• 한국동물생명공학회지
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• 제37권2호
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• pp.130-135
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• 2022

Epididymal sperm cryopreservation provides a potential method for preserving genetic material from males of endangered species. This pilot study was conducted to develop a freezing method for tiger epididymal sperm. We evaluated post-thaw sperm condition using testes with intact epididymides obtained from a Siberian tiger (Panthera tigris altaica) after castration. The epididymis was chopped in Tyrode's albumin-lactate-pyruvate 1x and incubated at 5% CO₂, 95% air for 10 min. The Percoll separation density gradient method was used for selective recovery of motile spermatozoa after sperm collection using a cell strainer. The spermatozoa were diluted with modified Norwegian extender supplemented with 20 mM trehalose (extender 1) and subsequent extender 2 (extender 1 with 10% glycerol) and frozen using LN₂ vapor. After thawing at 37℃ for 25 s, Isolate^® solution was used for more effective recovery of live sperm. Sperm motility (computerized assisted sperm analysis, CASA), viability (SYBR-14 and Propidium Iodide) and acrosome integrity (Pisum sativum agglutinin with FITC) were evaluated. The motility of tiger epididymal spermatozoa was 40.1 ± 2.0%, and progressively motile sperm comprised 32.7 ± 2.3%. Viability was 56.3 ± 1.6% and acrosome integrity was 62.3 ± 4.4%. Cryopreservation of tiger epididymal sperm using a modified Norwegian extender and density gradient method could be effective to obtain functional spermatozoa for future assisted reproductive practices in endangered species.

• Journal of Animal Science and Technology
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• 제55권5호
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• pp.427-434
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• 2013

귀중한 한국재래닭 (오계)의 원시생식세포를 냉동보존하고, 키메라 닭을 통한 재래종의 복원을 도모하는 방법을 실용화하기 위해서, 오계의 원시생식세포에 있어 최적의 동결방법에 대해 검토했다. 원시생식세포의 동결은, 세포를 분리한 후, 동결배지의 기초가 되는 혈청으로서 소 태아혈청 (FBS) 그리고 닭 혈청(CS)를 이용하고, 동결보호제로서는 EG 및 DMSO의 첨가량을 2.5, 5, 10, 15%로 설정하고, 300 ${\mu}L$의 동결배지 용량으로 동결 튜브 안에서 $-70^{\circ}C$로 동결했다. 융해 후에는 오계 PGC의 생존율을 확인 및 검토를 했다. 그 결과, FBS 처리군이 CS 처리군 보다 생존 PGC 회수율이 높은 경향을 나타냈다. 또한 항동해제로서 최적의 조건은 10% EG + FBS의 조합을 기초로 한 동결배지에서 가장 높은 오계원시 생식세포의 생존율을 확인했다. 이러한 결과들로부터 한국재래종(오계)의 원시생식세포의 동결보존의 실용화가 보다 더 향상 될 수 있는 또 하나의 방법이 될 수 있음을 시사한다.

• 한국지역지리학회지
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• 제18권3호
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• pp.253-267
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• 2012

본 연구는 무등산에 분포하는 암괴류의 유형과 특징을 파악하고자 하였다. 무등산의 암설지형은 암괴노출형, 노출혼합형, 거력잠재형, 기후단구 노출혼합형으로 분류할 수 있으며, 암괴노출형의 대부분은 암괴류의 형태를 보인다. 암설지대 암괴의 공급은 암질에 따라 다른 양상을 보이고 있다. 안산암질이 우세한 암설은 암설지대 상부의 주상절리 또는 단애에서 암괴의 이동이 있었을 것으로 판단되고. 화강암질은 심층풍화된 암괴가 사면이동하였던 것으로 추정된다. 암괴의 이동방식은 암괴의 낙하보다는 미끄러짐이 우세했던 것으로 추론된다. 그 이유는 단애와 암설지대 사이에 $10^{\circ}$ 내외의 완만한 사면에서 암괴의 장거리 이동이 불가능하고, 거력을 이동시킬만한 수류가 없고, 암설의 장축 방향성은 사면 최대경사방향과 일치하기 때문이다. 화강암과 안산암질 암설이 만나는 지역에서는 화강암이 하부에 안산암질이 상부에 있으며, 솔리플럭션과 동결포행이 활발한 시기에 화강암질 매트릭스가 평탄성이 현저한 사면을 형성한 후 안산암질 거력이 그 위를 덮었을 것으로 판단된다. 현재 기후환경을 고려할 때 무등산 암설지대의 암괴는 이동이 거의 없다. 우주기원 동위원소 36Cl 연대측정 결과로 추론할 때, 최소 50,000년 전 암괴가 단애로부터 떨어져 나와 하부에 이동되었음을 의미하고 있다. 상부는 각력이 우세하고, 하부는 원마도가 좀 더 높은 아원력이 우세한 점을 고려할 때, 암설은 상부에서 하부로 이동되어졌을 것으로 추론되며, 노출연대를 고려했을 때, 안정화된 화석지형이라고 추정된다.

