LAMP (Loop-mediated Isothermal Amplification)법은 PCR를 기반으로 등온에서 autocycling 가닥 변위 DNA 합성에 의존하며, Bst polymerase를 사용하여 진단하는 방법이다. 이것은 대상 DNA의 여섯 개의 배열을 인식하는 4개의 특정 primer의 도움을 받아 단시간 안에 병원체를 식별하는 높은 특이성을 지니고 있다. 본 연구에서는 LAMP로 수생에서 위험한 병원체인 Vibrio alginolyticus의 특별한 LAMP primer를 제작하였으며, 신속한 진단을 위해 MgSO4, dNTP, Betaine, Bst polymerase의 최적 반응 조건의 특이성 및 기존의 PCR보다 10배 정도의 민감하다는 것을 확인하였다. 또한, 디자인 되어진 LAMP primer가 다른 Vibrio 종들 중 오직 V. alginolyticus에서만 반응한 것을 확인 할 수 있었다. 본 논문에서는 병원체 세균인 V. alginolyticus의 빠르고 민감한 효과적인 진단으로 양식 질병들을 조기에 발견할 수 있도록 개발하였다.
식물성 생약재의 항균력과 활성산소(superoxide anion, $O_2^-$)의 생산에 미치는 in vitro 효과를 조사하여 금후 in vivo 실험에 적용할 때, 어류 체내 자연 저항성 증진을 꾀할 수 있는 식물성 생약재를 발굴하기 위한 기초자료를 얻고자 하였다. 식물성 생약재는 고삼, 귀전우, 구절초, 박하, 방풍, 연교, 약쑥, 지유, 삼백초, 삼지구엽초, 상백피, 소회향, 편축, 팔각 등 14종류로 이들을 열수추출하여 실험에 사용하였다. 항균력 시험에는 어병세균 Listonella anguillarum(Vibrio anguillarum), Vibrio sp., Vibrio alginolyticus, Edwardsiella tarda, Streptococcus sp., Lactcoccus garvieae를 대상으로 disk법을 사용하였으며, 활성산소의 생산능은 넙치 신장 대식세포를 이용한 nitroblue tetrazolium(NBT) 반응으로써 조사하였다. 그 결과,약쑥이 다른 생약재에 비하여 시험에 사용된 어병 세균에 대한 항균활성이 월등히 뛰어났으며, 또한 넙치 대식세포의 활성산소 생산능을 크게 자극하는 효과가 있음을 확인할 수 있었다.
The use of antibiotics in aquaculture raises environmental and food safety concerns because chronic exposure of an aquatic ecosystem to antibiotics can result in the spread of antibiotic resistance, bioaccumulation of antibiotics in the organisms, and transfer of antibiotics to humans. In an attempt to overcome these problems, high-concentration red clay was applied as an alternative antibiotic against the following common fish pathogens: Aeromonas salmonicida, Vibrio alginolyticus, and Streptococcus equinus. The growth of A. salmonicida and V. alginolyticus was retarded by red clay, whereas that of S. equinus was promoted. Phase contrast and scanning electron microscopy analyses confirmed the attachment of red clay on cell surfaces, resulting in rapid gravitational removal and cell surface damage in both A. salmonicida and V. alginolyticus, but not in S. equinus. Different cell wall properties of grampositive species may explain the unharmed cell surface of S. equinus. Significant levels of oxidative stress were generated in only the former two species, whereas significant changes in membrane permeability were found only in S. equinus, probably because of its physiological adaptation. The bacterial communities in water samples from Oncorhynchus mykiss aquacultures supplemented with red clay showed similar structure and diversity as those from oxytetracycline-treated water. Taken together, the antibiotic effects of high concentrations of red clay in aquaculture can be attributed to gravitational removal, cell surface damage, and oxidative stress production, and suggest that red clay may be used as an alternative for antibiotics in aquaculture.
Lincomycin as one of the lincosamides antibiotics have been mainly used in human and livestock fields, but have not been used in aquaculture. In this study, the distribution of minimum inhibitory concentration (MIC) values against lincomycin and the detection of the macrolide-lincosamide-streptogramin (MLS) resistance gene were confirmed in bacterial pathogens isolated from cultured olive flounder (Paralichthys olivaceus). Of the 107 strains isolated from Jeju, 36 strains of Gram-positive bacteria and 71 strains of Gram-negative bacteria were identified. Most of Streptococcus spp. was found to have a MIC value of less than or equal to 0.5 ㎍/mL, and Edwardsiella piscicida was found to have a MIC value higher than 1,024 ㎍/mL. V. harveyi and V. alginolyticus mostly showed MIC values of 256 ㎍/mL, but V. scophthalmi displayed values of 8~64 ㎍/mL. In the detection of MLS resistance gene, erm(B) was detected in 9 strains of Streptococcus spp., and erm(A) was confirmed in one strain.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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