The cytokines which is produced by allergen-specific T helper (Th) cells play a pivotal role in the pathogenesis of asthma. Asthma is caused by exaggerated T-helper 2 (Th2)-based immune responses. It is suggested that controlling such Th2-based response is necessary for asthma therapy. The current therapies for asthma focus primarily on control of symptoms and suppression of inflammation, without affecting the underlying cause. So, we examined that anti-asthmatic drugs might have play a certain role in Th2/Th1 balance. Splenocytes isolated from ovalbumin (OVA)-sensitized mice cultured with anti-asthmatic drugs. It is well known that Th2 and Th1 immune responses can balance one another, as Th2 mediators suppress Th1 responses and Th1 mediators similarly inhibit Th2 responses. But salmeterol inhibits both of Th1 and Th2 mediators, which salmeterol is a suppressor of immune responses not only a suppressor of Th2-based immune responses. Aminophylline is a weak suppressor of immune responses. But ipratropium and cromoglycate don't have any suppressor effect to Th2-driven responses. They only have suppressor effect to Th1 immune responses. Salmeterol, ipratropium, aminophylline, and cromoglycate augmented mRNA levels of CRTH2, EP2, and IP2 receptors in OVA-sensitized splenocytes. It is well known that the up-regulation of CRTH2 - $PGD_2$ receptor - results in restraint of eosinophil recruitment and that the increment of IP and EP2 - $PGI_2$ and $PGE_2$ receptor, respectively - may induce the accumulation of cAMP that decrease the effector function of T cells. Moreover salmeterol and cromoglycate increase the mRNA expression of $PGD_2$ synthase. These findings indicate that anti-asthma agents may alleviate the immunological responses that cause the asthmatic diseases.
본 연구는 홍삼추출물(홍삼단)과 생약복합추출물(헤모힘)이 주요 기능성분은 다르지만 면역활성이라는 생리활성 측면에서 동일한 효과를 인정하고 있어서 이들의 병용 처리가 면역세포에 어떠한 영향을 미치는지에 대해 알아보기 위하여 수행되었다. 면역활성능에 관한 평가를 진행하기 위하여 마우스의 골수에서 분리한 미분화 골수세포를 선천면역에서 중요한 역할을 수행하는 대식세포 및 수지상세포로 분화시킨 후 홍삼추출물과 생약복합추출물을 병용 처리하였을 때 대식세포 및 수지상세포의 세포 증식능 및 사이토카인의 분비능이 증가되는 것으로 관찰되었다. 또한 활성화된 탐식(면역)세포의 세포 표면에서 발현되는 CD80과 CD86의 발현과 탐식(면역)세포의 항원제시에 밀접한 관련이 있는 주 조직적합성 복합체(MHC class II)의 발현이 홍삼추출물과 생약복합추출물의 병용 처리구에서 유의적으로 증가되는 것으로 관찰되었다. 또한 후천면역에서 중요한 역할을 수행하는 면역 T 세포가 다량으로 분포하는 비장 조직으로부터 비장세포를 분리하여 홍삼추출물과 생약복합추출물을 병용처리하였을 때 세포 증식능 및 면역활성을 유도하는 Th1 세포가 분비하는 사이토카인의 함량이 증가되는 것으로 나타났다. 이러한 결과로 미루어 볼 때 홍삼추출물과 생약복합 추출물의 병용 처리는 선천면역뿐만 아니라 후천면역에 관여하는 다양한 면역세포의 활성화에 직 간접적으로 다양한 상승작용을 미치는 것으로 사료된다.
