• Tuberculosis and Respiratory Diseases
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• 제50권1호
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• pp.67-75
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• 2001

배경 : 대표적인 종양억제유전자인 p53 및 p16은 세포주기 조절 및 자연괴멸 유도에서 서로 다른 역할을 하고 있으며 폐암에서는 동시에 비활성화 되어 있는 경우가 흔하다. 이 종양억제유전자들 동시에 이입시 서로 상호작용을 통해 효과가 증진되리라 기대되고 있다. 방법 : 본 연구에서는 p53 및 p16을 아데노바이러스 벡터를 이용하여 폐암세포주에 동시에 이입하여 그 상호작용을 관찰하였다. 복합투여시 세포성장곡선을 분석하여 isobologra을 이용한 상호작용을 검증하고 세포주기의 변화 및 체외종양형성능의 변화도 관찰하였다. 결과 : Isobologram을 이용한 분석에서 adeno-virus-p53와 adenovirus-p16의 복합투여는 NCI H358에서는 상승적인 성장억제를, NCI H23에서는 부가적인 성장 억제를 보였다. 유세포분석기를 이용한 세포주기의 분석 및 체외종양형성능 검사에서도 p53 및 p16의 복합투여시 단독 투여보다 강한 억제효과를 보였다. 결론 : 이러한 상승적인 p53 및 p16의 상호작용은 이 복합요법이 새로운 유전자치료법으로 발전할 수 있는 가능성을 보였다.

• 대한한방내과학회지
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• 제29권1호
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• pp.130-148
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• 2008

Objective : This study was designed to investigate the effect of the water extract of Gamisamgibopae-tang(GMSGBPT), an oriental herbal formulation, on the growth of NCI-H460 and A549 human non-small-cell lung cancer cell lines. Methods : Cytotoxicity and cell morphology were evaluated by MTT assay and inverted microscope, respectively. Apoptosis was detected using agarose gel electrophoresis and flow cytometer. The expression levels of mRNAs and proteins of target genes were determined by RT-PCR and western blot analyses, respectively Result and Conclusion : We found that exposure of A549 cells to GMSGBPT resulted in the growth inhibition in a dose-dependent manner as measured by MTT assay, but GMSGBPTdid not affect the growth of NCI-H460 cells. The anti-proliferative effect of GMSGBPT treatment in A549 cells was associated with morphological changes, formation of apoptotic bodies and DNA fragmentation, and flow cytometry analysis confirmed that GMSGBPT treatment increased the populations of apoptotic-sub G1 phase. Growth inhibition and apoptotic cell death by GMSGBPT were connected with a up-regulation of cyclin-dependent kinase inhibitor p21 (WAF1/CIP1) mRNA and protein in a tumor suppressor p53-independent fashion. However GMSGBPT treatment did not affect other growth regulation-related genes such as early growth response-1 (Egr-1), nonsteroidal anti-inflammatory drug (NSAID)-activated gene-1 (NAG-1), inducible nitric oxide synthase (iNOS), cyclooxygenases (COXs), telomere-regulatory factors in A549 orNCI-H460 cells. Taken together, these findings partially provide novel insights into the possible molecular mechanism of the anti-cancer activity of GMSGBPT.

• Asian Pacific Journal of Cancer Prevention
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• 제15권19호
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• pp.8377-8382
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• 2014

Background: Oral squamous cell carcinoma (OSCC) is the sixth most common malignancy worldwide. Cancer development and progression require inactivation of tumor suppressor genes and activation of proto-oncogenes. The well recognized mechanism of action demonstrated for chemotherapeutic agents is induction of apoptosis via reactivation of p53. In this context, we evaluate the efficacy of IV and oral routes of our novel PH and temperature sensitive doxorubicin-methotrexate-loaded nanoparticles (DOX-MTX NP) in affecting p53 profile in an OSCC rat model. Methods: In this study, 120 male rats were divided into 8 groups of 15 animals each. The new formulated DOX-MTX NP and free doxorubicin were IV and orally given to rats with 4-nitroquinoline-1-oxide induced OSCC. Results: Results showed that both DOX and DOX-MTX-NP caused significant increase in mRNA levels of P53 compared to the untreated group (p<0.000). With both DOX and DOX-MTX NP, the IV mode was more effective than the oral (gavage) route (p<0.000). Surprisingly, in oral mode, p53 mRNA was not affected in DOX treated groups (p>0.05), Nonetheless, both IV and oral administration of MTX-DOX NP showed superior activity (~3 fold) over free DOX in reactivation of p53 in OSCC (p<0.000). The effectiveness of oral route in group treated with nanodrug accounts for the enhanced bioavailability of nanoparticulated DOX-MTX compared to free DOX. Moreover, in treated groups, tumor stage was markedly related to the amount of p53 mRNA (p<0.05). Conclusion: Both oral and IV application of our novel nanodrug possesses superior activity over free DOX-in up-regulation of p53 in a OSCC model and this increase in p53 level associated with less aggressive tumors in our study. Although, impressive results obtained with IV form of nanodrug (-21 fold increase in p53 mRNA level) but both forms of nanodrug are effective in OSCC, with less toxicity normal cells.

