Objective: To evaluate sperm nuclear DNA fragmentation and chromatin structure after 18 hours' incubation at room temperature. Methods: Twenty-eight male partners who participating IVF treatment were prospectively included in this study. Ejaculated sperm count and motility were assessed. The sperm was then immediately processed by the conventional swim-up method. After utilization of some of the sample for routine clinical use, the remainder of each of the samples was divided into two aliquots. One aliquot was immediately assessed for sperm nuclear DNA fragmentation (TUNEL assay) and chromatin structure (toluidine blue [TB] staining). The other aliquot was incubated at room temperature for 18 hours and then assessed by two methods. Only dark-TB sperms were considered as having abnormal chromatin structure. Data before and after extended incubation were compared using a paired Student's $t$-test. Results: Before and after extended culture, nuclear DNA fragmentation assessed by TUNEL was $4.9{\pm}4.7%$ and $7.0{\pm}6.4%$, respectively ($p$=0.008). The proportion of abnormal chromatin structure (dark-TB sperm) was $8.2{\pm}5.6%$ and $10.3{\pm}6.5%$ ($p$ <0.001), before and after incubation, respectively. Conclusion: After 18 hours' incubation at room temperature, sperm nuclear DNA and chromatin structure were significantly affected. The IVF practitioner should bear this information in mind when performing delayed insemination, especially for $in$$vitro$ maturation cycles.
Objectives: This study examined the effects of salvianolic acid B (SAB) on exhaustive exercise-induced cardiac muscle damage to rats. Methods: The study was carried out with 12-week-old young adult male Sprague-Dawley rats. Thirty-six rats were divided into 3 groups; normal (n=12), exhaustive exercise group (ExS, n=12) and exhaustive exercise with SAB (ExS+SAB, n=12). Five days before exhaustive exercise, SAB were medicated for 5 days in ExS+SAB group. Rats in ExS and ExS+SAB group were forced to swim for 150 minutes and then they were sacrificed, while rats in normal group were sacrificed at rest. After that, blood was collected and cardiac muscle tissue damage indices were analyzed. Results: Serum aspartate transaminase activity and lactate dehydrogenase activity were significantly lower in ExS+SAB group than in ExS group. Serum creatine phosphokinase activity of ExS+SAB was significantly lower than ExS group. However, the content of serum creatinine had no difference between ExS and ExS+SAB group. In the H&E stained left ventricle myocardium, ExS group showed signs of myocardial damage such as sporadic fragmentation of myocardial fibers, interstitial edema, cytoplasmic eosinophilia and neutrophils infiltration. However, ExS+SAB group alleviated the severity of the signs of myocardial damage. In the myocardial dihydroethidium staining, optical density was remarkably decreased in ExS+SAB group compared to ExS group. Furthermore, the up-regulation of Bax/Bcl-2 ratio was observed in ExS+SAB group compared with ExS group. Conclusions: The above results suggest that SAB may protect cardiac muscle damage via antioxidant activity and prevention of apoptosis.
LB50016 was characterized as a selective and potent$ 5-HT_{1A}$ receptor agonist and evaluate it anxiolytic and antidepressant activities. It shows high affinity for $ 5-HT_{1A}$receptor, moderate affinity for $\alpha$2 adrenergic and $ 5-HT_{2A}$receptors and no significant affinity for other receptors tested. Hypothermia and increased serum corticosterone level were observed in LB50016-treated rats, which are mediated mostly by post synaptic $ 5-HT_{1A}$ receptor activation. In the mouse forced swim model for depression, LB50016-elicited dose-dependent reductions in immobility time, showing $ED_{50}$ of approximately 3 mg/kg i.p., which was blocked by pretreatment of NAN-190, $ 5-HT_{1A}$antagonist. In face-to-face test for anxiolytic activity in mice, estimated $ED_{50}$ was 2 mg/kg, i.p.. In isolation-induced aggression test with mice, fifty-fold increases in latency to attack were observed at 30 min and last up to 4 h after LB50016 treatment (3 mg/kg, i.p.). Taken together, LB50016-induced pharmacological activities are mediated by activation of $ 5-HT_{1A}$receptors, offering an effective therapeutic candidate in the management of anxiety and depression in humans.
