Kim, Yeo Jin;Cho, Eun Ju;Lee, Ah Young;Seo, Weon Taek
한국미생물·생명공학회지
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제49권2호
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pp.138-147
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2021
The overproduction of reactive nitrogen species (RNS) and reactive oxygen species (ROS) causes oxidative damage to neuronal cells, leading to the progression of neurodegenerative diseases. In this study, we determined the nitric oxide radical (NO), hydroxyl radical (·OH), and superoxide anion radical (O2-) scavenging activities of apigenin. Our results showed that apigenin exhibited remarkable, concentration-dependent ·OH, O2-, and NO radical scavenging activities. Particularly, apigenin indicated the strongest ·OH radical scavenging activity with 93.38% in the concentration of 100 µM. Furthermore, we also investigated the protective effects of apigenin against hydrogen peroxide (H2O2)-induced oxidative stress in SH-SY5Y cells. The H2O2 treatment resulted in a significant decrease in cell viability, as well as an increase in lactate dehydrogenase (LDH) release and ROS production compared with the H2O2-nontreated SH-SY5Y cells. However, the cell viability significantly increased in the apigenin-treated group, as well as inhibited ROS generation and LDH release compared with the H2O2-induced control group. To elucidate the protective mechanisms of apigenin against oxidative stress in SH-SY5Y, we analyzed the apoptosis-related protein expression. The apigenin treatment resulted in the downregulated expression of apoptosis-related protein markers, such as cytochrome C, cleaved caspase-3, poly (ADP)-ribose polymerase (PARP), and B-cell lymphoma 2-associated X (Bax), as well as the upregulated expression of anti-apoptosis markers such as B-cell lymphoma 2 (Bcl-2). In this study, we report that apigenin exhibits a neuroprotective effect against oxidative stress in SH-SY5Y cells. These results suggest that apigenin may be considered as a potential agent for neurodegenerative disease prevention.
본 연구에서는 ${O_2}^-,{\cdot}OH$ radical, NO, $ONOO^-$ 자유라디칼을 유발시키는 in vitro assay system과 free radical-induced oxidative stress에 의한 단백질 손상에 대한 진흙버섯속에 속하는 상황버섯 물 추출물의 항산화 효과를 측정하였다. 상황버섯 물 추출물의 ${O_2}^-,{\cdot}OH$ radical, NO, $ONOO^-$ 자유라디칼 억제효과에서는 실험에 사용된 양성 대조물 보다는 낮게 나타났으나 모든 실험계에서 대조군에 비해 뚜렷하게 자유라디칼 소거효과를 나타냈다. 또한 상황버섯 물 추출물은 산화적 스트레스에 의한 단백질 손상 억제효과에서도 대조군에 비해 명확한 저해효과를 나타냈다. 그러므로 상황버섯의 항산화 효과는 상황버섯의 약리학적 효능을 설명하는데 중요한 기초 자료라고 사료된다.
The antioxidant activities of methanol and dichloromethane/acetone extracts of twenty three seaweeds were tested by using 1,1-Diphenyl-2-picryl-hydrazyl(DPPH) at a $100{\mu}g/ml$ concentrations. The dichloromethane/acetone extracts of three seaweeds(Symphyocladia latiuscula, Gloiopoltis furcata, Sagassum thunbergii), were found to be most effective in DPPH radical scavenging activity. The DPPH radical scavenging effect of these seaweeds was Symphyocladia latiuscula(85.82%), Gloiopoltis furcata(82.83%), Sagassum thunbergii(74.05%) in order. These seaweeds were evaluated using the pyrogallol UV-VIS spectrophotometeric method to generate superoxide anion. Among them, the methanol extracts of six seaweeds were showed weak superoxide dismutase-like activities. The dichloromethane/acetone extracts obtained from Symphyocladia latiuscula was fractionated with $CH_2Cl_2$, n-hexane, 15% aq.MeOH, n-BuOH, $H_2O$. The 15% aq.MeOH soluble fraction exhibiting the strongest antioxidative activities was further purified by C18 column flash chromatography and reversed HPLC. The two active principles of Symphyocladia latiuscula were isolated and characterized as 2,3,6-tribromo-4,5-dihydroxybenzyl alcohol(1), 2,3,6-tribromo-4,5-dihydroxybenzyl methyl ether(2).
