Fecal samples from Kim-Hae farm animals were examined for the frequency of gram-negative enteric organisms resistant to tetracycline, streptomycin, or penicillin. The propertions of antibiotic resistant to total organisms in fecal specimens of poultry, swine and cow were as follows: 95%, 92%, 70% for tetracycline, 100%, 27%, 9% for streptomycin, 18%, 1%, 1% for penicillin, respectively. The bacteria had multiresistance to antibiotics. These strains had more than one plasmid. From the transformation study, it was concluded that the resistance to streptomycin was attributed to one of these plasmids.
Recently, antibiotic resistant genes (ARGs) in the environment are emerging as pollutants, since these genetic contaminants can eventually be transferred to human pathogens. The aim of this study was to develop the experimental model of antibiotic resistant gene (ARG) plasmid transfer as a function of various environmental conditions. For this purpose, the multi drug resistant plasmid pB10, which is known to be originally isolated from a wastewater treatment plant, was selected as a model transfer plasmid and Escherichia coli $DH5{\alpha}$ containing pB10 was used as a model donor. Pseudomonas aeruginosa, an opportunistic pathogen, was selected as the recipient for the conjugation experiment. When the donor and recipient were exposed to various stressors including antibiotics and heavy metal as a function of the concentrations (10, 100 and, 1000 ppb), statistically increased plasmid transfer rate was observed at a concentration of 10 ppb of tetracycline and sulfamethoxazole compared to control (no antibiotic exposure). Accordingly, the developed experimental ARG model by various stressor is a promising tool for evaluating the dissemination of ARGs by micro-contaminants in aquatic environment.
A total of 166 strains of Salmonella (S) typhimurium var copenhagen isolated from pigeons (164 strains) and aquatic birds (2 strains) were examined for the biochemical characteristics and plasmid profiles. All the strains were sensitive to ampicillin, chloramphenicol, gentamicin, kanamycin and sulfadimethoxine. But 13 strains(7.8%) were resistant to streptomycin (Sm), 2 (1.2%) to tetracycline, 2 (1.2%) to rifampicin, and 1 (0.6%) to nalidixic acid. Among drug resistant strains, only one strain resistant to Sm contained conjugative R plasmid which was fertility inhibition and incompatibility group $I_{\alpha}$. All the strains were sensitive to cobalt chloride, cupric sulfate, lead nitrate, mercuric chloride and silver nitrate. Of 166 isolates, 6 (3.6%) were resistant to sodium arsenate and 1 (0.6%) to potassium tellurite. Among 166 isolates, 1 (0.6%) was colicinogenic, 12 (7.2%) sucrose fermenters, and 166 (100%) maltose fermenters. Plasmid profiles were confirmed as being 4 or 5 plasmids, and their molecular weight ranged 3.2 to 60 megadalton (MD). All the strains harbored 60 Md plasmid. There are three patterns by the plasmid profile, 150 isolates (90.4%) were pattern I (3.2, 3.5, 33, 60Md), 14 (8.4%) pattern II (3.2, 3.5, 29, 60Md), and 2 (1.2%) pattern III (4.2, 7.8, 8.5, 15, 60Md). S typhimurium var copenhagen strains containing 60Md plasmid were resistant to killing by 90% normal guinea pig serum.
The complete nucleotide sequence of pKH6, a tetracycline-resistance (Tc$^{r}$) plasmid isolated from multi-drug resistant Staphylococcus aureus SA2, has been determined and compared with that of the staphylococcal Tc$^{r}$ plasmid pTl8l. The nucleotide sequences of the two plasmids are in agreement except for 7 nucleotides. All differences are caused by base pair substitutions. Among 6 substitutions, 3 occurred in coding regions. However, only two base substitutions in coding regions resulted in changes of amino acid sequences in two different ORFs of repC and Pre proteins.