• 한국산학기술학회논문지
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• 제21권9호
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• pp.251-258
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• 2020

본 연구에서는 동결보존액에 대한 Zardaverine (phosphodiesterase inhibitor) 첨가가 돼지 동결-융해 정자의 운동학적 특성에 미치는 효과를 조사하였다. 돼지정액의 동결보존은 보조 번식기술 및 유전자원 장기보존을 위해 유용하게 이용되는 중요한 기술이다. 하지만 정자세포를 동결-융해하는 과정에서 발생하는 온도충격은 정자의 수정능력을 급격히 저하시킨다. 정액샘플은 성숙한 Duroc종 수퇘지로부터 채취했으며, lactose-egg yolk 동결보존액에 다양한 농도로 Zardaverine (0, 20, 50, 75 및 100 𝜇M)을 첨가하여 정액을 동결하였다. 융해 후 정자세포의 운동학적 특성 분석은 정자운동성자동분석기(CASA; computer-assisted sperm analysis)를 이용하였다. 그 결과, 융해 직후 정자의 운동성(MOT)은 타처리구에 비해 20 𝜇M 처리구에서 가장 높았다(p<0.05). Curvilinear velocity (VCL)은 0 𝜇M 과 20 𝜇M 처리구가 75 𝜇M 처리구를 제외한 다른 처리구들에 비해 유의적으로 높은 값을 보였다(p<0.05). Average path velocity (VAP)는 20 𝜇M 처리구가 100 𝜇M 처리구에 비해 유의적으로 높았으며(p<0.05) Amplitude of head lateral displacement (ALH)는 20 𝜇M 처리구가 50 𝜇M과 100 𝜇M 처리구에 비해 유의적으로 높았다(p<0.05). 이상의 결과를 종합하면, 동결용 보존액에 대한 Zardaverine 첨가가 동결-융해된 돼지 정자의 운동학적 특성에 긍정적인 영향을 미치는 것으로 사료된다.

• 대한수의학회지
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• 제33권3호
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• pp.547-554
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• 1993

This study was carried out to investigate the best condition for in vitro and in vivo culture after freezing and thawing of nuclear transplant 2 cell embryos. When nuclear transplant embryos were submitted to electrofusion, the significantly higher fusion rates of 2 cell donor nuclei were achieved at the electric field strength of DC 1.5 kV/cm for 100 and $150{\mu}sec$, DC 2.0 kV/cm for 100 and $150{\mu}sec$ than DC 1.0 kV/cm for 100 and $150{\mu}sec$(p<0.01). The significantly higher fusion rates of 4 cell donor nuclei were achievecl at DC 2.0 kV/cm for 100 and $150{\mu}sec$ than DC 1.0 kV/cm for 100 and $150{\mu}sec$(p<0.01). The fusion rates in 8 cell donor nuclei were 94.2~99.3%. The developmental potency to blastocyst in 2 cell donor nuclei was significantly higher in DC 2.0 kV/cm for $150{\mu}sec$ treated group(p<0.01). The significantly higher developmental potency to blastocyst in 4 cell donor nuclei were achieved at the electric field strength of DC 2.0 kV/cm for $150{\mu}sec$ than DC 1.5 kV/cm for 100 and $150{\mu}sec$, DC 2.0 kV/cm for $100{\mu}sec$ treated group(p<0.01). The develop mental potency to blastocyst in 8 cell donor nuclei was significantly higher in DC 2.0 kV/cm for $100{\mu}sec$ treated group(p<0.01). The developmental potency to blastocyst after nuclear transplantation was significantly higher in 2 cell donor nuclei than in 8 cell donor nuclei(p<0.01). When the recovered embryos in normal morphology were cultured in vitro, there were no significant differences in the developmental potency to blastocyst between the freezing methods and the concentrations of cryoprotectant(p<0.01). The production rates of offspring after transfer of nuclear transplant embryos to recipient mouse were no significant difference in 2, 4 and 8 cell donor nuclei.

