• Journal of Microbiology
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• 제43권5호
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• pp.437-442
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• 2005

Sera from rabbits were infected with Vibrio vulnificus containing an antibody against major outer membrane protein (MOMP). MOMP of V. vulnificus ATCC 27562 were isolated and purified by Sarkosyl and TritonX-100 dual treatment. Molecular size of MOMP was identified as 36-kDa on $13\%$ SDS-PAGE. The sequence of the first 26 amino acid residues from the N-terminal end of the protein is AELYNQDGTSLDMGGRAEARLSMKDG, which is a perfect match with OmpU of V. vulnificus CMCP6 and YJ016. MOMP specific IgM and IgG were investigated in groups of mice. The group of mice immunized with MOMP and Alum showed higher levels of IgG2b than the group immunized with only MOMP. Vaccination with MOMP resulted in protective antibodies in the mouse infection experiment.

• Journal of Microbiology
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• 제41권4호
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• pp.320-326
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• 2003

In order to identify Vibrio vulnificus in the Yellow Sea near Gunsan, Korea during the early and late summers, the efficiency of the real-time quantitative TaqMan PCR was compared to the efficiency of the conventional PCR and Biolog identification system^TM. Primers and a probe were designed from the hemolysin/cytolysin gene sequence of V. vulnificus strains. The number of positive detections by real-time quantitative TaqMan PCR, conventional PCR, and the Biolog identification system from seawater were 53 (36.8%), 36 (25%), and 10 strains (6.9%), respectively, among 144 samples collected from Yellow Sea near Gunsan, Korea. Thus, the detection method of the real-time quantitative TaqMan PCR assay was more effective in terms of accuracy than that of the conventional PCR and Biolog system. Therefore, our results showed that the real-time TaqMan probe and the primer set developed in this study can be applied successfully as a rapid screening tool for the detection of V. vulnificus.

• 한국수산과학회지
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• 제40권5호
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• pp.293-299
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• 2007

The distribution of hemolytic Vibrio sp. from sea water of three main beaches located in Busan (Gwangan(G), Haeundae(H) and Songjeong(S) beaches) was investigated from June to September 2006 ; this is mid-summer and the main season for bathing. The monthly detection ratio from each beach was 29.2% (7 of 24 samples, G), 33.3% (8 of 24 samples, H), and 16.7% (4 of 24 samples, S). The most probable number(MPN) of strains detected ranged from 1.8-36(G), 1.8-180(H) and 1.8-18(S) MPN/100mL. Of the isolated strains, 24 strains showed definite hemolytic activity. These 24 strains were identified as Vibrio fluvialis, Vibrio vulnificus, Aeromonas hydrophila, Actinobacillus ureae and Eikenella corrodens. Vibrio fluvialis was detected from all three beaches investigated. Vibrio vulnificus was detected from Haeundae and Gwangan beaches. Gwangan beach had a higher detection ratio of Vibrio sp. than Haeundae and Songjeong beaches. These results suggest that seafood harvested from the vicinity of theses beaches may cause food poisoning and risk management to prevent Vibrio septicemia is required, especially for Haeundae and Gwangan beaches.

• 한국어병학회지
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• 제35권1호
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• pp.57-63
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• 2022

