Nuclear distribution within the extra-radical fungal structures and during spore production in the arbuscular mycorrhizae fungus Glomus intraradices was examined using an in vitro monoxenic culture system. A di-compartmental monoxenic culture system was modified using a nitrocellulose membrane and a coverglass slip for detailed observations. Nuclear distribution was observed using the fluorescent DNA binding probes SYBR Green I and DAPI. Both septate and non-septate mycelial regions were observed, but cytoplasmic contents were only found within non-septate mycelia. Nuclear fluorescent staining revealed that the non-septate hyphal region contained nuclei only with cytoplasm, and that nuclear distribution was limited by septa. Swollen hyphal bodies were often associated with septate and empty-looking hyphae. Cytoplasmic contents filled the swollen hyphal body from the non-septate hyphal region following removal of the septa. As a consequence, the swollen body developed into a new spore. These observations provide understanding about the distribution of AM fungal nuclei within extra-radical mycelia and during spore formation. The results suggest a mechanism by which the development of a cytoplasm-containing mycelium is controlled by the formation or removal of septa to efficiently maintain and proliferate essential contents. This mechanism may provide a survival strategy to the fungus.
A method for inoculum production of Botryosphaerisa dothidea was developed using cucumber disks and cereal media. Disks of cucumber fruits, and cereal media of barley, wheat, and rice seeds were inoculated with mycelial plugs of B. dothidea and incubated at 27$^{\circ}C$. Pycnidia were produced on the surface of cucumber disks and seeds after 5 days of inoculation. When the inoculated barley seeds were immersed in sterilized distilled water for 5 minutes, abundant conidia of B. dothidea were exuded from mature pycnidia. Conidia were held together by mucilage as they were released from an ostiole. Compared with the conventional method for inoculum preparation using agar media, such as potato-dextrose agar and oatmeal agar, this method could minimize the tedious work required for inoculum preparation within a shorter period of time.
Four arbuscular mycorrhizal fungal(AMF) inocula collected from three arable sites in Korea were used to determine plant growth, mycorrhizal root colonization rate and spore production in three different host plant species; Sorghum bicolor, Allium fistulosum, Tagetes patula. Growth of plant treated with AMF differed from those without AMF. Different AMF inocula showed significantly different root colonization rates and spore production of AMF on the wild plants, A. fistulosum and T. patula, but did not on the cultivated plant, S. bicolor. Results suggested that indigenous mycorrhizal fungal community would be important factors in mycorrhizal symbiosis, and play important roles in the plant succession.
Sexually compatible heterothallic haploids and diploids therefrom of Saccharomycopsis lipolytica were compared with respect to production. Diploids constructed through mating were confirmed by random spore analysis, whereas those constructed through protoplast fusion were confirmed by haploidization. ATCC 44601 and IFO 1209 produced larger amount of citrate and isocitrate than IFO 1550 and IFO 1551. A mode of citrate production by diploids was intermediate of the parental haploid strains. The specific activities of citrate synthase and isocitrate lyase in IFO 1550 and IFO 1551 were higher than those in ATCC 44601 and IFO 1209, indicating little correlation between citrate production and specific activities of these enzymes.
The principal objective of this study was to determine the optimal liquid culture conditions in shake flasks for maximal sporulation of Beauveria bassiana. The optimal initial pH for the spore production of B. bassiana using Potato Dextrose Broth was 5.2. The screening in shake flasks of carbon and nitrogen sources resulted in the identification of an optimal medium based on 3% sucrose and 1% casamino acid, with a C : N ratio of 22 : 4. Using this medium, a production level of $5.65{\times}10^7$ spores per ml was obtained after 5 days of culture. Using 3% corn meal, 2% corn steep powder, and 2% rice bran, the maximum spore concentration of $8.54{\times}10^8$/ml was achieved 8 days after inoculation at $25^{\circ}C$ in a rotary shaking incubator operated at 200 rpm. This represents a yield gain of approximately 2.89 times that of pre-optimization.
Biological control of soilborne plant pathogens by the addition of antagonistic microorganisms to the soil may offer a practical supplement or alternative to existing disease management strategies that depend heavily on chemical pesticides. Soil amendment with antagonistic microbes was non-effective because of high cost, low efficacy, and inconvenient usage on the treatment course. Therefore, seed coating formulation for the application of biological seed treatments has been being to apply successful disease suppression for many important crops. The objectives of this study were to investigate the optimal condition for the spore production of biocontrol agent Bacillus subtilis YBL-7 and the liquid coating formulation that contained a suspension of a proper aqueous binder, as well as a ground fine solid particulate material. The maximum yield has been obtained from 60 hrs-old culture at 30$\circ$C in spore forming (SF) medium containing 0.8% nutrient broth, 0.05% yeast extract, 10$^{-1}$ M MgCl$^{2}$, 10$^{-4}$ M MnCl$^{2}$, 10$^{-5}$ M dipicolinic acid, and pH 6.5. The optimal condition of dried spore preparation was achieved when cells of B. subtilis YBL-7 was heat-dried with 50$\circ$C for 2 hrs.