Adriamycin (Doxorubicin HCl)의 혈관밖 유출에 따른 조직의 손상, 특히 피부괴양 및 괴사 기전을 규명하기 위한 연구의 일환으로 흰쥐 피부세포를 이용한 in vitro 실험에서 adriamycin에 의한 산소라디칼 생성 및 그와 관련된 세포독성 기전으로 지질과산화를 검토하였다. Adriamycin은 흰쥐 태자 피부의 배양세포에서 lactic dehydrogenase(LDH) 유리를 용량 및 시간 의존적으로 증가 시켰으며, NADPH 및 NADH 첨가 조건에서 $superoxide\;anion(O^-\;_2{\cdot})$ 생성을 현저히 증가시켰다. Adriamycin은 지질과산화 반응의 척도인 malondialdehyde(MDA) 생성을 역시 NADPH, NADH 존재하에서 용량의존적으로 증가시켰고, 산소라디칼 제거물질들인 superoxide dismutase (SOD), catalase 및 thiourea와 항산화물질인 butylated hydroxytoluene(BHT), ${\alpha}-tocopherol$은 MDA 생성증가를 현저히 억제하였다. 1, 3,-bis(2-chloroethyl)-1-nitrosourea(BCNU)를 처리하여 산화성 공격에 대한 방어기전의 하나인 glutahione 체계를 억제할 경우 adriamycin에 의한 MDA 생성은 더욱 현저히 증가하였고, 이는 역시 항산화 물질들에 의하여 억제되었다. 이상의 연구성적에서 adriamycin은 산소라디칼 생성의 증가와 그에 따른 지질과산화를 촉진하므로서 피부세포에 손상을 줄 것으로 사료되었다.
본 연구는 가식부위가 20~30%로 과즙 착즙 시 주로 버려지고 있으나 석류의 부위별 추출물 중 가장 항산화성이 우수한 천연식품 소재인 석류 내피를 에탄올로 추출하여 천연항산화제로서의 활용 가능성을 조사하였다. 석류 내피 추출물을 극성이 낮은 용매에서 극성이 높은 용매로 순차적으로 계통 분획하여 항산화능을 분석하였다. 각 측정 방법 별로 항산화 활성에 있어 약간의 차이를 보였으나 전반적으로 ethyl acetate 분획의 항산화능이 높게 측정되었다. DPPH 라디칼 소거활성 측정 결과 ethyl acetate와 butanol 분획물에서 $IC_{50}$이 각각 2.40 ${\mu}g$/mL, 2.88 ${\mu}g$/mL로 기준 물질인 ascorbic acid와 유사한 항산화 활성을 나타내는 것으로 나타났다. Superoxide anion 소거활성에서 ethyl acetate과 butanol 분획물의 $IC_{50}$은 각각 58.94 ${\mu}g$/mL, 61.91 ${\mu}g$/mL로 기준물질인 tannin acid보다 항산화능이 우수하였다. $ABTS^+$ 소거활성에서 ethyl acetate와 butanol 분획물의 $IC_{50}$은 각각 39.26 ${\mu}g$/mL, 40.95 ${\mu}g$/mL로 나타났으며 환원력을 측정한 결과 ethyl acetate 분획물(0.1 mg/mL)의 흡광도가 1.404로 기준물질인 ascorbic acid보다 활성이 높게 측정되었다. SOD 유사활성과 아질산염 소거능에서는 유사한 결과를 나타냈는데 SOD 유사활성은 $42.88{\pm}0.66%$(dichloromethane), $15.43{\pm}0.85%$(butanol), $12.82{\pm}0.68%$(water)이었으며 아질산염 소거능에서 dichloromethane 분획물의 $IC_{50}$은 115.54 ${\mu}g$/mL로 기준물질인 ascorbic acid보다 높게 나타났다. 따라서 본 연구결과 석류 내피 추출물은 높은 항산화 활성을 가지고 있으며, 폐자원으로써 버려지는 석류 내피는 식품첨가물 등의 기능성 소재로의 이용가능성이 있을 것으로 여겨진다.