This study was performed to determine the effects of nitric oxide on human sperm cell function. Semen samples were obtained from normal healthy volunteers. Motile spermatozoas collected by swim-up method were incubated up to 24 hours in Ham's F-10 medium supplemented with a various concentration of sodium nitroprusside (nitric oxide releasing agent). Sperm motility, hyperactivation, acrosome reaction rate, and acrosin activity were determined. The results are as follows; 1. 1mM of SNP resulted in a significant decrease in sperm motility ($44.8%{\pm}8.9%:78.1%{\pm}6.3%$, and hyperactivation $(10.4%{\pm}6.4%:47.7%:{\pm}9.5%)$ after incubation for 3 hours compared with the control group (Ham's F-10 alone), but had no effect on acrosome reaction. 2. At $100{\mu}M$ SNP, sperm motility was reduced after incubation for 6 hours $(54.8%{\pm}3.2%)$ compared with that of the control group $(82.7%{\pm}8.9%)$, but hyperactivation and acrosome reaction were not affected. 3. However, a lower concentration (less than $10{\mu}M$) of SNP had no effect on sperm motility and hyperactivation for 8 hours of incubation but significantly decreased them when incubation periods were increased up to 24 hours compared with the control group. On the other hand, $1{\mu}M$ and $10{\mu}M$ SNP significantly increased the acrosome reaction rate in both acrosomal status ($17.3%{\pm}5.2%$, $23.5%{\pm}4.7%$, respectively) and acrosin activity ($34.3{\mu}IU{\pm}10.5{\mu}IU,\;45.6{\mu}IU{\pm}5.6{\mu}IU$, respectively) as compared with the control group $(7.0%{\pm}4.0%,\;9.5{\mu}IU{\pm}3.4{\mu}IU)$. These results indicate that SNP, NO releasing agent, has a dose-dependent effects on the sperm cell function. Therefore it may positively affect the fertilization by promoting acrosomal reaction at a lower concentration (less than $10{\mu}M$).
Objectives : This study was investigated the effects of the root of Polygala tenuifolia (POL) on learning and memory impairment induced by chronic cerebral hypoperfusion in rats. Methods : Chronic cerebral hypoperfusion was produced by permanent bilateral common carotid artery occlusion (pBCAO). POL was administered orally once a day (130 mg/kg of water-extract) for 28 days starting at 4 weeks after the pBCAO. The acquisition of learning and the retention of memory were tested on 9th week after the pBCAO using the Morris water maze. In addition, effects of POL on $A{\beta}$ generation and expressions of APP and BACE1 were observed in the hippocampus of rats. Results : POL significantly prolonged the swimming time spent in target quadrant and significantly reduced the swimming time spent in the quadrant far from the target. POL significantly increased the percentage of swim in the targer quadrant in the retention test, while POL was not effective on the escape latencies in the acquisition training trials. POL significantly reduced the levels of $A{\beta}_{(1-40)}$ and $A{\beta}_{(1-42)}$ in the cerebral cortex and the level of $A{\beta}_{(1-42)}$ in the hippocampus produced by chronic cerebral hypoperfusion. POL also significantly attenuated the up-regulation of APP and BACE1 expression in the hippocampus produced by chronic cerebral hypoperfusion. Conclusions : The results show that POL alleviated memory deficit and up-regulation of $A{\beta}$ and BACE1 expressions in the hippocampus. This result suggests that POL may exert ameliorating effect on memory deficit through inhibition of ${\beta}$-secretase activity and $A{\beta}$ generation.