• 한국동물생명공학회지
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• 제34권1호
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• pp.57-63
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• 2019

This study was conducted to find out the effect that ${\kappa}-Carrageenan$ has on the properties of dog sperm when it was added to the cryoprotectant. Extender basically was contained 1.21 g Trizma base, 0.67 g citric acid, 0.4 g glucose, 0.03 g penicillin G, 0.05 g streptomycin sulfate. Extender1 was added with 0.1%, 0.2%, 0.3%, and 0.5% carrageenan, while extender2 was supplemented with glycerol. After freezing-thawing, the motility, viability, acrosome integrity, apoptosis, and ROS (reactive oxygen specifications) of sperm were measured to analyze the effects of the supplementation of carrageenan. Total Motile (TM), Rapid Progressive Motile (RPM), Medium Progressive Motile (MPM), and Immotile were measured through the CASA system after thawing in 37 degree water. Extender with 0.2% ${\kappa}-carrageenan$ ($64.26{\pm}0.49$) was significantly higher than control ($40.24{\pm}8.27$) (p < 0.05). RPMs of extender with 0.1%, 0.2% ${\kappa}-carrageenan$ ($57.64{\pm}6.34$, $56.47{\pm}1.35$) were significantly higher than the other groups (p < 0.05). Acrosome integrity was measured by dyeing to PSA-FITC with an epifluorescence microscope. Normal acrosome ratio of extender with 0.5% ${\kappa}-carrageenan$ ($61{\pm}8.03$) was higher than the other groups (p < 0.05). Apoptosis was measured with a FACSCalibur flow cytometer using FITC (FITC Annexin V Apoptosis Detection Kit). Treated groups of ${\kappa}-carrageenan$ of 0.1% ($0.81{\pm}0.05$), 0.2% ($0.85{\pm}0.05$) were significantly higer (p < 0.05) than control. Modified SYBR/PI staining was used for determination of viability and DCF staining was used for evaluation of ROS. Viability and ROS were not significantly different from other groups. In conclusion, adding a certain concentration of carrageenan to the extender of cryopreservation, carrageenan contributes to the improvement of the sperm motility, acrosome integrity and prevention of apoptosis.

• 콘크리트학회논문집
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• 제19권4호
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• pp.475-482
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• 2007

콘크리트 구조물의 사용 년수 증가에 따른 열화 (aging) 방지 및 내구성능 향상을 목적으로 개발된 유무 기합성 표면 침투 보강제의 성능 및 적용성을 실험적 방법으로 입증하였다. 본 연구에서는 무기 재료인 TEOS (tetra-ethoxyorthosilicate)와 유기재료인 acrylate monomer를 용액중축합 방법으로 합성함으로써 졸-겔 반응 (sol-gel process)에 의한 실리케이트의 내구성능 향상 효과와 함께 유기모노머의 부드럽고 유연한 충격 완화층 형성을 통한 콘크리트의 성능 개선 효과와 isobutyl-orthosilicate 등의 성능 개선 물질을 추가함으로써 콘크리트 침투 후의 열화 억제 성능을 향상시켰다. 개발된 유무 기합성 표면 침투 보강제는 침투 후 콘크리트 내부 공극을 물리 화학적으로 안정된 화합물로 충진 시킴으로써 구체 강화에 따른 압축강도 증가 효과는 물론, 염해 및 탄산화, 동결융해 및 복합열화 등의 사용 환경적 열화 요인에 대한 내구성 향상 효과가 높아 콘크리트 구조물의 효율적인 수명 관리 기법으로 활용이 가능할 것으로 판단된다.

• 한국수정란이식학회지
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• 제23권2호
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• pp.115-118
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• 2008

Glycerol is the cryoprotectant most frequently used to freeze semen in several of species. The objective of the present study was to compare the effect of three different glycerol concentrations (4, 6 or 8%, v/v) on frozen-thawed dog sperm survival rate. Ejaculates from 9 dogs collected by digital manipulation were pooled and assessed by macroscopic and microscopic criteria. Semen was divided into 3 aliquots, which were centrifuged and the sperm pellets rediluted with first Tris-glucose-citric acid extender. After 1 h cooling at $4^{\circ}C$, second extender containing 4, 6 or 8% glycerol was added, respectively. The semen was loaded into 0.25 ml straws and frozen and stored in liquid nitrogen and thawed. Sperm vigor, live:dead spermatozoa ratio using HOS test, and sperm morphology using $Spermac^{(R)}$ stain were evaluated. After thawing, there were no significant differences among groups in vigor, viability and morphology. In conclusion, the three glycerol concentrations (4, 6 or 8%) can be used successfully in cryopreservation of canine semen. Therefore the use of 4% glycerol in the extender has less toxic effect and reduces of freezing injuries.