본 연구에서는 천연자원 식용 해조류인 톳으로부터 톳의 면역 증강효과를 알아보고자 마우스를 이용한 생체 내(in vivo) 실험 연구를 수행하였다. 톳 열수 추출물을 4주간 격일로 0, 50, 500 mg/kg b.w.의 농도로 마우스에 경구투여한 후 비장세포 증식능과 복강 대식세포에서 분비하는 사이토카인(IL-$1{\beta}$, IL-6, TNF-${\alpha}$) 분비량에 미치는 영향을 검색한 결과 두 농도 모두 Con A나 LPS로 자극 시 대조군에 비해 높은 비장세포 증식능을 보였고, 특히 50 mg/kg b.w. 농도로 투여한 군에서 비장세포 증식능이 최대를 나타내는 것을 알 수 있었다. 또한 복강 대식세포에 의한 사이토카인 분비량을 측정한 결과 LPS 첨가 시 IL-$1{\beta}$의 분비량은 500 mg/kg b.w.의 농도군에서 가장 높은 생성량이 관찰되었다. 이는 LPS를 투여한 군과 투여하지 않은 군에서 모두 동일한 경향을 보였다. IL-6 분비량은 LPS 첨가 시 50 mg/kg b.w.의 농도 투여군에서 가장 높은 생성을 나타냈다. TNF-${\alpha}$의 경우는 50 mg/kg b.w.의 농도로 투여한 군에서 대조군보다 유의적으로 높은 수준의 TNF-${\alpha}$가 분비되었다. 이상의 본 연구에서는 50 mg/kg b.w. 톳 열수 추출물 투여군에서 비장세포 증식능과 IL-$1{\beta}$, IL-6, TNF-${\alpha}$의 분비량을 상승시키는 것을 알 수 있었다. 이처럼 톳 열수 추출물은 마우스 면역계의 조절기전에 작용하여 면역세포 활성을 직접적으로 촉진시키거나 또는 이와 관련된 다른 면역반응에 영향을 미침으로써 면역활성에 효과적으로 작용할 수 있으리라 사료된다. 앞으로 인체에 대한 유용한 검색이 중요한 의의가 있다고 생각되며, 톳에 존재하는 면역활성물질의 순수 분리 및 동정이 계속적으로 이루어져야 할 필요가 있고 작용 기전과 이용에 대한 상세한 연구가 필요할 것으로 사료된다.
Laminaria japonica의 polysaccharides(LP)가 마우스 비장 세포에서 현저한 면역 증강 활성을 보였다. Balb/c 마우스 비장 세포를 mitogen인 Con A, T cell growth factor인 IL-2 및 alloantigen인 anti-C57로 자극한 뒤, LP를 농도별(0.25, 0.5, 1 mg/mL)로 첨가하여 마우스 비장 세포의 증식 활성을 측정한 결과, 비장 세포증식능이 유의적으로 증가함을 확인하였다. 이러한 결과를 근거로 항원 특이적인 세포 독성 T 림프구(CTLs)의 활성과 IL-2에 의해 야기되는 비특이적인 림포카인 활성 살해 세포(LAKs)의 세포독성능을 측정하였다. 작동 세포와 표적 세포의 비율을 10:1로 혼합한 뒤, LP를 농도별로 첨가하여 세포 용해 시 발생되는 LDH를 측정한 결과, 동종 항원 반응 비장 세포의 살해 세포 작용이 유의적으로 증가하였으며, LAKs의 활성 또한 유의적으로 증가함을 확인하였다. 그리고 T 림프구의 활성에 직접적으로 관여하는 IL-2의 생산능을 측정한 결과, LP를 첨가한 경우 농도 의존적으로 IL-2의 생산량이 증가됨을 확인하였다. 이상의 결과로, 참다시마에서 획득한 LP가 마우스 비장 세포의 T 림프구 및 NK 세포의 증식에 영향을 미치는 면역 증강 활성을 가지고 있음을 입증하였다.