Microorganisms capale of utilizing linear alkylbenzene sulfonates(LAS) as sole carbon source were isolated from industrial effluent by using LAS agar plates. The isolated strains were identified as Salmonella sp(BC-2) and Escherichia sp.(BC-3) from the results of morphological, cultural and biochemical tests. The optimal condition for the growth and biodegradation of LAS was the initial pH 7.0 and LAS concentration 0.1%. The isolated BC-2 and BC-3 strains harbored plasmid and LAS-degrading activity was lost when the plasmids were cured by mitomycin C. The plasmids were transformed into E. coli and transformants have the LAS-degrading activity. Isolated strains were examined for primary biodegradation rate of LAS in the medium by methylene blueactive substance(MBAS) method. Of these isolates, BC-2 and BC-3 strains degradated LAS upto 60% and high resistant to CdCl$_{2}$ and HgCl$_{2}$. Isolated strains were sensitive to chloramphenicol, kanamycin, rifampicin, streptomycin and tetracycline but resistant to ampicillin and lincomycin.] Its minimal inhibitory concentration(MIC) for ampicillin was more than 1500 $\mu $g/ml.
R plasmid의 분포와 새로운 conjugation 방법 개발을 위하여, 한국의 남해안과 동해안의 양식현장의 어류질병관련 세균으로부터 항균제 다제 내성균을 분리하였다. 분리균 134종에서 10균주가 chlorarnphenicol, tetracycline, streptomycin, ampicillin, colistin, nalidixic acid, oxolinic acid, kanamycin 등에 대한 다제내성의 특성을 가지고 있었으며 이중 V. damsela JE1 한 균주는 chloram-phenicol과 tetracycline에 대한 내성전달 특성을 갖는 R plasmid 와 ampicillin과 kanamycin에 대한 유전자를 chromosome 등에 함유하고 있었다. 분리된 어병세균의 다제내성 특성이 R plasmid에 기인하는 것인지의 확인은 다양한 장내세균의 선택배지로 최근 개발된 CC 배지에서 각기 다른 균주들이 나타내는 증식여부 또는 집락 색깔의 차이를 이용하여 donor, recipient 그리고 transconjugant를 구별할 수 있는 방법을 적용하였다. Conjugation의 최적화를 위해 여러 가지 조건을 비교한 결과, V. damsela JE1의 R plasmid의 전달은 filter mating법을 사용하는 것이 broth mating법보다 약 100배 이상의 높은 성공률을 보여 주었으며 이때 사용온도는 30$^{\circ}C$ 이상, mating 시간은 24시간에서 가장 높은 전달 빈도를 나타내었다. R plasmid를 함유한 V. damsela JE1이 분리된 4개월 후, 동일 양식장의 동일 그룹의 넙치 장내세균에서 분리한 다제내성균 Sphingomonas sp. 3균주는 V. damsela JE1에서 분리된 것과 같은 크기의 R plasmid를 함유하고 있었으며, 그 특성 또한 V. damsela JE1의 R plasmid와 마찬가지로 다제 내성 중 Cm과 Tc에 대한 유전자만이 recipient로 전달되어 장내 세균총이 R plasmid의 reservoir로서의 역할을 하고 있음을 확인하였다.