Antioxidative activities of Chlorophyta and Phaeophyta in Jeju Island were measured by superoxide anion ($O_2^{{\cdot}-}$), hydroxyl radical ($HO^{\cdot}$), hydrogen peroxide ($H_2O_2$) and DPPH free radical scavenging assays. Methanolic and aqueous extracts of the seaweeds were prepared at both temperatures, higher (70$^{\circ}C$) and room temperature (20$^{\circ}C$), and screened for the construction of an extract bank from seaweeds in Jeju Island. A variety of extracts showed positive effect against reactive oxygen species (ROS). Especially, Sargassum thunbergii methanolic extract at 70$^{\circ}C$ (70ME, 97.41%), S. fulvellum methanolic extract at 20$^{\circ}C$ (20ME, 84.66%), Codium fragile aqueous extract at 70$^{\circ}C$ (70AE, 96.61%) and S. thunbergii 20ME (97.44%) exhibited the highest scavenging activities against $O_2^{{\cdot}-}$, $HO^{\cdot}$, $H_2O_2$ and DPPH free radicals, respectively. Total phenolic contents also examined but did not show a positive correlation with ROS scavenging abilities (except for a few extracts). These results indicate that further investigation is needed to identify and purify the responsible antioxidative components.
Kim, Ji Hyun;Kim, Hyun Young;Lee, Sanghyun;Cho, Eun Ju
농업과학연구
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제45권4호
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pp.761-767
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2018
Degenerative diseases are commonly associated with excess free radicals. Acer okamotoanum, a plant endemic to Korea, is reported to have anti-oxidant, anti-cancer, and anti-viral activities. We previously isolated flavonoids from the ethyl acetate fraction of A. okamotoanum such as quercitrin (QU), isoquercitrin (IQ), and afzelin (AF). In the present study, the in vitro antioxidant activity of flavonoids such as QU, IQ, and AF isolated from the ethyl acetate fraction of A. okamotoanum were investigated by measuring the free radical scavenging activity including 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH), hydroxyl radical ($^{\cdot}OH$), and superoxide anion ($O_2{^-}$). The flavonoids (QU, IQ, and AF) concentration-dependently showed a DPPH radical scavenging activity. In particular, QU and IQ showed a higher DPPH radical scavenging activity than that of AF. In addition, the flavonoids (QU, IQ, and AF) at $10{\mu}g/mL$ showed over an 80% scavenging effect against $^{\cdot}OH$ radical production. Furthermore, the $O_2{^-}$ radical scavenging activity of the flavonoids, QU, IQ, and AF increased in a dose-dependent manner. Particularly, IQ exerted the strongest scavenging activities against $^{\cdot}OH$ and $O_2{^-}$ radicals among the other flavonoids. These results indicate that the flavonoids from A. okamotoanum, in particular IQ, would have a protective activity against oxidative stress induced by free radicals, and potentially be considered as a natural antioxidant agent.
