• Title/Summary/Keyword: u-HPLC

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명란 단백분해효소 저해제의 특성 (Characteristics of Protease Inhibitor Purified from the Eggs of Alaska pollock (Theragra chalcogramma))

  • USTADI;김근영;김상무
    • 한국수산과학회지
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    • 제38권2호
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    • pp.83-88
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    • 2005
  • Protease inhibitors were purified from the eggs of Alaska pollock (Theragra chalcogramma) using the following purification steps: ammonium sulfate precipitation, ion exchange, gel permeation, and high performance liquid chromatographies (HPLC). The protease inhibitor from the heated eggs of Alaska pollock was not as well purified. In addition, the heated eggs showed lower specific inhibitory activity than the unheated eggs. The purification yields after ammonium sulfate precipitation, ion exchange, and gel permeation chromatographies were 22.7$\%,\;15.3\%$,and $4.4\%$, respectively. There were two kinds of protease inhibitors on the gel permeation chromatography pattern Their molecular weights were estimated to be 66,700 and 16,000 Da, respectively. Both were classified as a cysteine protease inhibitor because of the existence of inhibiting papain, which is one of cysteine proteases.

Bioconversion of Cyanidin-3-Rutinoside to Cyanidin-3-Glucoside in Black Raspberry by Crude α-ʟ-Rhamnosidase from Aspergillus Species

  • Lim, Taehwan;Jung, Hana;Hwang, Keum Taek
    • Journal of Microbiology and Biotechnology
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    • 제25권11호
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    • pp.1842-1848
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    • 2015
  • Cyanidin-3-glucoside (C3G) has been known to be more bioavailable than cyanidin-3-rutinoside (C3R), the most abundant anthocyanin in black raspberry (Rubus occidentalis). The aim of this study was to enhance the bioavailability of anthocyanins in black raspberry by cleaving ʟ-rhamnose in C3R using crude enzyme extracts (CEEs) from Aspergillus usamii KCTC 6956, A. awamori KCTC 60380, A. niger KCCM 11724, A. oryzae KCCM 12698, and A. kawachii KCCM 32819. The enzyme activities of the CEEs were determined by a spectrophotometric method using ρ-nitrophenyl-rhamnopyranoside and ρ-nitrophenyl-glucopyranoside. The CEE from A. usamii had the highest α-ʟ-rhamnosidase activity with 2.73 U/ml at 60℃, followed by those from A. awamori and A. niger. When bioconversion of C3R to C3G in black raspberry was analyzed by HPLC-DAD, the CEEs from A. usamii and A. awamori hydrolyzed 95.7% and 95.6% of C3R to C3G, respectively, after 2 h incubation. The CEEs from A. kawachii and A. oryzae did not convert C3R to C3G in black raspberry.

이종이관능형(異種二官能形) 반응성 Blue 염료의 개발 (Development of Reactive Blue Dyestuffs with Bi-functional Reactivity)

  • 김운태;박제영;김병무;남원우;손병청
    • 한국응용과학기술학회지
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    • 제13권2호
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    • pp.21-28
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    • 1996
  • Diazotization of STA synthesized by the indirect diazotization method. The effect of catalyst and agitation (rpm) about STA and H-acid reaction were examined and the optimum conditions were investigated experimentally. The yields and characteristics of $1^{.st}$ coupling and diazotization synthesis were identified by HPLC and FT-IR analysis. $1^{.st}$ condensation of CNC and mPDSA were synthesized at $5^{\circ}C$ and pH=6.5. The conditions of alkaly coupling of H-acid were synthesized at $5^{\circ}C$ and pH=8. The condensation of products was identified by U. V. analysis. From this results, It was obtained to reactive dyestuffs of bi-functional reactivity with high fastness and high adsorption.

Metabolic Engineering of Escherichia coli for the Biological Synthesis of 7-O-Xylosyl Naringenin