HIV 감염 후 AIDS로의 진행과정에서 cytokines의 변화는 필수적인 결과로서 나타나게 된다. 본 연구에서는 AIDS 동물모델을 사용하여 Pyc Cytokines발현에 미치는 영향과 조절 매개체로서 $NF-{\kappa}B$의 관련성 및 작용 기작 확인에 초점을 두었다. LP-BM5 retrovirus에 감염된 C57BL/6 생쥐를 이용하여12주간에 걸친 실험에서Pyc 투여는 Th1과 Th2 cytokines의 혈중농도를 조절하여 murine AIDS로의 진행을 억제하는 데 역할을 하는 것으로 사료된다. 특히 Th2 cytokines의 mRNA 발현을 억제함에 따라 Th1 cytokines의 혈중농도는 상대적으로 증가한 것으로 사료된다. 이러한 결과는 Pyc가 Th2 cytokines을 선택적으로 transcription level에서 조절하고 있음을 의미하고 있다. 또한 Th2 cytokines mRNA 발현 조절은 $NF-{\kappa}B$의 활성화에 의한 것으로 추정된다. 본 연구는 AIDS 동물모델에서 $NF-{\kappa}B$의 조절을 통한 cytokines의 발현 조절의 가능성을 제시함과 동시에 Pyc의 역할에 대해 자료를 제시하고 있다. 또한 향후 murine AIDS 진행 억제제로서의 Pyc의 기작에 대한 일면을 보인 것에 의의를 두고자 한다.
Objectives : Zingberis Rhizoma (ZR) and Glycyrrihizae Radix (GR) have been widely used to prevent or treat allergic diseases. However, relatively little research has been conducted on the immune response to Senggang Gamcho-tang (SG) in a mixture of ZR and GR. The purpose of this study was to determine antiallergic effects of Senggang Gamcho-tang (SG) extracts ZR and GR on activity of murine splenocytes. Methods : This study was performed to investigate the effect of SG in mice, using in vitro experiments. Cells were treated with SG extract (1 ${\mu}g$/ml, 10 ${\mu}g$/ml and 100 ${\mu}g$/ml) plus Con A (2 ${\mu}g$/ml) and ZR (6.6 ${\mu}g$/ml and 66 ${\mu}g$/ml), GR (3.3 ${\mu}g$/ml and 33 ${\mu}g$/ml) respectively for 48 hrs. The production of IFN-${\gamma}$ and IL-4 were determined by ELISA. Results : No toxicity was found in splenocytes treated with SG extract for 48 hrs at the concentration of 0 ${\mu}g$/ml, 1 ${\mu}g$/ml, 10 ${\mu}g$/ml and 100 ${\mu}g$/ml, respectively. The production of IFN-${\gamma}$ increased to 23,968.7 pg/ml (p<0.001) while that of IL-4 significantly decreased to 14.1 pg/m l(p<0.05) only at the SG concentration of 100 ${\mu}g$/ml. With the GR concentration of 33 ${\mu}g$/ml in SG extract, the production of IFN-${\gamma}$ rose to 32,102.2 pg/ml (p<0.001) while that of IL-4 (p<0.05) declined to 34.2 pg/ml. However, there was no significant observation with regard to the effect of ZR on production of IFN-${\gamma}$ and IL-4. Conclusions : This study suggests an antiallergic effect of Senggang Gamcho-tang, which leads to the implication that SG extract may be used to enhance human immune function.
This study was carried out to investigate the anti-cancer effects of Gunbibosinhangam-tang (GBHT I) and Gunbibosinhangam-tang-gamibang (GBHT II, GBHT III) on solid tumor and immune cells. The animals were divided into 4 groups ; Control, no treatment. GBHT I, treatment with GBHT itself. GBHT II, treatment with GBHT increased the quantity of Hedyotis Diffusae twice. GBHT III, treatment with GBHT increased the quantity of Hedyotis Diffusae four times. We investigated the effects of GBHT on proliferation of solid tumor cells (S-180), thymocytes, splenocytes in vitro in order to examine cytotoxicity for S-180 and immuno-stimulating activities. The experiments that is about solid tumor weight and survival rate in tumor bearing mice were performed also. As compared with the control group, treatments with GBHT II and GBHT III suppressed the proliferation of S-180 effectively. Treatments with all experimental groups accelerated the proliferation of thymocytes and splenocytes significantly. In addition, GBHT III was significantly decreased on solid tumor weight and increased on survival rate in tumor bearing mice. Based upon these results, we suggest that GBHT and GBHT-gamibang have both anti-cancer effects for S-180 and immuno-stimulating activities for thymocytes and splenocytes. Therefore, we conclude that GBHT and Hedyotis Diffusae is useful to treat the patients with cancer.
