• 제목/요약/키워드: thin layer chromatography (TLC)

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Immunochemical Studies of Starfish Gangliosides: Production of Monoclonal Antibody against AG-2, the Major Ganglioside of Starfish Acanthaster planci, and Detecting Its Distribution in Tissues by TLC Immunostaining

  • Miyamoto, Tomofumi;Yamamoto, Atsushi;Sakai, Maki;Tanaka, Hiroyuki;Shoyama, Yukihiro;Higuchi, Ryuichi
    • 한국해양바이오학회지
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    • 제1권4호
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    • pp.298-304
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    • 2006
  • In this study, we establish a thin-layer chromatography (TLC) immunostaining method for detecting starfish gangliosides. A new monoclonal antibody (MAb) against AG-2, the major gangliosides molecular species of Acanthaster planci, was produced by fusing hybridoma with splenocytes immunized to liposomal AG-2. BALB/c male mice were injected with liposomal AG-2 antigen, and immunized. Their splenocytos were isolated and fused with hypoxanthine-aminopterine-thimidine (HAT)-sensitive mouse myeloma cells. Hybridomas producing MAb reactive to AG-2 were cloned using the limited dilution method. Established hybridomas were cultured in eRDF medium. Crude MAb produced from clone 8D4 was purified with a magnesium pyrophosphate column. Enzyme immunoassay and TLC immunostaining of AG-2 were performed using the purified MAb. Structurally related gangliosides did not cross-react with anti-AG-2 antibodies. The detection limit of TLC immunostaining was 50 ng of AG-2. The newly established immunostaining method was further developed for detecting AG-2 distribution and qualitative analysis in tissues and/or organs. Our results show that the majority of AG-2 is present in the stomach of male A. planci, while AG-2 is distributed not only in the stomach but also in the the pyloric caeca of female A. planci.

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Solvent Extraction과 Gel Chromatography를 이용한 Phenoxyethanol Galactoside와 Chlorphenesin Galactoside의 정제 (Purifications of Phenoxyethanol Galactoside and Chlorphenesin Galactoside using Solvent Extraction followed by Gel Chromatography)

  • 정경환
    • 한국응용과학기술학회지
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    • 제34권4호
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    • pp.954-961
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    • 2017
  • 재조합 ${\beta}$-galactosidase (${\beta}$-gal)을 이용하여 transgalactosylation 반응으로 합성된 2-phenoxyethanol galactoside (PE-gal)과 chlorphenesin galactoside (CPN-gal)의 정제를 실시하였다. 먼저 PE와 PE-gal이 포함된 반응물에 ethyl acetate (EA)를 넣고, EA/water 이상계 시스템에서 PE와 PE-gal을 분획하였다. 이 시스템에서 PE는 EA층으로 PE-gal은 water층으로 분획되었다. 그리고, 물층을 모아서 silica gel chromatography를 실시하였다. 최종적으로, silica gel chromatography만 실시하여 PE-gal을 정제한 경우와, EA 처리 후 silica gel chromatography를 실시하여 PE-gal을 정제한 경우의 정제 PE-gal에 대하여 HPLC (High performance liquid chromatography)와 TLC (thin-layer chromatography) 분석을 수행하였다. 그 결과 EA를 처리하여 분획한 후, silica gel chromatography를 수행한 시료에서 잔여 PE가 완전히 제거되는 것을 관찰하였고, silica gel chromatography만 실시하여 PE-gal을 정제한 경우에는 상당량의 잔여 PE가 관찰되었다. 이 때, mole 기준으로 약 21%의 정제 수율을 확인할 수 있었다. 마찬가지로 CPN-gal의 정제에서도 EA 분획 처리 후, silica gel chromatography를 수행하였더니, 잔여 CPN이 거의 없는 순수한 CPN-gal을 얻을 수 있었다.