프로폴리스에서 분리한 MDQ 및 quercetin의 작용기에 따른 항산화 효과를 비교 분석하고 방사선 조사에 의한 DNA의 산화적 손상에 있어서 두 화합물이 어느 정도의 방어효과가 있는지를 측정 하고자 하였다. 두 화합물의 항산화 활성 시험(DPPH 라디칼 소거활성, 지질과산화 억제활성, superoxide anion 라디칼 소거활성)에서 quercetin이 MDQ보다 훨씬 강한 항산화 활성을 보였으며, 특히 superoxide anion라디칼 소거활성 시험에서 MBQ는 거의 활성을 보이지 않았지만 quercetin은 농도 의존적인 강한 소거활성을 보였다. 또한, mouse 림프구에서 방사선 조사에 의한DNA의 산화적 손상에 대한 두 화합물의 방어효과 시험에서 MDQ와 Quercetin은 동일 농도에서 거의 유사한 방사선 방어효과가 관찰되었다. 상기의 결과로부터 두 화합물의 작용기를 고려해 볼 때 B ring에 있는 catechol작용기의 존재 유무에 따라서 항산화 활성의 차이가 있으며 또한 MDQ화합물의 C ring에 존재하는 methoxy group은 quercetin에 존재하는 hydroxy group과 비교해 볼 때 항산화를 비활성화시키는 작용기의 하나로서 판단되어진다. 따라서 본 실험의 결과로 미루어 볼 때 방사선 방어 효과는 항산화 활성에 미치는 메카니즘과 유사하게 작용하는 것으로 판단되어지며 아울러 일차적으로 항산화 활성 물질을 검색함으로써 산화적 스트레스에 의한 DNA에 대한 방어물질 검색 수단으로서 유용할 것으로 사료된다. 이상의 결과로부터 프로폴리스는 산화적 스트레스에 대한 경감제로서 그 가능성이 시사되었다.
어유의 산화에 의한 DNA 손상작용기구를 밝히는 연구의 일환으로 고등어에서 추출한 지질을 다시 극성 및 비극성지질로 분획하여 이들을 각각 plasmid DNA와 $37^{\circ}C$에서 반응시키면서 이들 지질의 산화에 의한 DNA 손상작용을 $1\%$ agarose gel 전기영동을 통하여 조사하였는데 그 결과를 요약하면 다음과 같다. 극성지질을 DNA와 반응시킨 경우에는 가장 적은 농도에서도 DNA 손상작용이 크게 나타나 반응 l일째에 Form I DNA가 완전히 절단되어 Form II 및 Form III DNA로서 검출되었다. 극성지질의 산화에 의하여 그 농도가 증가함에 따라 POV의 증가가 빠르게 이루어졌으나 반응 4일동안 POV가 100 millieq./kg 이하에서 DNA 손상작용이 일어나는 것을 알 수 있었고, 한편, 극성지질의 산화에 의한 DNA 손상작용에 대한 활성산소종의 영향에서는 총지질의 경우처럼 일중항산소 $^1O_2$와 superoxide anion ${\cdot}O_2^1$의 영향이 가장 컸으며 수산 radical${\cdot}OH$과 과산화수소$(H_2O_2)$는 그다지 뚜렷한 영향을 나타내지 않았다. 비극성지질의 경우에서도 극성지질과 마찬가지로 농도에 따라 DNA 손상능이 커졌으나 극성지질과 총지질에 비하여 그 정도가 훨씬 떨어지는 것을 알 수 있었으며, 이상의 DNA 손상작용에 대한 활성산소종의 영향에 있어서도 극성지질과 동일한 경향을 나타내었다.
Yao, Cheng Wen;Piao, Mei Jing;Kim, Ki Cheon;Zheng, Jian;Cha, Ji Won;Hyun, Jin Won
Biomolecules & Therapeutics
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제21권5호
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pp.349-357
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2013
6'-O-galloylpaeoniflorin (GPF) is a galloylated derivate of paeoniflorin and a key chemical constituent of the peony root, a perennial flowering plant that is widely used as an herbal medicine in East Asia. This study is the first investigation of the cytoprotective effects of GPF against hydrogen peroxide ($H_2O_2$)-induced cell injury and death in human HaCaT keratinocytes. GPF demonstrated a significant scavenging capacity against the 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) free radical, $H_2O_2$-generated intracellular reactive oxygen species (ROS), the superoxide anion radical ($O_2^-$), and the hydroxyl radical (${\cdot}$OH). GPF also safeguarded HaCaT keratinocytes against $H_2O_2$-provoked apoptotic cell death and attenuated oxidative macromolecular damage to DNA, lipids, and proteins. The compound exerted its cytoprotective actions in keratinocytes at least in part by decreasing the number of DNA strand breaks, the levels of 8-isoprostane (a stable end-product of lipid peroxidation), and the formation of carbonylated protein species. Taken together, these results indicate that GPF may be developed as a cytoprotector against ROS-mediated oxidative stress.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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