러스가 동시에 모두 제거되는 경우는 Stage 1의 휴면아의 분열조직을 배양하였을 때만 가능하였는데, 그 이유는 ASGV가 이 시기의 배양에서 주로 제거되었기 때문으로, ASGV는 다른 바이러스와는 달리 분열조직의 발달단계가 큰 영향을 미치는 것으로 나타났다. 휴면아의 분열조직을 배양하여 바이러스를 제거한 예는 세계적으로 보고된 바가 없는 것으로서, 본 연구결과는 향 후 사과의 무병묘 생산에 매우 유용한 자료로 활용될 것이다.
고구마 바이러스 무병묘 재배에 따른 세대 간 수량변이를 구명하기 위하여, '안노베니', '연황미', '맛나미' 등 3품종의 무병묘 세대($TC_0$, $TC_2$, $TC_3$) 삽수를 $75{\times}25cm$로 정식하여 흑색비닐로 멀칭재배하였다. 정식 30일째 줄기신장은 대조구인 농가묘보다 무병묘 세대에서 유의한 증가를 보였으며, $TC_0$에서 가장 왕성하였다. 120일째 수확기 생육은 줄기길이, 원줄기 마디수와 곁가지수는 농가묘보다 무병묘 세대에서 높았으나, 통계적 유의성은 없었다. 무병묘 세대의 지상부 생체중이 농가묘보다 유의하게 증가하였으나, 무병묘 세대간 그리고 품종간에는 유의한 차이가 없었다. 주당괴근수와 평균괴근중은 농가묘보다 $TC_0$와 $TC_1$ 세대에서 유의한 증가를 보였으나, $TC_2$ 세대에서는 농가묘와 차이가 없었다. 무병묘 세대의 주당괴근중은 농가묘보다 유의하게 증가하였고, 무병묘 세대간에는 $TC_0$에서 가장 높았다. 무병묘 세대의 평균상저수량, 상저비율과 소형 고구마(40-200g) 비율도 농가묘보다 유의한 증가를 보였다. 300g 이상 괴근비율은 $TC_0$ 세대에서 가장 낮았다. $TC_2$ 세대의 상저수량은 $TC_0$ 세대보다 유의하게 낮았고, 농가묘와도 유의한 차이가 없었다. 품종간 상저수량은 '맛나미'에서 가장 높았으며, '안노베니', '연황미' 순이었다. 따라서 무병주의 수량과 품질 유지를 위해서 농가는 3년 주기로 교체하는 것이 필요하다. 다만 교체주기는 바이러스 재감염 정도에 따라 2-3년 주기로 실시하는 것이 바람직할 것이다.
Barley Yellow Mosaic Virus (BaYMV) caused significant reduction in barley yield and is difficult to control due to alive parasitic soil-borne fungus, Palmyra gamines that transmits the, virus. Previous studies have indicated that a virus-free soil could be infested by using virus-contaminated farming machineneries and implements. For the further confirmation of this finding, different proportions of BaYMV-infested soil were mixed into virus free soil. Three barley varieties (Hordum vulgarae, cv "Olbori", "Baegdong" and "Sacheon 6") were sown in pots treated with different rate of P. graminis-infested soil ranging from 0% to 100% in October 20, 2001. Results showed that BaYMV infection increased as the rate of infested soil increased. Initial symptoms were observed in a pots treated with 10% infested soil in all the 3 varieties of barley. "Olbori" had about 5% infection in 20% infested soil and about 10% infection in 40% or 50% infested soil and about 20% infection in 60% infested soil. In "Baegdong", the trend of BYMV occurrence was similar with "Olbori" but the time of severe infection was earlier than "Olbori". BaYMV infection in "Sacheon 6" was even earlier than "Baegdong" with much more severe symptoms than "Baegdong". The growth rate of barley was affected by about 19-22% when grown in 20% infested soil. As the rate of BaYMV infested soil increased the heading date was delayed but the maturing date was early in "Olbori" and "Sacheon 6". Also, reduction rate of culm length in 3 varieties increased with increase of infested soil content. However, "Olbori" showed the highest reduction. "Sacheon 6", have been characterized with long spike length, however was significantly reduced as the infested soil increased. On the other hand, spike length of "Olbori" was not significantly affected despite of increased of infested soil. The reduction rate of 1000 kernel weight was higher in large kernel size cultivar "Sacheon 6" and "Olbori" than small kernel size "Baegdong" as increase of BaYMV-infested soil content.
Immunohistochemical and Electron Microscopical Studies on the Initial Skin Lesions Induced Experimentally by Very Virulent Strain of Marek\`s Disease Virus in Chickens Marek\`s disease virus (MDV), which is an avian herpesvirus, causes malignant CD3+CD4+CD8-T cell lymphomas at many sites including visceral organs, muscles, peripheral nerves and skin. In the early skin lesions induced by MDV, corelationship between the translational activity of MDV early gene, pp38 and demonstration of MDV particles in the lymphoid cells are not well studied. Therefore, skin biopsies taken at weekly intervals for 2 weeks from the same specific-pathogen free chicknes inoculated with Md/5 MDV were examined immunohistochemically and electron microscopically. In the skin biopsies sampled at 1 week and 2 weeks post inoculation (PI), feather follicle epithelium (FFE) exhibited usually strong positive reaction for pp38, whereas only few lymphoblasts, which were infiltrated around FFE revealed positive reaction. Electron microscopically, small lymphocytes were detectable in the dermis and subcutaneous skin tissues sampled at 1 week PI. The number of small lymphocytes was increased and pleomorphic lymphoblasts, which were medium to large in size were scattered among the small lymphocytes at 2 weeks PI. Some of lymphoblasts revealed degenerative and necrotic changes. FFE contained a lot of MDV particles in the nucleus including mature and immature ones. Infrequently, immature virus particles were observed not only in the degenerative and necrotic lymphoblasts, but also rarely in the health lymphoblasts. From the present results, spontaneous MDV activation including translational activity of MDV pp38 gene and formation of MDV particles was occurred in the lymphoblasts of early MD skin lesions.
We investigated the infection of nervous necrosis virus (NNV) in seven band grouper Hyporthodus septemfasciatus broodstocks, which have been reared in aquaculture farms in South Korea during 2012-2014. To investigate the prevalence of NNV within the broodstock, egg, sperm, and blood were sampled in the spawning season. The egg and sperm samples were subjected to a nested reverse transcription (RT) polymerase chain reaction (PCR) assay to detect NNV and were inoculated on SSN-1 cells to culture the virus. Blood samples were used to detect antibodies against NNV using enzyme linked immunosorbent assay (ELSIA). Positive values from ELISA were found in 39 of 162 samples (24%) in 2012, and 13 of 28 samples (46%) in 2014. Additionally, 4 of 34 broodstocks (11%) investigated in 2013-2014 were determined to be carriers from the nested RT-PCR and in vitro cultivation. The broodstocks in which antibodies against NNV were detected by ELISA, or in which NNV was detected by the nested RT-PCR assay, posed a risk of vertical transmission of NNV. Therefore, it is necessary to select virus-free broodstocks in seed production to reduce the possibility of the vertical transmission of NNV.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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