Cryclohexylarnine(CHA)에 의한 부정근 억제가 spermidine 과 spermine에 의한 부정근 형성 회복에 미치는 영향을 알아 보고자 대두 자엽 절편을 이용하여 조직내의 polyamine함량을 조사하였다. 부정근 형성 배지에 CHA를 처리한 결과 $10^{-2}$ M CHA 처리시에는 spermidine이나 spermine을 혼합처리함에도 불구하고 부정근이 형성되지 않았다. 또한 2.5 $\times$$10^{-3}$ M CHA 단독처리시에는 부정근 형성이 억제되었으나, $10^{-4}$ M spermine 혼합처리시에는 부정근 형성능이 회복되었다. Putrescine 함량은 부정근이 형성돠지 않았던 $10^{-2}$ M CHA 단독 처리구 및 $10^{-2}$ M CHA와 $10^{-3}$ M Spermine 혼합처리구에서는 배양 3일 이후 대조구보다 감소하였지만 부정근이 다소 형성되었고, 부정근 회복능이 가장 높았던 2.5 $\times$$10^{-3}$ M CHA와 $10^{-4}$ M spermine 혼합처리구에서는 대조구보다 높은 함량을 나타내었다. Spermidine 함량은 모든 처리구에서 대조구보다 낮아서 함량이 낮을수록 부정근 형성이 억제되었으며, spermine의 함량은 대조구에 비하여 모든 처리구에서 급격히 증가되어 대조구에 비하여 함량이 높을 수록 부정근 형성이 억제되었다.
We have purified and characterized a deoxyribonuclease from zygotes of the eukaryotic green alga, Chlamydomonas reinhardtii and investigated effects of the polyamines, putrescine, spermidine and spermine on the purifed endonuclease-catalyzed cleavage of plasmid DNA. The enzyme has a molecular weight of about 37 kDa as measured by gel filtration and SDS-polyacrylamide gel electrophoresis. There is no requirement for a divalent cation. The activity is sensitive to ionic strength, as NaCl and KCl result in inhibition. The cleavage of plasmid DNA by the purified endonuclease was effectively inhibited by polyamines. The enzyme activity was inhibited more effectively by spermine than by spermidine. The inhibition by putrescine was lower than the other two polyamines.
Hoffmann, George R.;Fitzpatrick, Jennifer L.;Soron, Gabrielle J.;Willett, Christine J.
한국독성학회:학술대회논문집
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한국독성학회 2001년도 International Symposium on Dietary and Medicinal Antimutgens and Anticarcinogens
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pp.101-102
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2001
Antimutagens, including diverse compounds of botanical origin, offer some promise of reducing the risk posed by exposure to mutagens. Caution is warranted, however, as there may sometimes be a delicate balance between antimutagenic effects and potentiating effects of the same compounds. We studied effects of the antimutagens spermidine (SPD) and cysteamine (CSM) on the genetic activity of the radiomimetic cancer chemotherapy drug bleomycin (BLM).(omitted)
대두의 자엽을 제거한 유식물에서 polyamine과 methylglyoxal bis(guanylhydrazone)(MGBG)가 diamine oxidase의 활성에 미치는 영향을 조사하여 다음과 같은 결과를 얻었다. $10^{-2}\;M$의 putrescine, spermidine과 spermine을 처리하였을 때에는 diamine oxidase의 활성이 약 80% 억제되었으나, $10^{-6}\;M$의 putrescine을 처리하였을 때에는 효소의 활성이 증가되었다. 이는 기질 특이성이 큰 putrescine에 의해 diamine oxidase가 유도될 수 있다고 사료된다. MGBG의 농도가 증가함에 따라 putrescine 함량이 증가되었다. In vitro에서 diamine oxidase의 활성은 $10^{-3}\;M$의 MGBG에서 약 40% 억제되었다. In vivo에서 diamine oxidase의 활성은 저농도의 MGBG에서 증가되었는데, 이는 MGBG가 putrescine으로부터 spermidine 형성을 억제하여 이로 인해 축적된 putrescine이 putrescine으로부터 spermidine 형성을 억제하여 이로 인해 축적된 putrescine이 diamine oxidase를 유도하는 것으로 사료된다. 반면, 고농도의 MGBG에서는 diamine oxidase의 활성이 감소되었다. 따라서 고농도의 MGBG에 의해 putrescine의 함량이 증가하는 것은 MGBG가 putrescine을 분해하는 diamine oxidase의 활성을 억제하는데 기인하는 것으로 사료된다.