• Asian Pacific Journal of Cancer Prevention
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• 제14권10호
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• pp.5941-5948
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• 2013

Tumor response to antineoplastic drugs is not always predictable. This is also true for bladder carcinoma, a highly recurrent neoplasia. Currently, the combination of cisplatin and gemcitabine is well accepted as a standard protocol for treating bladder carcinoma. However, in some cases, this treatment protocol causes harmful side effects. Therefore, we investigated the roles of the genes TP53, RASSF1A (a tumor suppressor gene) and hMLH1 (a gene involved in the mismatch repair pathway) in cell susceptibility to cisplatin/gemcitabine treatment. Two bladder transitional carcinoma cell (TCC) lines, RT4 (wild-type TP53) and 5637 (mutated TP53), were used in this study. First, we evaluated whether the genotoxic potential of cisplatin/gemcitabine was dependent on TP53 status. Then, we evaluated whether the two antineoplastic drugs modulated RASSF1A and hMLH1 expression in the two cell lines. Increased DNA damage was observed in both cell lines after treatment with cisplatin or gemcitabine and with the two drugs simultaneously, as depicted by the comet assay. A lack of RASSF1A expression and hypermethylation of its promoter were observed before and after treatment in both cell lines. On the other hand, hMLH1 downregulation, unrelated to methylation status, was observed in RT4 cells after treatment with cisplatin or with cisplatin and gemcitabine simultaneously (wild-type TP53); in 5637 cells, hMLH1 was upregulated only after treatment with gemcitabine. In conclusion, the three treatment protocols were genotoxic, independent of TP53 status. However, cisplatin was the most effective, causing the highest level of DNA damage in both wild-type and mutated TP53 cells. Gemcitabine was the least genotoxic agent in both cell lines. Furthermore, no relationship was observed between the amount of DNA damage and the level of hMLH1 and RASSF1A expression. Therefore, other alternative pathways might be involved in cisplatin and gemcitabine genotoxicity in these two bladder cancer cell lines.

• 대한두경부종양학회지
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• 제19권2호
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• pp.148-157
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• 2003

Background and Objectives: Individual genetic susceptibilities to chemical carcinogens have been recognized as a major important host factors in human cancers. The cytochrome P450 family (CYPs) and glutathione S-transferase(GST) have been reported to be associated with risks to the smoking-related human cancers. Inactivation of tumor suppressor genes like p53 playa key role in tumor progression. The purpose of this study is to demonstrate an association between p53 overexpression and the prevalence of the genetic polymorphisms of CYP1A1 and GSTs in Korean head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC). Materials and Methods: The polymorphisms of CYPIA1 and GSTs were analyzed by PCR and PCR-RFLP in 98 Korean head and neck squamous cell carcinoma patients. The expression of p53 was analyzed by immunohistochemistry with anti-p53 Ab (DO7). Results: Overexpression of p53 detected in 45.9% of HNSCC. The odds ratio for p53 overexpression in GSTM1(-), GSTT1(-), GSTP1(val/val) and CYP1A1(val/val) were 1.53, 1.83, 1.17 and 1.47, respectively. Among the combined genotypes, the odds ratio of the CYP1A1 val/val, GSTM1 (-), CYP1A1 val/val, GSTT1(-), and CYP1A1 val/val, GSTT1(-) were 2.0, 2.34 and 4.68, respectively. Conclusion: Based on our results, it might be suggested that p53 overexpression is slightly increased in GSTM1(-), GSTT1(-), GSTP1 val/val, CYP1A1 val/val genotypes. The further study is needed to evaluate the relationship and mechanism between the p53 overexpression and the specific CYP1A1 and GSTs genotypes.