  • Simkhada, Dinesh;Kim, EuiMin;Lee, Hei Chan;Sohng, Jae Kyung
    • Molecules and Cells
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    • 제28권4호
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    • pp.397-401
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    • 2009
  • Flavonoids are a group of polyphenolic compounds that have been recognized as important due to their physiological and pharmacological roles and their health benefits. Glycosylation of flavonoids has a wide range of effects on flavonoid solubility, stability, and bioavailability. We previously generated the E. coli BL21 (DE3) ${\Delta}pgi$ host by deleting the glucose-phosphate isomerase (Pgi) gene in E. coli BL21 (DE3). This host was further engineered for whole-cell biotransformation by integration of galU from E. coli K12, and expression of calS8 (UDP-glucose dehydrogenase) and calS9 (UDP-glucuronic acid decarboxylase) from Micromonospora echinospora spp. calichensis and arGt-4 (7-O-glycosyltransferase) from Arabidopsis thaliana to form E. coli (US89Gt-4), which is expected to produce glycosylated flavonoids. To test the designed system, the engineered host was fed with naringenin as a substrate, and naringenin 7-O-xyloside, a glycosylated naringenin product, was detected. Product was verified by HPLC-LC/MS and ESI-MS/MS analyses. The reconstructed host can be applied for the production of various classes of glycosylated flavonoids.

Parameter Estimation of Perillyl Alcohol in RP-HPLC by Moment Analysis

  • Row Kyung Ho;Lee Chong Ho;Kang Ji Hoon
    • Biotechnology and Bioprocess Engineering:BBE
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    • 제7권1호
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    • pp.16-20
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    • 2002
  • Parameter estimations were made for the reversed-phase adsorption of perillyl alcohol (POH), a potent anti-cancer agent, on octadecylsilyl-silica gel (ODS). The average particle diameter of ODS was about $15\;{\mu}m$, and the particles were packed in the column $(3.9\;\times\;300mm)$. The mobile phase used was a mixture of acetonitrile and water, in which the acetonitrile ranged between 50 and $70\;(v/v\;\%)$. The first absolute moment and the second central moment were determined from the chromatographic elution curves by moment analysis. Experiments were carried out using POH solutions within the linear adsorption range. The fluid-to-particle mass transfer coefficient was estimated using the Wilson-Geankoplis equation. The axial dispersion coefficient and the intra particle diffusivity were determined from the slope and intercept of a plot of H vs $1/u_0$, respectively. The contributions of each mass-transfer step were axial dispersion, fluid-to-particle mass transfer, and intraparticle diffusion.

Pyrene으로 오염된 EPA토양의 열적처리조건에 따른 오염물질 제거 특성 연구 (Study on Plrene Removal Characteristic From An Artificially Contaminated EPA Synthetic Soil Matrix With Varying Heat Treatment Conditions)

  • 김영규;양고수
    • 한국토양환경학회지
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    • 제5권2호
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    • pp.55-66
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    • 2000
  • 본 실험에 사용된 토양으로는 U. S EPA Synthetic Soil Matrix를 선택하였고, 오염된 토양을 만들기 위하여 건조 토양의 무게 백분율로 4.79%에 해당하는 양만큼의 Pyrene을 Dichlomethane에 녹여 고체상태인 Pyrene을 토양에 오염시켰다. 오염된 시료(50$\pm$0.1mg)를 전기적으로 열적처리하는 열반응기는 외경이 20cm, 높이가 30cm인 실린더 형태로서 Pyrex재질로 제작하고 윗부분과 아래 부분은 알루미늄 플랜지로 밀폐시켰다. 내부에는 stainless steel판(3.5cm$\times$13cm$\times$0.00254m, 3.5cm$\times$13cm$\times$0.00254cm, 302 stainless steel shim)과 두개의 전극봉으로 구성되었다. 각각의 토양을 열적처리하기 위한 조건은 최고온도가 45$0^{\circ}C$에 가온율이 $1130^{\circ}C$/s인 경우, 최고온도 $760^{\circ}C$에 가온율이 $950^{\circ}C$/s인 경우 그리고 최고온도가 $977^{\circ}C$ 에 가온율이 $977^{\circ}C$ /s인 경우를 선정하였다. 토양을 열처리한 후 알루미늄 foil funnel과 glass filter paper에서 타르를 포집하였으며, 타르와 잔류토양 시료내의 물질은 Dichlorornethane을 이용하여 추출하였고 이를 HPLC로 측정하였다. 실험결과, 최고온도가 $455^{\circ}C$ 인 경우 Tar Filter에 포집된 Tar색은 White이었으며 대부분의 성분이 Pyrene으로 나타났다. 최고온도가 $760^{\circ}C$ 인 경우는 Tar의 색이 Pink brown이었으며, 약간의 그을음덩어리(Cluster)가 전극관과 Tar Filter의 표면에서 발견되었다. $977^{\circ}C$ 의 경우 Tar색은 Dark brown이었다. Tar성분을 추출하여 HPLC로 분석한 결과, 6개의 Bipyrene의 isomer가 발견되었으며 그 중에서 bacterial cell이나 human cell에 돌연변이를 유발할 수 있는 매우 유해한 성분으로 분류되는 Cyclopenta(cd) pyrene(CPEP)는 온도 조건 $455^{\circ}C$ 에서는 검출되지 않지만 $760^{\circ}C$$977^{\circ}C$ 에서는 검출되는 특징을 보였다. 그밖에 미미한 양이지만 C14H10과 C15H10이 검출되었다.