Vibrio parahaemolyticus와 V. vulnificus 같은 인체 위해성 세균들은 수산물을 통하여 인체에 감염되는 것으로 알려져 있음으로 생선회로 선호도가 높은 넙치에서 이들 세균이 어느 정도 생존 가능한지 알아보고자 하였다. 먼저 온도와 염분 농도가 다른 배지에서 이들 세균의 생장도를 조사하였다. 37℃ 에서 보다 25℃에서 V. parahaemolyticus와 V. vulnificus는 약 50~60% 감소한 생장률을 보였다. 그러나 1%, 2% 및 3% NaCl을 함유한 배지로 25℃에서 배양하였을 때의 생장은 3% NaCl을 함유한 배지에서 V. vulnificus가 증가된 생장을 보인 것을 제외하고 차이는 없었다. V. parahaemolyticus와 V. vulnificus에 대한 넙치의 감수성을 알아보기 위하여 1×10⁶CFU/fish로 복강 주사하여 인위 감염을 하였으나 1주일간 사망 개체는 없었다. V. parahaemolyticus와 V. vulnificus에 대한 넙치의 방어능력을 알아보기 위하여 넙치의 혈청 및 체표 점액에서의 세균 생존력과 신장에서 분리한 macrophage의 식균 활성을 알아보았다. 혈청에서는 3시간 이내에 각각 85%, 99% 이상의 균이 제거되었고 체표 점액에서는 12시간까지 세균 수가 감소하였으며 신장백혈구는 약 70% 이상에서 식균 작용을 나타냈다. 따라서 넙치는 환경 수에 있는 V. parahaemolyticus와 V. vulnificus에 대한 단순 이동매개체로 작용한다 할지라도 발달된 자체 항균력으로 이들 세균의 수를 감소시켜 인체 감염 가능성을 저하하는 효과가 있음을 시사하였다.

• 미생물학회지
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• 제38권4호
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• pp.281-286
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• 2002

2000년 1 월부터 2000년 10월까지 가두리 양식장에서 Vibrio vulnificus를 검출하였고 이들의 억제 방법을 연구하였다. 이 세균의 검출은 선택적 분리법과 vvhA 유전자를 확인하는 방법을 이용하였다. V. vulnificus는 수온이 $17^{\circ}C$이상인 5월부터 검출되었고 $19^{\circ}C$ 이상인 6월부터 9월까지는 대부분의 시료에서 검출되었다. V. vulnificus를 제어하기 위한 방법 중 냉동 및 냉장 처리는 살균효과를 나타내지 못했다. Citric acid도 균의 생장을 억제하지 못했으나, 500 mg/1이상의 EDTA가 첨가될 경우 균이 완전히 사멸되었다. 분말 광촉매인 산화티타니움은 자외선을 조사할 경우 15분～1 시간 이내에 이 세균을 완전히 사멸시키는 효과를 나타내었다. 산화티타니움을 유리 구슬에 코팅한 광촉매 장치를 이용하여 0.2/min의 turnover rate로 사멸효과를 얻었다.

• 생명과학회지
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• 제14권6호
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• pp.986-990
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• 2004

2002년 5월에서 7월사이 한국 근해로부터 총 가검물 50례 중에서 V. vulnificus은 5균주가 분리되었고, API 20E kit의동정률이 $89.4\~93.7\%$로 나타났다. V. vulnificus 16S rDNA를 증폭하여 얻은 산물을 cloning하여 염기서열을 결정하고 분석한 결과 V. vulnificus로 확인되었다. 동정된 분리균주들의 cell lysates을 SDS-PAGE로 분석하였고 표준균주로 사용된 V. vulnificus ATCC 27562와 분리 균주들을 비교해 본 결과 단백밴드pattern이 많은 차이를 보였으나 외막단백질은 V. vulnificus간에는 공통의 밴드가 확인되었으나 V. parahaemolyticus 와는 차이를 보였다.

• 한국어병학회지
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• 제12권2호
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• pp.89-99
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• 1999

V. vulnificus ATCC 27562균주의 배양 온도를 $2^{\circ}C $, 20분간 및 6% 에탄올, 10분간으로 반응시켰을 때 SDS-PAGE상에서 새로운 16가지의 heat shock protein(hsps)과 10가지의 ethanol shock protein이 나타났다. Lethal temperature에 노출하기전에 미리 열 충격을 가한 경우 thermo tolerance가 유도되었다. 균체면역에 의해 생성된 항혈청과 열 충격 세포에서 분리된 막단백질과의 ELISA에서는 Outer Membrane Protein(OMP)에서 높은 면역반응을 나타냈으며 western blotting으로는 Inner Membrane Protein(IMP)에서는 62kDa, OMP에서는 69 kDa단백이 높은 면역원성을 나타냈다. ethanol 충격 반응에서는 IMP에서는 48 kDa, OMP에서는 오직 major밴드에서만 면역반응성이 확인되었다. anti-V, vulnificus혈청에 대한 균체 응집시험에서는 열 충격 반응 후의 균체가 정상 균체에 비해 응집반응성이 높았다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제14권2호
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• pp.350-355
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• 2004