• 생명과학회지
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• 제34권10호
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• pp.744-754
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• 2024

암세포는 통제되지 않는 세포분열 과정 중, 생체 에너지와 생합성 중간체를 제공하기 위하여 정상세포와는 현저히 다른 독특한 대사과정을 나타낸다. 포도당으로부터 생성된 pyruvate의 대부분을 lactate로 전환하여 비효율적으로 ATP 생성하는 호기적 해당작용(Warburg effect)으로 glutamine 대사를 통해 부족한 에너지를 해결하고 있다. Glutamine은 혈액과 근육에서 가장 풍부한 아미노산으로서, glutaminolysis를 통해 TCA cycle을 통한 생체 에너지, 지질과 대사산물의 합성뿐만 아니라 아미노산과 뉴클레오티드 합성에 사용된다. 암세포가 정상세포보다 glutamine에 의존하여 TCA cycle 대사산물의 절반 이상이 glutamine에서 파생되는 glutamine 중독 현상을 나타낸다. 종양유전자 c-Myc는 glutamine 대사에 관련된 glutamine 대사 유전자의 발현을 조절하고, glutamine의 흡수를 촉진한다. Glutaminase가 종양을 유발하거나 종양을 억제하는지는 isoenzymes의 관점에서 논란의 여지가 있으나 GLS1은 발암 가능성이 더 높아 유망한 치료 대상인 반면에 GLS2는 종양 저해제로서 작용하는 것으로 알려졌다. 암 대사체의 복잡하고 정교한 네트워크에 기반한 4세대 대사항암제는 암세포의 에너지 대사를 직접 제어하여 영양 공급을 차단해 부작용 없이 항암효과를 극대화하는 요법으로 2010년대 중반 이후 연구가 활발히 진행되고 있다. Glutaminolysis에서 glutaminase는 초기 단계를 촉매하는 효소로서 암 대사 및 종양 진행에 매우 중요하여 glutaminase 효소를 약물 표적화하는 새로운 기전의 항암제 개발이 유망한 전략으로 떠오르고 있다.

• 생명과학회지
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• 제18권8호
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• pp.1132-1139
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• 2008

CpG island는 유전자의 발현 기작과 많은 관련이 있다. 포유동물 유전자의 약 $30{\sim}60$% 정도의 프로모터와 엑손부위에 CpG island가 존재 한다. 최근의 연구 결과에 따르면 CpG island의 과메틸화는 주요 암 억제유전자들을 불활성화 시켜 암을 일으키는 주요 요인이 되는 것으로 밝혀졌다. CpG island의 과메틸화는 거의 모든 암 종류에서 발견되고 있다. 따라서 CpG island를 검색하는 프로그램은 매우 중요한 의미를 갖는다. 그래서 D. Takai 와 P. A. Jones 등이 2002년 검증한 CpG island 정의 기준을 이용하여 윈도우 기반의 소프트웨어 프로그램인 CpGi를 개발하였다. CpGi는 Visual C++ 6.0로 구현하였으며, 입력서열 양식은 FASTA 포맷을 허용하도록 구성하였다. CpGi의 검색 성능을 평가하기 위해 2개의 인간 Contig, 즉, AP00524 (22번 염색체)와 NT_029490.3 (21번 염색체) 등을 대상으로 기존의 다른 CpG island 검색 프로그램인 Emboss-CpGPlot 및 CpG Island Searcher 등과 검색결과를 비교 분석하였다. CpGi에 의한 검색 결과는 다른 두 프로그램에 비해 같거나 오히려 보다 정확한 검색 결과를 보여주었다. CpGi는 사용자 친화적인 윈도우 인터페이스로 구현되어 있어 사용자가 프로그램을 구동하고 이용하기 매우 쉽고, 분석결과에 대한 이해도 용이하다. 본 프로그램은 사용자가 지정한 파라미터 값들(%GC, Obs (CpG)/Exp (CpG), 분석 윈도우 크기, 스텝크기, Gap 허용치, #CG)에 의해 CpG island의 위치를 결정하고, G+C%와 CpG island의 위치를 시각적으로 보여준다. 결과적으로, CpGi는 CpG island 관련 실험 연구자들뿐만 아니라 대용량 서열 분석 및 주석 작업을 위해 매우 유용한 도구로 활용될 수 있을 것이다.