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기질의 담체화를 이용한 키토산올리고당의 생산 (The Production of Chitosanoligosaccharides Using Chitosan Bead)

  • 김승모
    • KSBB Journal
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    • 제15권4호
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    • pp.352-358
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    • 2000
  • 키토산의 가수분해 산물인 키토산 올리고당의 효율적이고 단순화된 분리를 위하여 기질인 키토산을 담체화 하여 효소를 이용한 올리고당의 생산에 있어서 product의 새로운 분리법에 대한 가능성을 연구하였다. 기질로 사용한 chitosan bead 를 W/O emulsion 상분리법을 이용한 유기상의 방법과 키토산 용액을 알칼리 용액에 적하하는 수상의 방법으로 제조하였는데 bead가 효소와 접촉하는 표면적을 최대로 하기 위하여 구형으로 제조하였다. 이때 유기상 bead의 지름은 $200{\mu}m$였고, 수상 bead의 경우 $4000{\mu}m$, $100{\mu}m$, $30{\mu}m$였다. pH 와 온도, 효소의 양을 변화시켜 가면서 반응 시스템에서 최 적의 유기상 bead의 가수분해 조건을 조사한 결과 pH 6.0, 온도는 $50^{\circ}C$, 그리고 효소의 양은 40U이 최적임을 알 수 있 었다. 유기상 bead의 최적 가수분해 조건을 수상 bead에 적 용시켜 반응성을 살펴보았는데 반응에 사용된 수상 bead의 표면적이 유기상 bead에 비하여 낮음에도 불구하고 거의 동 일한 분해도를 나타내었다. 수상 bead의 경우 크기가 작을수록 높은 분해도를 나타냈으며, 각 bead를 사용하였을 때 생산된 최종 산물의 올리고당의 조성을 HPLC와 GPC로 분석하였는데, 유기상 bead로부터 생산된 올리고당의 조성은 주 로 2-4당이었으며, 수상 bead로부터 생산된 올리고당의 조성은 2-5당이었고, 평균 분자량은 M.W. 540과 M.W. 380이었다.

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굴 효소 가수분해물의 angiotensin converting enzyme 저해작용 (Angiotensin-Converting Enzyme Inhibitory Activity of Enzymatic Hydrolysates of Crassostrea gigas (Oyster))

  • 도형주;박혜진;김옥주;김안드레;최영준;정세영;하종명
    • 생명과학회지
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    • 제22권2호
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    • pp.220-225
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    • 2012
  • 굴 효소 가수분해물은 굴을 alcalase, protamex, neutrase, flavourzyme, pepsin으로 각각 처리하였고, 이들의 ACE 저해활성을 측정하였다. ACE 저해활성은 가수분해 시간에 따라 증가 또는 감소하였으며, 그 중 10시간 이상 가수분해 처리한 PEH에서 가장 높은 ACE 저해활성을 나타내었다. PEH 가수분해물을 한외여과(30, 10 kDa) 하여 낮은 분자량의 분획물을 얻었다. 30 kDa와 10 kDa 이하 분자량 별 ACE 저해활성은 각각 $69.18{\pm}0.75$, $83.71{\pm}1.12$의 활성을 나타내었다. 이 결과 10 kDa 이하의 시료로부터 HPLC column (watchers 120 ODS-AP $250{\times}4.6$ ($5{\mu}m$))을 이용하여 각각의 활성 분획을 분취하여 얻은 6분획의 ACE 저해 활성은 29.56~85.85% 로 나타났다. 그 중 저해활성이 가장 높게 나타나는 B fraction의 아미노산 서열을 확인한 결과 Leu-Gln-Pro 임을 확인하였고, peptide합성하여 얻은 저해활성 농도($IC_{50}$)가 1.18 uM임을 확인하였다. 이러한 결과는 PEH를 이용하여 건강 기능성 식품의 개발에 도움이 될 수 있을 것으로 생각된다.