2015년 겨울, 우리나라 남해안 소재 육상 양식장에서 사육 중이던 능성어의 약 30%가 폐사하였다. 수온 $9{\sim}12^{\circ}C$의 겨울철에 발생한 능성어 폐사는 신경괴사성바이러스 (NNV) 감염에 의한 바이러스성뇌망망증 (VER)으로 밝혀졌다. 시험어는 비정상적인 유영, 배를 위로한 채 수면을 떠 다니는 현상, 체색흑화, 안구백탁 및 부레의 과도한 팽창 소견을 보였다. 원인 바이러스는 일반적으로 고수온기 능성어에 감염되는 RGNNV genotype이 아닌, 냉수성 어류에서 분리되는 BFNNV genotype으로 밝혀졌으며, NNV 가장 근연관계가 높은 Pacific cod betanodavirus (PCNNV)와 99.7~100% 상동성을 보였다. 병리조직학적 관찰 결과, 바이러스성뇌망망증 (VER)의 특징적인 병변인 뇌조직의 공포화 및 괴사를 수반하였다. 이 연구는 수온 $12^{\circ}C$ 이하의 겨울철에 능성어에 감염된 BFNNV genotype에 대한 첫 보고이다.
본 연구에서는 F344계 흰쥐를 대상으로 8주간 저강도 운동군과 고강도 운동군으로 나누어 수영운동을 실시하여, 갈색지방조직 내 UCP-1과 UCP-3mRNA 발현을 관찰하고 혈당 및 인슐린 수준이 어떠한 변화를 나타내는지 알아보았다. 그 결과 저강도 수영을 실시한 그룹이 대조군과 고강도 운동그룹보다 갈색지방조직 내 UCP-1과 UCP-3 mRNA 발현이 증가되는 것을 관찰하였으며, 고강도 수영군에서 대조군 보다 인슐린 수준이 낮게 나타났으나 혈당에서는 유의한차가 나타나지 않았다. 하지만 저강도 수영군에서 대조군보다 혈당 및 인슐린 수준이 유의하게 감소하는 것을 관찰하였다. 이러한 결과는 저강도 수영운동이 갈색지방조직 내 UCP-1과 UCP-3mRNA 발현을 증가시키고, 당대사를 활성화하여 인슐린민감도를 개선시킬 수 있음을 보여주는 결과이다.
청틸라피아 (Oreochromis aureus)의 자어에 0, 1, 10, 60 ppm의 $17\alpha-methyltestosterone$(MT)을 30 일간 사료에 섞어 먹인 후 다음 57 일간을 0 ppm을 먹인 그룹은 다시 세그룹으로 나누어 0 ppm MT (0-0), 10 ppm MT (0-10), 및 60 ppm MT (0-60)을 먹였고, 60 ppm 을 먹인 그룹은 다시 3 그룹으로 나누어 0 ppm MT (60-0), 10 ppm MT (60-10), 및 60 ppm MT (60-60)을 먹였으며, 초기 30 일간 1 ppm과 10 ppm MT를 먹인 것은 계속해서 1과 10 ppm을 먹여서 체조성과 생식소 중량지수에 미치는 영향을 조사하였다. 초기 30 일간 어체의 조단백과 조지방은 MT 농도와 역상관 관계를 보였고, 수분 함량은 순상관 관계를 보였다. 후기 57 일간에 먹인 MT는 초기 30 일간 먹인 MT 보다도 숫컷의 체조성에 더 큰 영향을 미쳤다. 사료 중의 MT는 초기 30 일간이나 후기 57 일간 모두 숫컷의 생식소 중량지수에 나쁜 영향을 보인 반면에, 암컷의 경우에는 후기 57 일간에 사료 중의 MT 양이 생식소 중량지수에 나쁜 영향을 나타내었다.