This study was carried out to investigate the serotype, and antimicrobial susceptibility and analyze the plasmid profile for the 145 isolates of L. monocytogenes isolated from livestock products and these product processing plants in Gyeongnam, Korea. All of L. monocytogenes strains belonged to serotype 1/2b (57.9%), 1/2a (20.0%), 4b (11.4%), 1/2c, 3b, 4c (each 2.9%) and 4d (0.7%). Serotype 1/2b, 1/2a, 4b from each source were found predominantly. Serotype 1/2b was predominantly higher than other serotype, and there was no significant difference between serotypes isolated from livestock products and product processing plants. 4b was major serotype isolated from raw milk and pork, and serotypes isolated from beef, chickens and slaughterhouse were 1/2b and 1/2a. The susceptibility of 145 strains of L. monocytogenes to 14 antibiotics commonly used in veterinary and human therapy was determined by disk diffusion method. All of L. monocytogenes strains were susceptible to amikacin, ampicillin, cephalothin, chloramphenicol, gentamicin, kanamycin, neomycin and penicillin. L. monocytogenes strains had the highest resistance with colistin (100%), oxytetracycline (44.8%), tetracycline (43.4%) followed by erythromycin (2.8%), spectinomycin (1.4%) and streptomycin (0.7%). Tetracycline resistance, and serotype distribution of the isolates from sample sources were significantly different. Resistance to at least one antibiotic was observed in all of them and 7 different resistant profiles were recorded. The most common resistance pattern were CL-OTC-TC (colistin-oxytetracycline-tetracycline) (42.8%). Among all tested isolates, two different plasmid profiles were observed. Of the 97 examined strains, 14 (14.4%) contained either the 8 and 11 kb plasmid or the 11 kb.
Zymomonas Mobilis로 부터 플라스미드를 분리하여 그 특성을 조사하고 E. col i와 Zymomas양쪽에서 모두 복제하는 셔틀벡터를 제조하였다. Zymomonas mobilis의 4 균주로부터 native plasmid를 분리해 본 결과 모든 Zymomonas균주들은 적어도 하나 이상의 플라스미드를 가지고 있었으며 그 크기는 1.7kb에서 46kb사이였다. 숙주균 주를 선정하고자 Zymomonas의 각종 항생물질에 대한 약재내성을 조사한 결과 특히 tetracycline과 chloramphenic col에 아주 민감한 것으로 나타났다. Zymomonas의 플라스미드들간의 염기배열의 유사성을 조사한 결과 ATCC 1 10988과 ZM 1의 플라스미드들간에는 염기배열의 유사성이 있었고 ZM 4와 Agll은 유사성이 없었다. 클로닝벡터로 개발하고자 하는 ATCC 10988의 1.7kb플라스미드를 pZM886이라 명명하고 이 pZM886을 pBR322와 재조합시켜서 pBZ41이라 명명하였다. pBZ41의 제한효소지도를 작성하였다. pBZ41을 이용하여 조사한 결과 Zymomonas의 replicon은 E.coli에서 작동되지 않았으며 pBR322는 또한 Zymomonas내에서 복제되지 않는 것으로 추정되었다. pBZ41을 conjugal mobilization방법으로 E.coli에서 Zymomonas로 옮겼을 때 Conjugation 된 Zymomonas 들은 모두 tetracycline에 저항성을 나타내었으며 안정하게 플라스미드를 유지시켰다.
2002년 2월부터 2005년 4월까지 호흡기질환 환자로부터 분리된 M. pneumeniae 123 균주의 tetracycline과 erythromycin에 대한 MIC 범위는 각각 $0.5\~1.0$, and $0.5\~512{\mu}/ml$ 이었다. 분리된 M. pneumoniae 123 균주에서 plasmid DNA는 확인되지 않았다. 분리된 M. pneumoniae 123 균주 중에서 57($46.3\%$) 균주가 tetracycline에 저항성인 tetM유전자를 가지고 있었으며, 235 rRNA domain V에 erythromycin에 저항성 변이를 일으킨 균주가 60($48.8\%$)이었다. erythromycin에 저항성 변이를 일으키지 않은 63균주 중에서 tetM 유전자를 가지고 있는 균주는 36($57.1\%$)이었으며, erythromycin에 저항성 변이를 일으킨 60균주 중에서 21($35.0\%$ 균주가 tetM 유전자를 가지고 있었다. 본 연구로써 국내에서 tetracycline과 erythromycin에 대한 저항성 M. pneumoniae 균주의 분리율이 외국에 비하여 높으며, M. pneumoniae 감염의 치료에 erythromycin이 일차 선택제가 될 수 없으므로 이에 대한 범국가적 조사가 필요하다고 생각된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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