This study was carried out to immunologically characterize Bacillus thuringiensis (B.t) antigens. Protein patterns of ultrasonicated- antigens of B. thuringiensis subspecies using SDS- PAGE revealed marked similarities among all the strains analyzed except for the difference between quantative variations of bands and some protein antigens. The comparison of the protein patterns showed that the protein antigen of 45 kilodalton (kd) was common in 11 strains and that the difference between B. thuringiensis subsp. canadensis and galleriae was noticed in quantative variations of bands despite of ambiguous serogrouping, suggesting a useful method for identification. All strains examined showed similar antigenic patterns in SDS-PAGE, while immunodominant bands differed in antigenic reactivity in western blot using polyclonal antibodies. Polyclonal antibody to B. thuringiensis subsp. thuringiensis and israelensis in indirect immunofluorescence assay reacted with flagella and cell surface antigens. The present study indicates that SDS-PAGE and western blot analysis may be used as tools for differentiation and identification of B. thuringiensis subspecies.
KIM, MYUNG HEE;SUN TAEK SHIM;YOUN SOON KIM;KYU HANG KYUNG
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제12권3호
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pp.497-502
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2002
Thirty-nine strains of Leuconostocs found to be tolerant to $10\%$ or more garlic were selected for further identification, by comparing their whole-cell protein pattern, 16S rRNA gene (first 530 bases) sequence, cellular fatty acid composition, and carbon source metabolism. Two isolates were Identified as Leuconostoc mesenteroides and 32 others as Leuconostoc citreum. Five other strains belonging to a cluster could not be allocated to the existing species. 16S rRNA gene sequence and cellular fatty acid composition of the unidentified bacteria exhibited close similarity with Leuconostoc argentinum. The unidentified isolates were not allocated to L. argentinum, because they formed polysaccharide from sucrose, while L. argentinum strains do not. Leuconostocs tolerant to high concentration of garlic were found predominantly on garlic surface, an extreme environment which is unfit for most of other microorganisms.
Thirtythree strains of the Aspergillus spp. isolated from foodstuffs were observed through some physiological characteristics for detection of identification key of Aspergillus spp. 1) Each strain of Aspergillus spp. had their specific characteristics and could be used for identification of species. 2) Excellent amylase-producing fungi were observed among the isolated strains of Aspergillus spp. 3) Amylase activities increased for one week incubation period. 4) In the tests of common characters of aflatoxin-producing fungi among the 33 strains of Aspergillus spp., for example, conidial size, presence of sclerotia, kojic acid, and pigment production, coloration of phenol, reduction of methylene blue, etc.
Jarocki, P.;Podlesny, M.;Wasko, A.;Siuda, A.;Targonski, Z.
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제20권3호
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pp.558-562
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2010
SDS-PAGE of extracted surface-associated proteins of Lactobacillus rhamnosus strains E/N, Oxy, and Pen, was performed. The obtained protein patterns allowed differentiation of the examined strains, which was not accomplished by the commonly used RAPD genotypic method. The differentiation by the SDS-PAGE method proved to be a useful tool for strain-specific identification, which was further confirmed by 2DE analysis. Therefore, it can be used as an alternative or complementary method for both conventional and genotypic identification procedures, especially when closely related lactobacilli isolates are identified.
Aspergillus을 이용하여 생리적 제 성질을 조사하였던 바 다음과 같은 결론을 얻었다. 1)각 균주들은 각각 그들의 특성을 가지고 있었으며 이로서 균동정의 가능성을 나타내었다. 2)Amylase측정결과에서 보면 비교적 역가가 높은 균주들이 관찰되었으며, 이는 일주간의 배양시간의 경과에 따라 역가가 증가하였으나 protease의 역가는 우수한 균주를 발견키가 어려웠다. Iodine의 착색대와 비착색대의 비율에 의한 역가의 정성적인 측정이 가능하였다.
For isolating and identifying Bifidobacterium spp. originating from Korea, feces were sampled from healthy Korean infants nursery school and postpartum care center. Through the use of gram staining and microscopic examination for cell morphology, 87 bacterial strains presumed to be the Bifidobacterium strains were isolated from 59 Koreans. To identify the Bifidobacterium strains at the genus level, these bacteria were then analyzed using the TLC method. As a result, 29 of the isolated strains were confirmed as members of the genus Bifidobacterium. 29 Bifidobacterium strains were tested acid, bile salts and oxygen tolerance and investigated antioxidative effect specially. And determined the superiority of 5 strains out of 29 Bifidobacterium strains. Finally, the selected bifidobacterium was identified with using designed 16S-ITS rDNA primer.