High Serum Level of Retinol and α-Tocopherol Affords Protection Against Oral Cancer in a Multiethnic Population

  • Athirajan, Vimmitra;Razak, Ishak Abdul;Thurairajah, Nalina;Ghani, Wan Maria Nabillah;Ching, Helen-Ng Lee;Yang, Yi-Hsin;Peng, Karen-Ng Lee;Rahman, Zainal Ariff Abdul;Mustafa, Wan Mahadzir Wan;Abraham, Mannil Thomas;Kiong, Tay Keng;Mun, Yuen Kar;Jalil, Norma;Zain, Rosnah Binti
    • Asian Pacific Journal of Cancer Prevention
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    • 제15권19호
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    • pp.8183-8189
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    • 2014
  • Background: A comparative cross-sectional study involving oral cancer patients and healthy individuals was designed to investigate associations between retinol, ${\alpha}$-tocopherol and ${\beta}$-carotene with the risk of oral cancer. Materials and Methods: This study included a total of 240 matched cases and controls where subjects were selected from the Malaysian Oral Cancer Database and Tissue Bank System (MOCDTBS). Retinol, ${\alpha}$-tocopherol and ${\beta}$-carotene levels and intake were examined by high-performance liquid chromatography (HPLC) and food frequency questionnaire (FFQ) respectively. Results: It was found that results from the two methods applied did not correlate, so that further analysis was done using the HPLC method utilising blood serum. Serum levels of retinol and ${\alpha}$-tocopherol among cases ($0.177{\pm}0.081$, $1.649{\pm}1.670{\mu}g/ml$) were significantly lower than in controls ($0.264{\pm}0.137$, $3.225{\pm}2.054{\mu}g/ml$) (p<0.005). Although serum level of ${\beta}$-carotene among cases ($0.106{\pm}0.159{\mu}g/ml$) were lower compared to controls ($0.134{\pm}0.131{\mu}g/ml$), statistical significance was not observed. Logistic regression analysis showed that high serum level of retinol (OR=0.501, 95% CI=0.254-0.992, p<0.05) and ${\alpha}$-tocopherol (OR=0.184, 95% CI=0.091-0.370, p<0.05) was significantly related to lower risk of oral cancer, whereas no relationship was observed between ${\beta}$-carotene and oral cancer risk. Conclusions: High serum levels of retinol and ${\alpha}$-tocopherol confer protection against oral cancer risk.

약용식물(藥用植物)(음나무, 오가피)로부터 생리활성물질(生理活性物質) 검정(檢定) (Identification of Biologically Active Substances from Medicinal Plants)

  • 이인중;김길웅
    • 한국잡초학회지
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    • 제7권3호
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    • pp.289-298
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    • 1987
  • 약용식물(藥用植物)을 대상(對象)으로 생리활성(生理活性)을 지닌 phenolic산(酸)과 지방산(脂肪酸) 및 유기산(有機酸) 등(等)을 조사(調査)한 결과(結果)는 다음과 같다. 음나무와 오가피의 EtOH 추출물(抽出物)은 상치의 발아(發芽)를 강하게 억제(抑制)하는 생리활성물질(生理活性物質)을 함유(含有)하고 있었다. 음나무와 오가피로부터 GLC에 의해 동정(同定)된 phenolic 산(酸)은 protocatechuic 산(酸) 외(外) 11종(種)이었으며 총(總) phenolic 산(酸)의 함량(含量)은 음나무가 1.7971mg/g, 오가피가 0.9567mg/g 이었다. HPLC로 검정(檢定)된 polyphenols은 ncochlorogenic, chlorogenic, scopoletin, rutin, kaempferolglycoside 였으며 chlorogenic 산(酸)의 함량(含量)이 음나무 23.7ppm, 오가피 13.0ppm으로 가장 많았다. 음나무는 지방산(脂肪酸)이 5.26mg/g, 유기산(有機酸)이 27.69mg/g, 오가피는 지방산(脂肪酸)이 3.22mg/g, 유기산(有機酸)이 9.80mg/g 함유(含有)되어 있었으며 음나무가 오가피보다 많은 지방산(脂肪酸)과 유기산(有機酸)을 함유(含有)하고 있었다. 지방산(脂肪酸) 가운데는 linoleic 산(酸)이 전체(全體)의 50% 이상(以上)을, 유기산(有機酸) 가운데는 oxalic 산(酸)이 80% 이상(以上)의 비율(比率)로 함유(含有)되어 있었다.

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