백작약으로부터 식품부패 미생물에 대한 항균성 물질의 분리 및 동정 (Isolation and Identification of Antimicrobial Compound from Jakyak(Paeonia japonica var. pilosa N$_{AKAI}$)

  • 황재선;전희정;한영실
    • 한국식품조리과학회지
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    • 제16권5호
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    • pp.445-452
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    • 2000
  • 우리나라 야산에서 손쉽게 구할 수 있는 구황식물인 백작약을 건조시켜 분쇄한 후 methanol과 여러용매로 추출하여 식품 부패 미생물의 증식 억제 효과를 검색하고 그 향균물질을 분석하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 백작약의 methanol 추출물은 1500$\mu\textrm{g}$/ml 농도에서 B. subtilis, S. aureus, V parahaemolyticus의 증식을 100% 억제하였으며 L. monocytogenes와 E. coli도 같은 농도에서 각각 65.93%와 83.27%의 억제 효과를 보였다. 백작약의 ethylacetate 분획 추출물은 낮은 농도인 1000$\mu\textrm{g}$/disc의 농도에서 식품 부패 미생물 5종 모두에 대하여 clear zone을 형성하여 항균력을 나타내었다. 특히 S. aureus, B. subtilis, V. parahaemolyticus, E. coli균에 대해서는 낮은 농도인 500$\mu\textrm{g}$/disc에서 clear zone을 나타내었으며 또한 2,000$\mu\textrm{g}$/disc 농도에서 L. monocytogenes, E. coli 및 V. parahaemolyticus는 각각 13, 15, 13m의 clear zone을 형성하였다. 백작약의 Ethylacetate 추출물을 silica gel colum chromatograhpy (7cm$\times$1.2cm한 후 thin layer chromatography(TLC)를 실시하여 항균성 실험을 한 결과 B. subtilis의 경우 1000$\mu\textrm{g}$/disc 농도에서 2nd fra. 3이 17mm, L. monocytogenes는 250$\mu\textrm{g}$/disc 농도에서 21mm를, S. aureus는 13mm의 clear zone을 형성하여 백작약의 methanol 추출물로부터 간 용매별로 계통 분획하여 분리한 ethylacetate 분획으로부터silica gel column chromatograpy와 TLC를 하여 항균성을 보인 2rd fra. 3의 성분을 알아보기 위히여 HPLC로 단일분리하여 얻은 peak III에 대한 compound를 GC-MS로 분석한 결과 peak III에서는 Cetyl alcohol이 있는 것으로 추정되었다.

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갈대의 INDOLE 화합물(化合物) 연구(硏究) -[제1보](第一報) 갈대 유아(幼芽)의 Indole 화합물(化合物) 검색(檢索)- (Studies on the Indoles in Common Reed. -[Part 1] Indole Compounds Occuring in the Shoot of Common Reed [Phragmites Communis Trin.]-)

  • 김용화;이춘영;김인수
    • Applied Biological Chemistry
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    • 제19권1호
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    • pp.24-30
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    • 1976
  • 갈대(Phragmites communis Trin.)의 지하경(地下莖)을 암소(暗所)에서 3일간 기른 싹의 메타놀 추출물(抽出物)을 TLC로 분리동정(分離同定)하였으며, 아래와 같은 결과를 얻었다. 1. 검정(檢定)된 화합물은 주(主)로 indole amine류(類)였으며, serotonin, tryptamine, tryptophan등은 표준화합물과의 co-chromatography에 의해 동정되었고, 용매계를 달리하여 구한 Rf치 및 발색특성을 문헌과 비교하여 추정한 것으로는 bufotenine, N-methylserotonin, N,N-dimethyltryptamine이었으며, Skatole 및 gramine의 존재(存在)의 가능성도 추측(推測)되었다. 2. 갈대 생육의 일정기간 동안 indole 화합물의 methyl화(化) 및 hydroxyl화(化) 대사계(代謝系)의 활성(活性)이 강하게 나타나고 있다고 생각된다. 3. 본 실험에서 처음 시도된 "overlap"점적(點滴)법을 사용한 TLC방법(方法)은 시료중의 방해물질(妨害物質)의 영향으로 시료와 표준품 간에 동일 화합물(化合物)이 Rf치에 차이(差異)를 나타낼 때 시료중의 동일(同一) 화합물의 검정에 유용한 방법이 될 것이다.