In India, disposal of vegetable market waste along with municipal solid waste in landfills or dumpsites is creating much nuisance in terms of odor nuisance, leachate production, and greenhouse gas emission into the atmosphere. Therefore, vegetable waste with high biodegradable and nutrient content is composted in a 550-L batch scale rotary drum composter to study the degradation process and its compost properties for its potential reuse as high quality compost. A total 150 kg of working volume was fixed for composting studies with two different ratios, trial A (6:3:1) of C/N 24 and trial B (8:1:1) of C/N 30, respectively. A maximum of $63.5^{\circ}C$ and $61.2^{\circ}C$ was observed in trials A and B; an average of $55^{\circ}C$ for more than 5 days, which helped in the degradation of organic matter and reduction of total and fecal coliform. The temperature dropped suddenly after the thermophilic stage in trial B, and leachate was observed due to insufficient amount of bulking agent. Mesophilic bacteria dominated during the initial stages of composting, and reduced considerably during the thermophilic stage. During the thermophilic stage, the rise in spore-forming organisms, including spore-forming bacteria, fungi, actinomycetes and streptomycetes, increased and these were predominant until the end of the composting process. By examination, it was observed that moisture and leachate production had adverse effects on the compost parameters with higher loss of micronutrients and heavy metals.
Chemical mutagenesis of basidiospores of Hypsizygus marmoreus generated new mushroom strains. The basidospores were treated with methanesulfonate methylester, an alkylating agent, to yield 400 mutant monokaryotic mycelia. Twenty fast-growing mycelia were selected and mated each other by hyphal fusion. Fifty out of the 190 matings were successful (mating rate of 26.3%), judged by the formation of clamp connections. The mutant dikaryons were cultivated to investigate their morphological and cultivation characteristics. Mutant strains No. 3 and No. 5 showed 10% and 6% increase in fruiting body production, respectively. Eight mutant strains showed delayed and reduced primordia formation, resulting in the reduced production yield with prolonged cultivation period. The number of the fruiting bodies of mutant No. 31, which displayed reduced primordial formation, was only 15, compared to the parental number of 65. Another interesting phenotype was a fruiting body with a flattened stipe and pileus. Dikaryons generated by mating with the mutant spore No. 14 produced flat fruiting bodies. Further molecular biological studies will provide details of the mechanism. This work shows that the chemical mutagenesis approach is highly utilizable in the development of mushroom strains as well as in the generation of resources for molecular genetic studies.
This study has been aimed to determine the ecological factors with relationship to the Jongkok production in view of fermentation technology by means of some strains, Asp. kawachii, which is now preserved by the author and the following factors are included during the study; inorganic salts, nitrogen, sugar, water contents and temperature. The results, are as follows: (a) Sugar among other above-mentioned factors is increasingly affecting the number of the short type of conidiophore on culture medium and the conidiophore is increased by direct ratio until glucose concentration of 50%, at which concentration is mostly effective for the short type of conidiophore, while other factors did not affect on it. (b) Until glucose concentration of 50% sugar component of culture medium is favorable for the spore formation of Asp. kawachii by direct ratio. And peptone or asparagine on nitrogen medium, calcium-phosphate among other inorganic salts, wheat bran and rice branare also favorable, but other factors rientioned earlier show no relationship with the spore formation. Sugar, however, also related with the spore color clearness of crimson and light brown, and spore color is mostly clear at the point of glucose concentration until 50%. And asparagine on nitrogen medium, calcium phosphate among other inorganic salts, rice bran did all affect on the color clearness, while other factors did not concern with color clearness. (c) Water, sugar and temperature have related with the acid formation which is promoted, by direct ratio at the point of water-saturated condition and glucose concentration of 50%, while temperature at $25^{\circ}C$favorably affected on the acid formation which is increased by inverse ratio at the temperature$25^{\circ}C$ to $45^{\circ}C$ And pH did not relate with the acid formation. (d) Cylindrical plate method devised by the author is mostly favorable for the preservation and isolation of culture, compared with the traditional slant medium method.
A lichen-forming fungus was successfully isolated by discharged spore method from Korean lichen (Hetero-dermia sp.) and cultivated in pure culture. The isolate JR0012 inhibited mycelial growth of several plant-pathogenic fungi. Mycelial growth of the four Pythium spp. tested was completely inhibited. Potato dextrose broth was found to be the medium favorable for large-scale production of antibiotics from the isolate. Anti-fungal substances produced in axenic culture were partially purified. This is the first report in Korea of lichen-forming fungus successfully isolated and which exhibited strong antifungal activity against plant-pathogenic fungi, especially the four Pythium spp..
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[게시일 2004년 10월 1일]
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