• Tuberculosis and Respiratory Diseases
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• 제57권3호
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• pp.265-272
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• 2004

연구배경 : RASSF1A는 종양억제유전자 중의 하나로 폐암을 비롯한 다양한 암에서 프로모터지역의 메틸화에 의해서 발현이 억제된다. 저자들은 편평상피폐암 환자에서 RASSF1A 메틸화가 임상 및 병리소견과 어떠한 연관성을 갖는지 조사해 보고자 본 연구를 시행하였다. 방 법 : 81예의 편평상피폐암과 정상 폐조직에서 RASSF1A 메틸화를 methylation specific PCR(MSP) 방법과 염기서열 분석방법에 의해서 실험하였고, 임상 및 병리소견과의 연관성을 통계학적으로 분석하였다. 결 과 : 편평상피폐암에서 RASSF1A메틸화가 37.0%(30/81)에서 관찰되었다. RASSF1A의 메틸화는 세포분화도와 연관이 있었으며(p=0.0097), 생존율과도 연관이 있을 가능성이 있었다(p=0.0635). 그러나, RASSF1A 메틸화와 TNM 병기, 재발 유무, 임파절전이 유무, 흡연양과는 연관이 없었다. 결 론 : RASSF1A 메틸화가 편평상피폐암의 나쁜 예후와 관계 있을 것으로 생각되며, 향후 더 많은 예를 대상으로 한 연구가 필요할 것으로 사료된다.

• 생명과학회지
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• 제28권5호
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• pp.615-620
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• 2018

EGCG는 녹차의 카테킨 중의 하나로서 항산화, 항염증 그리고 항암 활성 등 다양한 생리활성을 가지고 있는 물질로 알려져 있다. 본 연구에서는 EGCG를 처리한 HCT116 세포와 p53-null HCT116 세포에서 oligo DNA microarray 실험을 통하여 유전자 발현 변화를 분석하였다. Microarray 실험에서 EGCG를 처리한 HCT116 세포주에서 증가된 유전자 4개(ATF3, CDKN1A, DDIT3, NAG-1)를 선별하여, p53-null HCT116에서의 데이터와 비교하였다. NAG-1을 제외한 3개의 유전자는 p53의 상태와 관계없이 발현이 증가하였고, p53-null HCT116 세포주에서는 EGCG에 의해 NAG-1의 발현이 증가되지 않았다. EGCG의 처리에 의해 ATF3와 NAG-1의 유전자와 단백질의 발현을 확인한 경우 동일한 결과를 보여주었다. 또한, 파이토케미칼 genistein과 resveratrol을 처리한 후 ATF3와 NAG-1의 발현을 연구한 결과 genistein은 p53의 상태와 관계없이 ATF3 발현에 영향을 주지 못하는 반면, NAG-1 단백질은 p53 존재 하에서만 발현이 증가되었다. 이에 반해 resveratrol은 p53의 상태와는 관계없이 ATF3와 NAG-1 단백질의 발현을 증가시켰다. 따라서, 항암 활성을 가진 3 종류의 파이토케미칼이 각각 다른 기전으로 항암 유전자를 발현시키는 것으로 생각된다. 종합적으로 본 연구결과는 파이토케미칼 EGCG, genistein, resveratrol에 의해 매개되는 항암 활성의 기전을 이해하는데 도움을 줄 것으로 생각된다.

• Asian Pacific Journal of Cancer Prevention
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• 제15권6호
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• pp.2699-2705
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• 2014

This study was to undertaken to investigate the impacts of AhR, CYP1A1, GSTM1 genetic polymorphisms on the R273G mutation in exon 8 of the tumor suppressor p53 gene (TP53) among polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs) exposed to coke-oven workers. One hundred thirteen workers exposed to PAH and 82 control workers were recruited. We genotyped for polymorphisms in the AhR, CYP1A1, GSTM1, and TP53 R273G mutation in blood by PCR methods, and determined the levels of 1-hydroxypyrene as PAH exposure marker in urine using the high pressure liquid chromatography assay. We found that the distribution of alcohol users and the urinary excretion of 1-OHP in the exposed workers were significantly higher than that of the control workers (p=0.004, p<0.001, respectively). Significant differences were observed in the p53 genotype distributions of smoking subjects (p=0.01, 95%CI: 1.23-6.01) and PAH exposure (p=0.008, 95%CI: 1.24-4.48), respectively. Further, significant differences were observed in the p53 exon 8 mutations for the genetic polymorphisms of Lys/Arg for AhR (p=0.02, 95%CI: 0.70-15.86), Val/Val for CYP1A1 (p=0.04, 95%CI: 0.98-19.09) and null for GSTM1 (p=0.02, 95%CI: 1.19-6.26), respectively. Our findings indicated that polymorphisms of PAH metabolic genes, such as AhR, CYP1A1, GSTM1 polymorphisms may interact with p53 genetic variants and may contribute to PAH related cancers.