집단급식에 공급되는 생계육에의 Campylobacter의 오염특성을 분석하기 위하여 경기지역의 한 공급업체의 단체급식용 생계육에서 Campylobacter를 분리.동정하고 특성을 분석하였다. 생계육에 오염된 일반 세균수는 $10^4$~$10^{6}$ CFU/g로 나타났고 Campylobacter를 분리를 위하여 증균배지와 선택배지를 사용하여 candle method과 microaerophilic chamber를 활용하여 일차적으로 205균주를 분리하였다. Gram staining, catalase, oxidase의 생화학적인 특성으로 28개의 균주를 분리하였고 pA와 pB의 primer를 사용한 PCR로 16개의 Campylobacter spp.를 동정할 수가 있었다. 특히 이들 중 9개의 균주가 42$^{\circ}C$도 뿐만아니고 $25^{\circ}C$에서도 생육이 가능한 것으로 나타났다. 따라서 생계육의 초기 총균수가 평균적으로 $10^{5}$ CFU/g로 높은 것으로 나타났고 저온 생육가능한 Campyobacter도 많이 분포하고 있으므로 infective dose가 낮은 이들에 의한 식중독의 위해를 줄이기 위하여 대량 집단급식시 철저한 위생관리가 요구되었다.
An antimicrobial susceptibility test was conducted to compare the resistance rates among Campylobacter spp. isolates from dogs (n = 50) raised under diverse conditions and humans (n = 50). More than 60% of Campylobacter (C.) jejuni from dogs and humans showed resistance to nalidixic acid, enrofloxacin and ciprofloxacin. C. jejuni isolates from humans showed higher resistance to tetracycline (83.3%) and ampicillin (91.3%) than those from dogs. None of the C. jejuni or Campylobacter coli isolates from humans or dogs were resistant to erythromycin. Overall, 85% of Campylobacter spp. isolates showed a multidrug resistant phenotype. Nucleotide sequencing analysis of the gryA gene showed that 100% of $NA^R/CIP^R$ C. jejuni isolates from dogs and humans had the Thr-$86^{th}$-Ile mutation, which is associated with fluoroquinolone resistance. flaA PCR restriction fragment length polymorphism (RFLP) typing to differentiate the isolates below the species level revealed 12 different clusters out of 73 strains. The human isolates belonged to eight different RFLP clusters, while five clusters contained dog and human isolates.
본 연구에서는 폐기물 자원화 공정에서 발생하는 음폐수를 UF 분리막을 결합한 혐기성 소화 파일럿 에서 처리하면서 혐기성 소화효율, 바이오가스 생산량과 운전인자를 도출하였다. 운전방식은 막내부에서 외부로 고액분리가 이루어지는 가압식이었으며, 투과 플럭스는 15∼20 LMH, 막간 차압은 $1{\sim}3 kgf/cm^2$였다. 분리막 운전은 직접순환방식으로 운전한 결과, 메탄조의 수질악화로 간접순환방식으로 운전하였다. 유입수의 TCOD 와 SCOD 는 각각 113 g/L, 62 g/L 이었고, 유출수의 TCOD 와 SCOD는 각각 25 g/L, 12 g/L 이었다. TCOD 및 SCOD 제거효율은 각각 77% 및 81%였다. 하지만 UF 공정을 추가했을 때는 제거효율이 93% 및 86%로 증가하였다.
도시쓰레기의 혐기성 소화는 에너지원 및 온난화 가스 저감 문제 등에 의해 최근에 사회적 관심사가 되고 있다. 도시쓰레기는 고형분 함량이 높고 질소성분이 낮으며 셀루로스와 헤미셀루로스가 주성분으로 되어 있다. 도시쓰레기의 메탄 전화율은 대개 50%이며 $0.2m^2/kg$ VS에 해당한다. 고형물 농도가 높을수록 긴 수리학적 체류시간이 필요하며 주입물에 접종슬러지를 혼합하여야 한다. 도시쓰레기의 혐기성 소화 시 C/N비는 25가 상한이고 NH3-N의 적정농도는 700mg/L로 알려져 있다. pH조절을 위하여 흔히 석회와 탄산나트륨이 사용되고있는데 탄산나트륨을 3,500mg/L이상 첨가하면 나트륨 독성이 나타난다. 고온성 혐기 소화조는 운용과 관리가 어려우나 병원성 미생물 억제에 효과적인 것으로 알려져 있다. 도시쓰레기의 혐기성 소화공정의 최적화를 이룩하려면 소화공정에 관여하는 미생물의 작동기전에 대한 이해가 필요하다.
Symbiobacterium toebii has been previously reported as a novel commensal thermophile exhibiting a commensal interaction with thermophilic Geobacillus sp. SK-1. We investigated the distribution of this commensal thermophile in various soils using molecular methods, such as quantitative PCR and terminal restriction fragment polymorphism analysis. Based on a nested competitive quantitative PCR the 16S rDNA of the commensal thermophile was only detected in compost soils at about $1.0{\times}10^4$ cpoies per gram of soil, corresponding to $0.25{\times}10^4$ cells per gram of soil. However, in an enrichment experiment at $60^{\circ}C$, about $1.0{\times}10^8$ copies of 16S rDNA molecules were detected per ml of enriched culture broth for all the soils, and more than 0.1 mM indole accumulated as the product of commensal bacterial growth. When incubated at $30^{\circ}C$, neither the 16S rDNA of the commensal bacterium nor any indole accumulation was detected. Accordingly, even though the 16S rDNA of the bacterium was only detected in the compost soils by a nested PCR, the presence of the 16S rDNA molecules of commensal thermophile and accumulation of indole in all the enriched cultures appeared to indicate that the commensal thermophile is widely distributed in various soils.