본 연구에서는 ICSI에 의한 돼지 체외수정란의 생산효율을 높이고자, ICSI에 사용되는 돼지 체외성숙 난포란의 원심분리에 의한 효과, 세포질내에 주입하는 정자의 DTT전처리 효과, 체외성숙 난포란의 체외수정시 주로 사용되는 IVF방법과 ICSI방법 사용에 따른 수정율과 후기배로의 배발달율 조사 그리고 IVF방법과 ICSI방법에 의해 발달한 배반포기배의 할구수를 조사하여 다음과 같은 결과를 얻었다. ICSI에 사용되는 돼지 체외성숙 난포란을 이용하여 원심분리를 실시하지 않은 군과 실시한 군에 있어서 수정율과 후기배로의 발달율에 있어서는 두 처리군간에 유의적인 차이는 나타나지 않았으며, 또한 ICSI에 사용되는 정자를 주입전에 DTT를 처리한 군과 DTT를 처리하지 않은 군에서의 수정율과 배반포기배로의 발달율에 있어서도 유의적인 차이는 나타나지 않았다 그리고 체외성숙 후 IVF 또는 ISCI에 의한 체외수정 후 수정율과 후기배로의 발달율에 있어서도 두 처리군간의 유의성은 나타나지 않았다. IVF와 ICSI에 의해 체외수정된 수정란에 있어서 8일째까지 발달한 배반포기배의 할구수를 조사한 결과 각각 46.7$\pm$2.9개와 41.9$\pm$4.6개로 나타나 두 처리군간에 유의적인 차이를 나타내지 않았다. 이상의 실험 결과들을 종합해 보면, ICSI에 의한 체외수정란의 생산은 체외성숙후 난구세포가 제거된 난포란을 원심분리시키면 ICSI에 있어서의 편리를 도모할 수 있을 뿐만 아니라 주입된 정자의 관찰을 용이하게 하여 정확성을 높일 수 있고, 주입시 사용하는 배양액의 난포란내 진입을 최소화 할 수 있을 것으로 사료된다. 그러나 ICSI전 정자의 첨체반응 유도와 난포란의 활성화, 그리고 후기배로의 발달율 향상에 따른 할구수의 증가를 위한 연구가 진행되어야 할 것으로 사료된다. 지금까지의 이러한 결과들을 바탕으로 하여 ICSI에 의한 체외수정란의 생산을 위한 연구가 지속적으로 수행해 나가야 할 것이며, 또한 계속적인 연구로 ICSI를 이용하여 외부유전자의 도입에 의한 형질전환동물의 생산이 가능 할 수 있을 것으로 사료된다.
Objective: To determine whether characteristics of sperm motility obtained by computer-assisted sperm analysis (CASA) could predict pregnancy after intrauterine insemination (IUI) in couples with unexplained infertility. Methods: Three hundred eighty-three cycles of intrauterine insemination with superovulation were retrospectively analyzed. Semen analysis was performed with CASA before and after swim-up and the parameters were compared between pregnant and non-pregnant women. Results: The pregnancy rate per cycle was 14.1%. Pregnant and non-pregnant women were comparable in terms of age, infertility duration, the number of dominant follicles. While sperm concentration, motility, and parameters such as average path velocity (VAP) and percentage rapid (RAPID) before semen preparation were significantly different between the pregnancy and non-pregnancy groups, there were no differences in sperm parameters when comparing the two groups after preparation. Using a receiver operating characteristic curve to measure sensitivity and specificity, the optimal threshold value for the predictors of pregnancy was revealed to be a concentration of ${\geq}111{\times}10^6/mL$, a motility of ${\geq}$ 51.4%, and RAPID ${\geq}$ 30.1% before preparation for IUI. Conclusion: Sperm parameters including concentration, motility, and RAPID before sperm preparation could have predictive value for pregnancy outcome after intrauterine insemination with superovulation in couples with unexplained infertility, and would be helpful when counseling patients before they make the decision to proceed with IVF/ICSI-ET.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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