To determine sex of bovine embryos using hamster histocompatibility Y(H-Y) antibodies, bovine compact morulae were incubated for 6 hours in TCM199 supplemented with 10% hamster H-Y antiserum and the embryos with developmental arrest were diagnosed as male embryos, while the embryos showing development during the incubation as female embryos. This presumptive embryo sexing was confirmed by polymerase chain reaction(PCR)method. 1. In the result of hamster sperm cytotoxicity test to measure H-Y antibody titer, the rate of dead sperm was considerably lower in H-Y antiserum absorbed with hamster male splenocytes than in H-Y antiserum absorbed with hamster female splenocytes or H-Y antiserum unabsorbed with splenocytes(p<0.01). 2. The rate of oocytes fertilized in vitro and the rate of blastocysts of the fertilized oocytes were 58.5% and 32.4%, respectively. The rate of blastocysts on day 8 was 15.9%, denoting the highest rate during whole culture period posterior to in vitro fertilization (IVF). 3. The bovine 16 cell and compact morulae embryos incubated in the medium supplemented with hamster H-Y antibodies showed 37.1% and 48.9% of developmental arrest which were diagnosed as male, respectively, and rates of redeveloped embryos from the arrested were 24.1% in 16 cell and 44.3% in compact morulae embryos, respectively, denoting higher rate of sex determination and rate of redevelopment in compact morulae than 16 cell embryos. 4. Bovine compact morulae of Korean cattle and Holstein were treated with hamster H-Y antibodies for sex determination and the rates of developmental arrest(diagnosed as male) were 48.4% for Korean cattle and 47.9% for Holstein, respectively. The rates of redeveloped embryos to blastocyst after treatment were 42.6% for Korean cattle and 41.8% for Holstein, respectively, showing no significant differences of sex determination and redevelopment between both breed. 5. The sex determination of bovine embryos(Korean cattle and Holstein) using hamster H-Y antibodies was diagnosed by PCR for confirmation, denoting the rates of 86.1% for Korean cattle and 85.9% for Holstein male embryos, respectively, and the rates of 91.9% for Korean cattle and 90.1% for Holstein female embryos, respectively, with no significant differences of sex determination between both breed. These results indicated that hamster H-Y antibodies can be usable for sex determination of bovine embryos of Korean cattle and Holstein, the viability of bovine embryos was sustained while being cultured in the medium supplemented with hamster H-Y antibodies of appropriate titer and sex determination of bovine embryos by PCR can be feasible for confirmation.