토양으로부터 CGTase를 생산하는 새로운 호열성 세균을 분리하였으며, 형태 및 생리적 특성과 16S ribosomal DNA의 염기서열을 분석한 결과 Geobacillus thermosacchalytycus 로 동정하였다. 호열성 G. thermosacchalytycus가 분비하는 CGTase를 한외여과, 소수성 Phenyl Sephadex CL-4B 클로마토그래피 , 그리고 gel filtration의 순서로 분리 정제하여 정제도 28.2배, 정제수율 12.2%, 그리고 specific activity가 4952.5 units/mg인 CGTase를 얻을 수 있었다. 정제된 CGTase의 분자량은 69,000 dalton이었고, terminal amino sequence는 Asn-Leu-Asn-Lys-Val-Asn-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Val-Tyr-Gln-Ile이었다. 최적 pH 및 온도는 각각 pH 6와$ 50^{\circ}C$였고, pH 6-8과 $60^{\circ}C$에서 장기간 보존할 수 있는 중성 pH의 내열성 효소임을 알 수 있었다. 내열성 CCTase의 cyclization과 coupling 반응의 특정을 검토한 결과 G. thermosacchalytycus가 생산하는 내열성 효소는 $\alpha$-type CGTase이었고, cyclization 반응보다는 coupling반응에 적합한 당전이성이 높은 효소임을 알 수 있었다. 당전이 반응에서 기질 특이성을 검토한 결과 당공여체로는 가용성 전분 그리고 당수용체로는 배당체인 stevioside에 대해 높은 기질 특이성을 보였다. 당전이 반응은 당수용체와 당공여체가 효소와 무작위로 결합하여 진행되는 random ternary complex mechanism으로 반응이 수행되었다.
A gene corresponding to 4-${\alpha}$-glucanotransferase (${\alpha}GTase$) was cloned from the thermophilic bacterium Thermus brockianus. The nucleotide sequence analysis showed that the ${\alpha}GTase$ gene is composed of 1,503 nucleotides and encodes a polypeptide that is 500 amino acids long with a calculated molecular mass of 57,221 Da. The deduced amino acid sequences of Thermus brockianus ${\alpha}GTase$ (TBGT) exhibited a high level of similarity to the amino acid sequence of ${\alpha}GTase$ of Thermus thermophilus (86%), but low level of homology to that of E. coli (26%). The TBGT gene was overexpressed in E. coli BL21, and the corresponding recombinant enzyme was efficiently purified by Ni-NTA affinity chromatography. The enzymatic characteristics revealed that optimal pH and temperature were pH 6 and $70^{\circ}C$, respectively. Most interestingly, TBGT reacted with small oligosaccharides, especially maltotriose, to form various maltooligosaccharides by using its disproportionation activity.
A systematic investigation was performed on the bacterial, Bacillus, fungal, and yeast communities of the three types of Daqu (mechanically prepared, manually prepared, and mixed prepared) used in Baiyunbian Company by reconditioning PCR-denaturing gradient gel electrophoresis (PCR-DGGE). The DGGE results showed that the microbes in the three types of Daqu were mainly thermotolerant and thermophilic microbes, and the most dominant bacterial species were Bacillus and Virgibacillus, followed by Lactobacillus and Trichococcus. Furthermore, the dominant fungi were found to be molds, such as Rasamsonia, Penicillium, Aspergillus, and Monascus, and the dominant yeasts were Saccharomyces cerevisiae, Saccharomycopsis fibuligera, Pichia anomala, and Debaryomyces hansenii. In general, the three types of Daqu showed slight differences in microbial communities, and the Shannon indexes (H') of the manually prepared and mechanically prepared Daqu were similar. The results suggest that mechanically prepared Daqu can replace manually prepared Daqu in liquor production, and this research provides useful information for liquor production and process improvement.
전보에서 분리 동정한 Y-33 균주의 $\beta$-galactosise 효소생산조건을 검토하고 효소를 정제하여 정제효소의 성질을 조사한 결과는 다음과 같다. 1. 효소생산을 위한 최적초발 pH는 7.0이었고 최적온도는 $65^{\circ}C$이었다. 2. 효소는 lactose와 galactose에 의하여 유도되어졌으며 세포내효소이었다. 3. 조효소액을 1차 DEAE-cellulose, 2차 DEAE-cellulose column chromatography 및 Sephadex G-150로 gel filtration하여 정제도가 28.3배, 수율이 15.2%의 정제효소를 얻었다. 4. 정제효소는 polyacrylamide gel 전기 영동에 의하여 순도가 검정되었다. 5. 정제효소의 유당가수분해를 위한 최적작용 온도는 $65^{\circ}C$. pH는 6.5이었다.
PCR방법을 기본으로 한 in vitro recombination과 대장균 cdd 돌연변이주에서의 발현을 통하여 family shuffling이 수행되었다. 고온성 Bacillus caldolyticu와 B. stearothermophilus 유래의 시티딘 디아미나제을 코드하는 cdd 유전자를 shuffling하였다. 이것을 대장균 cdd 돌연변이주에 형질전환 시킨 후 uraci이 없는 AB배지에서의 생존을 통하여 150개의 돌연변이 균주를 얻을 수 있었으며, 그 중 연구를 위하여 4주(SH1067, SH1077, SH1086, 및 SH1118)를 선택하였다. 선택한 4주의 염기서열을 분석한 결과, 수 회의 point mutation과 recombination이 각각 일어났음을 확인 할 수 있었다. 특히 SH1067의 경우,$ 80^{\circ}C$에서 B. stearothemophilus 에서 유래한 7101의 시티딘 디아미나제 활성과 비교하여 770배 이상의 증가를 보여주었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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