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인삼(人蔘) Saponin 산가수분해물(酸加水分解物)의 당류(糖類)에 관(關)한 연구(硏究) (Identification of Sugar from Korean Ginseng Saponins by Acid-hydrolysis)

  • 임국이
    • Journal of Nutrition and Health
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    • 제10권1호
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    • pp.26-33
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    • 1977
  • 인삼(人蔘) Saponin의 구성당류(構成糖類)를 동정하기 위하러 인삼(人蔘) 종류별(種類別), 연근별(年根別) 시료(試料)에 대하여 실험(實驗)하였으며 다음과 같은 결과(結果)를 얻었다. 1. 미삼(尾蔘), 백삼(白蔘), 삼년(三年) 및 육년근(六年根) 수삼(水蔘)의 전분함량(澱粉含量)은 각각(各各) 10.4, 31.5, 8.2, 25.6%였으며 전당(全糖)은 각각(各各) 37.0, 61.5, 64.5, 62.5% 였고 유리당(遊離糖)은 7.6, 10.5, 11.3, 10.7% 였다. 2. 미삼(尾蔘), 백삼(白蔘), 삼년(三年) 및 육년근(六年根) 수삼(水蔘)에서 얻은 Saponin을 TLC에 의하여 전개(展開)시킨 결과(結果) 거의 유의(類似)한 Pattern을 동정 하였다. 3. 미삼(尾蔘)에서 분리(分離)한 Saponin 산가수분해물(酸加水分解物)의 Paper Chromatography 결과(結果) glucose를 동정할 수 있었고 Pentose로 예상되는 unknown chromatogram을 얻을 수 있었으며 Saponin의 구성당(構成糖)은 0.7%였다. 4. 미삼전당(尾蔘全糖)획 구성비(構成比)는 전분(澱粉), 유리당(遊離糖), Saponin분자(分子) 구성당(構成糖), 기타가 각각(各各) 28.1 2.05, 1.9, 49.5%였다.

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강남콩(Phaseolus vulgaris L.)의 Triglyceride 조성 (Triglyceride Composition of Kidney Bean (Phaseolus vulgaris L.))

  • 권용주;엄태붕;김충기;김상필;고석범;이태규;양희천
    • 한국식품과학회지
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    • 제19권6호
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    • pp.533-536
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    • 1987
  • 강남콩 지방질중 triglyceride를 TLC로 분리한 후 HPLC에 의하여 PN별로 분획하였다. 각 PN별 triglyceride 분획은 다시 GLC에 의하여 acyl 탄소수별 조성을 분석하고 PN별 획분의 지방산 조성도 분석하였다. 이들 결과를 종합하여 triglyceride의 조성을 추정한 결과, 강남콩의 triglyceride는 총 14종이었으며 C18:2 C18:3 C18:3, C18:2 C18:2 C18:3, C18:3 C18:3 C18:3이 주성분으로 각각 전체 triglyceride의 26.6%, 18.5%, 14.9%이었다.

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Antioxidant and α-Glucosidase Inhibitory Activities of the Extract from Sparganium stoloniferum Buch.-Ham. Root and Its Constituent Compounds