• 한국동물생명공학회지
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• 제36권4호
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• pp.299-306
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• 2021

Vitrification methods are commonly used for mammalian reproduction through the long-term storage of blastocyst produced in vitro. However, the survival and quality of embryos following vitrification are significantly low compared with blastocyst from in vitro production (IVP). This study evaluates that the survival of frozen-thawed bovine embryos was relevant to mitochondrial superoxide derived mitochondrial activity. Here we present supplementation of the cryopreservation medium with Mito-TEMPO (0.1 µM) induced a significant (p < 0.001; non-treated group: 56.8 ± 8.7%, reexpanded at 24 h vs Mito-TEMPO treated group: 77.5 ± 8.9%, re-expanded at 24 h) improvement in survival rate of cryopreserved-thawed bovine blastocyst. To confirm the quality of vitrified blastocyst after thawing, DNA fragmentation of survived embryos was examined by TUNEL assay. As a result, TUNEL positive cells rates of frozen-thawed embryos were lower in the Mito-TEMPO treated group (4.2 ± 1.4%) than the non-treated group (7.1 ± 3.5%). In addition, we investigated the intracellular ROS and mitochondrial specific superoxide production using DCF-DA and Mito-SOX staining in survived bovine embryos following vitrification depending on Mito-TEMPO treatment. As expected, intracellular ROS levels and superoxide production of vitrified blastocysts after cryopreservation were significantly reduced (p < 0.05) according to Mito-TEMPO supplement in freezing medium. Also, mitochondrial activity measured by MitoTracker Orange staining increased in the frozen-thawed embryos with Mito-TEMPO compared with non-treated group. These results indicate that the treatment of Mito-TEMPO during cryopreservation might induce reduction in DNA fragmentation and apoptosis-related ROS production, consequently increasing mitochondrial activation for developmental capacity of frozen-thawed embryos.

• 한국가축번식학회지
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• 제22권4호
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• pp.349-357
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• 1998

본 실험은 체외 생산된 한우 배반포기배의 생존능이 초자화동결 융해 후에도 유지될 수 있는지를 조사하고자 실시하였다. 한우 배반포기배는 2 단계로 초자화동결되었는데, EG20에 3분간 평형 그리고 EFS40에 노출한 후 L$N_2$에 초자화되기까지 30~45 초간 처리하였다. 체외에서의 생존능은 융해 후 24시간째의 re-expanded 와 48시간째의 hatched 발달율로 조사하였다. 그 결과는 다음과 같다. 12번의 반복실험으로부터 체외 수정 후 체외 배양 7일째에 52.5% 의 배반포기배가 생산되었다. 배의 생존에 동결액이 미치는 영향을 조사하였던 바, 대조군 (100.0, 87.0%) 과 비교하였을 때 동결액 노출군 (100.0, 73.8%) 에서 유의한 독성은 확인되지 않았다. 그러나, 배반포기배가 초자화동결되었을 때, 높은 생존능(86.2, 55.4%) 은 확인되었지만 그 결과는 노출군과 대조군에 비교하여 볼 때 유의하게 낮은 것이었다.(p＜0.05). 배 발달단계와 배양날짜가 초자화동결된 난자의 생존에 미치는 영향을 조사하였던 바, 배양날짜와 상관없이 빠르게 발달한 난자군에서 유의하게 높은 생존능이 있음을 알 수 있었다 (p＜ 0.05). 또한, 같은 발달단계라 하더라도, 배양 7일째 배의 (re-expanded: 75.0~87.5%, hatched: 21.4~66.7%) 생존능이 배양 8일째 배의 (re-expanded: 58.6~78.3%, hatched: 10.3~52.2%) 생존능보다 높다는 것을 확인하였다. 따라서, 이러한 결과에서 볼 때 체외에서 생산된 한우 배반포기배는 EFS40 동결액을 사용하는 간편 2 단계 초자화방법으로 성공적으로 동결되어질 수 있으며 특히 배양 7일과 8일째의 expanded 배반포기배와 early hatching 배반포기배에서 더욱 효과적으로 사용될 수 있음을 확인하였다.