We have previously shown that crude water extract of Euonymus alatus (EA) had strong prophylactic effect against chemically induced-and tumor cell implanted-cancer, and that the mechanisms responsible for its antitumor effects were due to nonspecific enhancement of the NK cell activities and the cell mediated immunity. However, it was unknown that any components of crude extract did work so, since it consisted of several components. In this paper, we fractionated the crude watar EA-extract into several fraction such as hexane-, ethylether-, ethyl acetate-, n-butanol- and water soluble-fraction, and screened the immune regulating activities of each fraction by the evaluation of lymphokine production and activated lymphocyte proliferation. As a result of the component fraction of EA-extract, it was found that n-butanol fraction was a potent immunostimulator, and the remained water soluble fraction also contained some stimulator, But, other fraction did not showed any remarkable effect. It is therefore suggested that EA-glycosides in n-butanol fraction may be new one of the potent biological response modifiers. The present study was also undertaken in an efforts to investigate the effects of elm-bark(EB, Ulmus clavidiana var japonica), which has been used for curing ulcer and inflammation as a folk medicine without any kind of experimental evidence to support this, on the cellular- and humoral-immune responses, lymphocyte function and NK cell activities in mice. Regardless of time and duration of EB-treatment, Arthus reaction and antibody response to SRBC were not modified by EB, but delayed hypersensitivity to SRBC was significantly enhanced only when EB was treated prior to SRBC-sensitization. EB slightly inhibited the proliferation responses of splenocytes to PHA-stimulation, but it significantly augmented the responses of these cells to S aureus Cowan 1 and Con A-activation, and these effects were manifested only when EB was added at culture initiation. EB did not influence Ig secretion of spleen cells but it significantly augmented the Con A-induced 1L 2 and MIF production of splenocytes. NK cell activities of splenocytes were markedly riled when effector cells were pretreated with EB and this augmentation was dine to the increase of binding affinity of effector cells to target cells and the target cell lytic activities of effector cells. These results led to the conclusion that EB triggers increase of cellular immune responses, such as delayed hypersensitivitiy, lymphokine production and NK cell activities. Also these results suggested that EB contains potent immune stimulants, which may provide the rational basis for their therapeutic use as one of the new biological response modifiers.
본 연구는 자소엽 조다당 추출물(PCP)의 면역활성에 관하여 알아보기 위하여, 선천면역계의 대표적인 면역세포인 수지상세포 및 후천면역계의 대표적인 면역세포인 비장세포에 PCP를 처리하여 면역세포의 면역활성능에 관하여 측정하였다. 수지상세포에 PCP를 1, 5 및 $10{\mu}g/mL$의 농도를 처리한 결과, 세포생존율이 $103.4{\pm}3.8$, $108.8{\pm}2.1$, $117.8{\pm}3.3%$ (n =3)로 나타나 세포독성을 유발하지 않았으며, 주요 면역활성 인자인 산화질소의 분비능을 관찰한 결과, 각각 $2.7{\pm}0.2$, $4.5{\pm}0.2$, $7.3{\pm}0.3{\mu}M$ (n =3)로 농도 의존적으로 나타났다. 농도(1, 5 및 $10{\mu}g/mL$)별 PCP 처리구에서 사이토카인의 분비능을 관찰한 결과, TNF-${\alpha}$ ($372.3{\pm}0.32$, $604.8{\pm}0.54$ 및 $954.2{\pm}1.32pg/mL$), IL-6 ($508.4{\pm}0.39$, $761.5{\pm}1.34$ 및 $1038.5{\pm}1.67pg/mL$), IL-$1{\beta}$ ($314.5{\pm}1.04$, $524.8{\pm}1.89$ 및 $664.8{\pm}0.89pg/mL$), IL-12 ($321.4{\pm}0.94$, $832.5{\pm}0.85$ 및 $901.{\pm}0.94pg/mL$)가 유의적으로 증가되는 것으로 관찰되었다. 또한 후천면역에서 중요한 역할을 수행하는 면역 T 세포가 다량으로 분포하는 비장 조직으로부터 비장세포를 분리하여 PCP를 처리하였을 때, 세포 증식능이 유의적으로 증가하였으며, 면역활성을 유도하는 Th1 세포가 분비하는 사이토카인의 함량 또한 유의적으로 증가되는 것으로 나타났다. 이러한 결과로 미루어 볼 때 PCP의 처리는 선천면역뿐만 아니라 후천면역에 관여하는 다양한 면역세포의 활성화에 직간접적으로 관여하는 것으로 사료된다. 본 연구는 자소엽조다당 추출물의 면역활성 유도 효과에 관한 가능성을 제시하였고, 향후 자소엽 조다당 추출물을 분리 및 정제과정을 통하여 구조분석 및 정제된 조다당 추출물의 정확한 면역활성과 면역활성기전에 관한 면밀한 연구가 필요할 것으로 사료된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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