  • Xu, Ming Lu;Wang, Lan;Hu, Jian He;Wang, Myeong-Hyeon
    • Preventive Nutrition and Food Science
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    • 제14권4호
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    • pp.354-357
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    • 2009
  • Three compounds, vanillic acid, p-hydroxylcinnamic acid, p-hydroxybenzaldehyde have been isolated from the ethylacetate extract of Sparganium stoloniferum Buch.-Ham roots using silica gel open column chromatography, preparative thin-layer chromatography (pTLC) and reverse phase high performance liquid chromatography. The structures of the compounds were established on the basis of IR, extensive 1D NMR, and MS analyses. The ethylacetate (EtOAc) extract, vanillic acid, and p-hydroxybenzaldehyde showed $\alpha$-glucosidase inhibition activity of 72.71%, 20.13%, and 30.42%, at the concentration of 10 ${\mu}g/mL$, respectively. The EtOAc extract exhibited strong antioxidant activity with an $IC_50$ value of 24.37 ${\mu}g/mL$ against DPPH radical scavenging activity, the vanillic acid, p-hydroxylcinnamic acid, and p-hydroxybenzaldehyde with an $IC_50$ value of 2.10 ${\mu}M$, 1.59 ${\mu}M$, and 2.72 ${\mu}M$ against DPPH, respectively.

감초 추출물로부터 항균성 물질의 분리 및 동정 (Isolation and Identification of Antimicrobial Compounds from Licorice Extracts)

  • 이진만;이윤원;허상선
    • 한국응용과학기술학회지
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    • 제33권2호
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    • pp.255-263
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    • 2016
  • 식품부패미생물에 대한 감초추출물의 항균력을 확인하고 유효성분을 분리한 후 그 구조를 확인 하였다. 감초추출물은 대표적인 항균제인 메타중아황산칼륨과 myconazole과 비슷한 항균 활성을 나타내었다. 용매분획을 실시한 결과 chloroform fraction이 가장 항균활성이 높은 것으로 나타났다. 이에 chloroform분획을 silica gel column chromatography를 통해 분리하여 항균활성이 가장 큰 분획물인 KC를 분리하였다. 이 화합물은 ESI-MS 와 $^1H$-NMR, $^{13}C$-NMR 결과로부터 활성물질의 구조를 동정하였으며 그 결과 KC는 (R)-glabridin인 것으로 확인하였다.

3종(種)의 가지과식물종자유중(料植物種子油中)의 Sterol 조성(組成) (Sterol Compositions in Three Solanaceous Seed Oils)

  • 정태명;양민석;나효환
    • Applied Biological Chemistry
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    • 제21권1호
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    • pp.51-57
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    • 1978
  • 3종(種)의 가지과(科) 식물중(植物中)의 sterol조성(組成)을 TLC, GLC 및 GLC-MS에 의(依)해서 분석(分析)하여 4-desmethylsterol fraction에서 7종(種), 4-monomethylsterol fraction에서 9종(種), 그리고 4.4-dimethylsterol fraction에서는 8종(種) 모두 24종(種) sterol을 동정(同定)하였고, 이들 sterol들이 식물체내(植物體內)에서 어떤 생합성경로(生合成經路)를 거치는가를 검토(檢討)하였다.

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청송.영양산 고추씨 기름의 Triglyceride 조성의 비교 (Comparison of Triglyceride Composition between Red Pepper Seed Oils Harvested from the Chungsong and Youngyang Areas)

  • 김동수;전선미;정동윤;김현대;박영호
    • 한국식품영양과학회지
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    • 제20권3호
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    • pp.225-232
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    • 1991
  • A Study was carried out to elucidate the triglyceride compositions of the red pepper seed oils harvested from two different areas. The oil was extracted from the red pepper seed with nhexane. Each triglyceride of the oil was separated by thin layer chromatography (TLC) and fractonated by reverse phase high performance liquid chromatography (HPLC) on the basis of acyl carbon numbers, and partition number group(PN) and fatty acid composition of triglyceride were analyzed by gas liquid chromatography (GLC). From the results, it was found that the red pepper seed oils of the Chungsong and Youngyang areas consisted of 14 and 18 kinds of triglycerides, respectively. The red pepper seed oil of the Chungsong area consisted of (C18:2, C18:2, C18:2=41.0%), (C16:0, C18:2, C18:2=37.1%), and that of the Youngyang area consisted of (C18:2, C18:2, C18:2=41.0%), (C16:0, C18:2, C18:2=36.3%) and (C16:0, C16:2, C18:2=8.4%), as the major triglycerides.

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