PSTVd 를 접종시킨 감자의 Superior 품종으로부터 PSTVd RNA를 분리하여 역전사효소와 PSTVd genome 중 356 uncleotides를 증폭할 수 있는 PSTVd 특이적 primer 쌍을 사용하여 RT-PCR를 수행한 결과 356 nuclcotides의 DNA 절편이 증폭되었고 이 절편을 sequencing인 결과 PSTVd 의 유전자임을 확인하였다. 감염된 잎과 괴경에수 모두 RT-PCR 기법을 이용한 PSTVd 의 검정이 가능하였고 특히 RT 반응시 downstream primer만을 이용할 때보다 downstream과 upstream primer를 동시에 사용할 때가 PSTVd 의 검정에 더 효과적이었다.
Protopasts were isolated from cultured cells of potato (Solanum tuberosum L.) tuber tissue. The ability of callus formation from the culture cells was higher in cultivars Dejima and Superior than in Shimabara and Irish Cobbler on Lam's medium. Therefore, the former was used as sources for protoplast isolation. Friable calli were transferred to liquid media and cells in exponential phase were used for protoplast isolation. In both of Dejima and Superior, the yield of protoplasts was high in the enzyme solution of 2% Onozuka cellulase and 1% macerozyme. Also, viability of isolated protoplasts was very good. Thus, it seems that these protoplasts would be applicable to various aims of research.
Smitha Devi, Padmavathi Amma Somasekharan Nair;Hemanthakumar, Achuthan Sudarsanan;Preetha, Thankappan Suvarna
Journal of Plant Biotechnology
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제49권3호
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pp.230-239
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2022
Holostemma annulare (Family Asclepiadaceae) is an invaluable vulnerable medicinal plant; the root tubers are used in Ayurveda medicine and by folk healers to treat various ailments. In this study, Schenk and Hildebrandt medium fortified with the cytokinins 6-benzyl adenine, kinetin, and auxins, including indole 3-butyric acid, indole 3-acetic acid, α-naphthaleneacetic acid, and 2,4-dichlorophenoxyacetic acid, were checked for their efficiency on root tuber induction from different explants. Adventitious root tubers were more successfully induced from in vitro leaf segments and shoots when cultured in Schenk and Hildebrandt medium supplemented with 0.5 mg/l of α-naphthaleneacetic acid. In addition, preliminary phytochemical analysis of in vitro root tubers and identification of different secondary metabolites were conducted. Thin layer chromatography and high performance thin layer chromatography analysis of the crude methanolic extracts of the in vitro root tuber identified the presence of lupeol, a bioactive triterpene. Adventitious root tuber induction offers a novel method for the in vitro production of bioactive metabolites that can be scaled up by bioreactors, thus ensuring the conservation and sustainable utilization of H. annulare. The study warrants further scale-up production and pharmacological investigation that can be extended for pharmaceutical needs.
유색칼라 조직배양묘의 순화재배 용토선발실험에서 초기생육 출엽율은 큰 차이가 없었으나 생육 6개월 후의 괴경비대는 모래(50%)+Peatmoss(50%) 처리에서 가장 좋았다. 순화재배 시기별 순화율은 8월 20일 정식에서 64%~70.4%로 가장 저조하였고, 3월 20과 4월 20일은 90%이상의 순화율을 나타냈다. 괴경비대은 3월 20일 정식에서 구중이 가장 무거웠다. 순화 재배시 배양묘의 재식거리 10×10cm에서 괴경중이 가장 양호했다.
This study was conducted to obtain the basic breeding information of Colocasia esculenta Schott. Effect of supplemental plant growth regulators and genotype difference were investigated on dormant bud tissue for proliferation. The plant regeneration ratio, plant height and root length were the best upon mixed treatment of 0.8mg/L IAA and 2.0mg/L zeatin. Both leaf weight and root weight were heavy upon culture in a dark condition. The leaf and root weights were heaviest in 6Pie sucrose concentrations. In several collected area the heaviest one was Binnangxin and then in the order of Suwon, Wanju and Puan. Genotype differences of tuber diameter and tuber weight were found in Suwon. Tuber weight was found in the order of Suwon (862mg) >Wanju(723mg) >Puan(649mg) >Binnangxin (424mg).
여러 계통의 PVY 외피단백질 유전자간에 상동성이 높은 부위에 위치한 primer 쌍을 이용하여 RT-PCR 방법으로 PVY 검정법을 개발하였는데 여러 line의 대서품종으로부터 764 bp의 PCR 산물이 합성되었고 이 절편을 sequencing한 결가 PVY의 유전자임을 확인하였다. 싹과 괴경 조직에서 RT-PCR에 의한 PVY의 검정의 민감도는 ELISA 방법보다 약 1,000배정도 높았다.