Sulforhodamine B (SRB) assay is a rapid, sensitive, and inexpensive method for measuring cell proliferation and chemosensitivity. However, the lactate dehydrogenase (LDH) release assay is generally used to measure cytototoxicity of infectious microorganisms against host cells. In this study, we investigated the possibility of applying the SRB assay to determine cytotoxicity for infectious microorganisms, and compared the results with those obtained by the LDH release assay. We used Vibrio vulnificus as a model of infectious microorganisms. The SRB assay showed that V vulnificus strongly induced cytotoxic activity against human intestinal cells, Caco-2 and INT-407 cells. The degree of cytotoxicity closely correlated with infection time and number ratios of V. vulnificus to intestinal cells (MOI, multiplicity of infection). Furthermore, cytotoxicity values obtained by SRB assay correlated well with results obtained by the LDH release assay, and both assays gave a linear response with respect to MOI Heat-inactivation of V. vulnificus for 35 min at $60^{\circ}C$ did not induce cytotoxic activity, indicating that viability of V. vulnificus is crucial for cytotoxic activity against intestinal cells. Although both assays are suitable as cytotoxicity endpoints, the SRB assay is recommended for measuring cytotoxicity of infectious microorganisms against host cells because of its significantly lower cost and more stable endpoint than the LDH release assay.

• 한국수산과학회지
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• 제36권3호
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• pp.239-246
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• 2003

We have examined the 16S-23S rRNA intergenic spacer region (ISR) of Vibrio vulnificus KCTC 2959. ISRs were amplified by primers complementary to conserved regions of 16S and 23S rRNA genes. ISR amplicons were cloned and sequenced. Analysis of the ISR sequences showed that V. vulnificus KCTC 2959 contains five types of polymorphic ISRs. Size of ISRs ranged from 424 to 741 bp in length and the number of tRNA genes ranged from one to four. The ISRs were designated as ISR-E $(tRNA^{Glu}),\;ISR-IA\;(tRNA^{Ile}-tRNA^{Ala})$, ISR-EKV $(tRNA^{Glu}-tRNA^{Lys}-tRNA^{Val})$, ISR-IAV $(tRNA^{Ile}-tRNA^{Ala}-tRNA^{val})$ and ISR-EKAV $(tRNA^{Glu}-tRNA^{Lys}-tRNA^{Ala}-tRNA^{Val})$ based on their tRNA genes. Multiple alignment of representative sequences from different Vibrio species revealed several domains of high sequence variability. We used the sequences of variable domains to design species-specific primer for detection PCR. Specificity of the primers was examined using genomic DNA prepared from 18 different Vibrio species. The results showed that the PCR using primers designed in this study can be used to detect V. vulnificus from other Vibrio species.

• 한국수산과학회지
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• 제21권2호
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• pp.80-84
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• 1988

방어, 참돔, 피조개, 굴 4종의 어패육에 V. vulnificus M-8을 접종하여 저장온도와 시간에 따른 균수의 변화를 시험한 결과는 다음과 같다. 1. V. vulnificus의 저온저항성은 $-20^{\circ}C$의 $1.5\%$ 식염-인산완충희석수에서는 32시간에 거의 사멸하였으며, 방어육 균질액에서는 인산완충희석수에서 보다 감소가 완만하였고 72시간 이후에도 균이 검출되었다. 그리고 $4^{\circ}C$ 저장에서도 균의 감소가 현저하였다. 따라서 이 균의 저온저항성은 약하지만 단시간 냉동 및 냉장에 의한 균의 사멸은 어렵다는 것을 알 수 있었다. 2. 어패육에 접종하여 $30^{\circ}C$에 저장한 시료중의 V. vulnificus의 증식은 일반적으로 16시간만에 최대균수에 달하였으나 피조개의 경우는 12시간으로 약간 빨랐으며 특히 방어육에 있어서는 초기에 감소하는 특징과 더불어 균의 증식속도가 완만하였다. 그리고 가열처리육보다 생육에서의 균의 증식이 빠르게 나타났다.