For the inspection of the occurrence situation of porcine pleuropneumonia and serotyping of Actinobacillus pleuropneumoniae strains isolated from lung lesions of pig in Korea, a series of experimentation have been carried out by the isolation and identification of A pleuropneumoniae, serotyping by coagglutination test, observation of lung lesion and clinical signs from 360 cases of porcine pneumonia in Clinical Pathology Laboratory, Bayer Veterinary Medical Research Institute. The results could be summarized as follows. The reaction of coagglutination between the reference antigens and the specific reagents of A pleuropneumoniae was strongly agglutinatied within 30 seconds without cross reaction. The 89 strains of A pleuropneumoniae were isolated from 360 cases of porcine pleuropneumonis and the biochemical properties of the isolates were same as the reference strains. The 89 isolated strains could be serotyped 39 strains as setotype 5, 34 strains as serotype 2, 8 strains as serotype 3, 2 strains as serotype 7 by coagglutination test, respectively. The clinical signs of pleuropneumonia were weakness, fever, anorexia, dyspnea and laboured breath in the later stages. The gross lesions of lung were haemorrhages, enlargement of interlobular septa, nodular formation and adhesion of the pleura.
Yeast, like many other microbes, encounters large variations in ambient pH in their natural environments. Microorganisms capable of growing over a wide pH range require a versatile, efficient pH homeostatic mechanism protecting intracellular processes against extremes of pH. In several organisms, fusions to the bacterial lacZ gene have been extremely useful for the identification of genes expressed at different time during the life cycle or under different growth conditions. In this study, using the lacZ gene screening system, we surveyed a large number of yeast strains with lacZ insertion to identify genes regulated by pH. A yeast genomic library was constructed and inserted with lacZ by a shuttle mutagenesis procedure. The yeast transformants were individually picked up with a toothpick, replica-plated, and grown in alkaline pH medium. Among the 35,000 colonies screened, 10 candidate strains were identified initially by the $\beta$-gal assay. We finally confirmed two yeast strains carrying the genes whose expression are strictly dependent on pH of growth medium. One of the fusions showing a 10-fold induction in expression level in response to alkali pH was selected and further characterized. The pH-regulated gene was cloned by inverse PCR and a partial sequence of the gene was determined. Identification and characterization of the gene is currently under investigation.
DNA-DNA hybridization method with four oligonucleotide-specific probes was used simultaneously for differentiation and identification of four Mycobacterium species (Mycobacterium tuberculosis, M. avium, M. intracellulare, and M. kansasii). This DNA-DNA hybridization method with 4 oligonucleotide-specific probes, which targets in the rpoB region of 4 Mycobacteria species, respectively, was tested on 322 clinical isolates. Using DNA-DNA hybridization method, we detected M. tuberculosis (282 strains), M. avim (7 strains), M. intracellulare (9 strains), and M. kansasii (3 strain) from 322 clinical isolates. This result was compared with conventional biochemical test and rpoB DNA sequence analysis of this clinical isolates. We confirmed identification of Mycobacterium tuberculosis, M. avium, M. intracellulare, and M. kansasii with high sensitivity (100 %) and specificity (100 %). This DNA-DNA hybridization method could be performed within 4 hours at least. Therefore, we suggest that DNA- DNA hybridization method using 4 rpoB DNA probes of Mycobacteria could be used for accurate, rapid, convenient detection and identification of Mycobacterium tuberculosis, M. avium, M. intracellulare, and M. kansasii in clinical samples.
A total of 41 Salmonella (S.) strains were isolated from pigs suffered with severe watery diarrhea and were tried to identify by both matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry (MALDI-TOF MS) and polymerase chain reaction (PCR) analysis. Fibrinous exudate and ulceration in the large intestine were prevalent in gross observation, and variable degrees of enteritis were observed in the histology of large intestines. Subsequent polymerase chain reaction (PCR) analyses demonstrated that 41 strains were identified as S. Typhimurium (39 strains), though 2 stains were failed to identify. Further identification was performed using both direct smear and protein extraction method by MALDI-TOF MS analyses. In terms of extraction methods, 100% (41/41) of isolates were identified to species level of S. spp. Whereas only 43.9% (18/41) were identified to species level using the direct method. These results thus suggest that rapid and accurate diagnosis of porcine salmonellosis can be guaranteed by MALDI-TOF MS combined with protein extraction method.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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