Two potato (Solanum tuberosum L.) cultivars were transformed by Agrobacterium tumefaciens harboring cauliflower mosaic virus (CaMV) 35S promoter and $\beta$-glucuronidase (GUS) gene. Expression patterns of the CaMV 35S promoter according to tissue types and developmental stages, and genetic stability of GUS gene were investigated in the clonal progenies of transgenic potatoes. Kanamycin-resistant shoot emerged from tuber disc after 4 weeks of culture, and root was induced 6 weeks after culture on the selection medium. Shooting frequency of cvs. Superior and Dejima were 43% and 27%, respectively. Mature transformants and their clonal progenies showed no phenotypical abnormality. GUS activity was expressed primarily at parenchymatous cells of phloem tissue around the vascular cambium in the stem and root, and higher activity was found at the apical meristem of shoot, root and adventious shoot bud. GUS activity was higher at tubers of young explants than at stored tubers. These facts indicate that expression level of the CaMV 35S promoter differed according to tissue types and developmental stages of the organs. The GUS gene was stably inherited to each clonal progeny and normally expressed.
In Japan, propagation of cyclamen is mainly from seedlings. However, seeds are expensive and germination is slow and non..uniform. Therefore, to achieve genetically uniform propagation, multiplication must be vegetative. The rooted tuberous stems without shoots as sources of explants were cultured on the media containing BA and sucrose. After 30 days cultivation, tuberous roots were produced from the root ends attached to a tuberous stem and its capability was dependent on the type of media. The highest percentage of tuberous root formation was observed in Culture on the medium of 1/3 MS containing 0.05mgL$^{-1}$ NAA, 0.5mg L$^{-1}$ BA and 5% sucrose. Growth rates of the tuberous roots were greatly influenced by the cutting positions of a root in explants. The highest growth of was observed if small amount of root end was cut at initiation of tissue culture.
시클라멘의 급속증식체계를 확립하기 위하여 발아 후 자엽이 전개된 어린 식물체의 괴경, 자엽, 엽병 등의 절편을 분리하여 절편부위별로 캘러스 및 기관분화에 미치는 생장조절제의 종류와 농도에 따른 식물체의 생장반응을 조사하였다. 절편부위별 캘러스 형성 및 shoot분화에 있어서 auxin류 단용처리의 경우 괴경절편의 NAA처리구에서 절편으로부터 캘러스 없이 shoot가 직접 발생하여 가장 양호하였으며, 1개의 절편체에서 10개 이상의 다아체가 분화되었다. 자엽이나 엽병절편은 캘러스만 유도되었고 대부분 치상당시의 상태로 shoot 발생에 auxin류의 처리는 부적합하였다. Cytokinin류 단용처리는 1.0 mg/L TDZ처리구에서 괴경의 경우 100% shoot 분화율을 보였고, 자엽절편 역시 배양 40일경부터 다수의 shoot가 발생되어 양호하였다. NAA와 BA혼용처리는 0.5 mg/L NAA와 0.5 mg/L BA 혼용첨가된 배지에서 괴경. 자엽, 엽병절편 모두 shoot 분화가 양호하였으며, auxin류와 cytokinin 류 단용처리보다 NAA와 BA 혼용처리가 모들 절편에서 양호한 결과를 보였다. 뿌리발생을 유도하기 위해 NAA와 IBA 단용처리에 shoot를 배양한 결과 배양 15일경부터 0.5 mg/L IBA처리구에서 뿌리가 발생되기 시작하여 배양 30일 후에는 Pot이식이 가능할 정도로 뿌리가 발생되어 가장 양호한 결과를 보였다.
The cultivated potato as well as its tuber-bearing relatives are considered model plants for cell and tissue culture, and therefore for exploiting the genetic variation induced by in vitro culture. The association between molecular stability and tissue culture in different genetic backgrounds and ploidy levels has already been explored. However, it still remains to be ascertained whether somaclonal variation differs between callus-derived chromosome-doubled and undoubled regenerants. Our research aimed at investigating, through amplified fragment length polymorphism (AFLP) markers, the genetic changes in marker-banding patterns of diploid and tetraploid regenerants obtained from one clone each of Solanum bulbocastanum Dunal and S. cardiophyllum Lindl (both 2n = 2x = 24) and tetraploids from cultivated S. tuberosum L. (2n = 4x = 48). Pairwise comparisons between the banding patterns of regenerants and parents allowed detecting considerable changes associated to in vitro culture both at diploid and tetraploid level. The percentages of polymorphic bands between diploid and tetraploid regenerants were, respectively, 57 and 69% in S. bulbocastanum and 58 and 63% in S. cardiophyllum. On average, the frequencies of lost parental fragments in regenerants were significantly higher than novel bands both in S. bulbocastanum (48 vs. 22%) and S. tuberosum (36 vs. 18%) regenerants. By contrast, in S. cardiophyllum, a similar incidence of the two events was detected (32 vs. 29%). Our results revealed that structural changes after tissue culture process strongly affected the genome of the species studied, but diploid and tetraploids regenerated plants responded equally.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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