Polyamine이 Agrobacterium rhizogenes에 의해 유도된 시호(Buplerum falcatum L.)의 모상근 배양 에 미치는 영향을 알아보고자 하였다. Polyamine을 처리하여 현탁배양했을 때 대조구에 비해 생체중량 과 건조중량을 모두 증가시 켰으며, 특히 spermme ($10{\mu}M, 100{\mu}M$) 처리구에셔는 약 7배 이상 증가시 켜 시호모상큰 배양에 가장 효과적이었다. 또한 polyamine을 처리하여 시호모상근을 현탁배양한 후 내재 polyamine을 측정한 결과 putrescine($10{\mu}M, 100{\mu}M$) 처리구와 spermine ($10{\mu}M$) 처리구에서 대 조구보다 putrescine, spermidine, spermine의 함량 이 상대적으로 높게 나타났다. Polyamine에 의한 ${\beta}$-glucan synthetase II 의 활성은 대조구에 비해 증 가시켰으며, 특히 spermidine(100$\mu$M)과 sperm me ($100{\mu}M$) 처리구에서는 각각 180%, 220% 정도의 효소활성을 촉진시켰다. 이러한 결과는 polyamine이 생장조절물질로서 시호모상근 배양에 중요한 인자로 작용할 수 있음을 시사해 주었다.
산화적 스트레스에 의한 망막 색소상피 세포의 손상 및 퇴화는 시력 소실을 포함한 다양한 망막질환의 원인으로 알려져 있다. 본 연구에서는 천연물 유래 14종 단일 성분과 합성 화합물 2종을 대상으로 망막질환 개선 가능성을 평가하기 위해, 사람 유래 망막 색소상피 세포를 대상으로 산화적 스트레스에 의한 세포 손상에 대한 보호 효능을 평가하였다. 그 결과, 16종의 후보물질 중 H2O2에 의해 유발된 세포독성을 개선시키는 효능을 보인 5종(auranofin, FK-509, hemistepsin A, honokiol 및 spermidine)을 선별하였다. 이를 기반으로 H2O2에 의한 미토콘드리아 기능 손상 및 활성 저하 억제능을 평가하였으며, auranofin을 제외한 4종에서 유의한 세포 보호 효능이 관찰되었다. 더불어 H2O2에 의해 유도된 DNA 손상에 미치는 영향을 조사한 결과, FK-506, honokiol과 spermidine이 DNA 손상을 개선시켰음을 확인하였다. 그러나 5종의 후보물질이 활성 산소종의 생성에는 뚜렷한 억제 효능을 나타내지 않았으며, 이는 5종의 후보 물질이 ROS-비의존적 기전을 통해 세포 보호효과를 나타낼 것으로 사료된다. 이상의 결과를 바탕으로, 조사 대상 후보물질 중에서 spermidine이 산화적 스트레스로부터 망막 색소상피 세포의 보호 효능이 가장 우수한 천연물 유래 단일 물질임을 규명하였으며, 동시에 합성물질로는 FK-506이 망막 세포 보호 효능이 우수한 것으로 나타났다. 비록 작용 기전에 대한 추가 연구가 필요하겠지만, 본 연구 결과는 spermidine과 FK-506이 산화적 스트레스에 의한 망막질환의 위험을 억제할 가능성이 있음을 시사한다.
Exogenous putrescine of 0.5 mM or higher concentratons applied during a 16 h inductive dark period could elevate putrescine content in cotyledons of Pharbitis nil Choisy cv. Violet, a short-day plant, resulting in complete blocking of photoperiodic floral induction. Titers of putrescine, spermidine and spermine in the cotyledons were traced throughout a 16 h dark period. While non-induced cotyledons under continous light slightly increased levels of polyamines, induced tissue maintaiend its putrescine, spermidine and spermine levels as low as 66.4%, 60.9% and 84.9% of non-induced levels respecitvely. Endogenous polyamines kept at lower levels in the inductive dark period were found to upsurge by a night break treatment of 10 min light in the middle of the dark and consequently the inductive dark effect was canceled. Elevation of polyamine titers could also be induced by 100 $\mu$L/L ethylene treatment which completely suppressed floral induction. Compared to untreated cotyledons, ehtylene-treated tissues increased putrescine content by as much as 136.5% in 12 h and spermidine level by up to 130.1% in 8 h. Ethylene-treated cotyledons not only increased endogenous polyamine content but also liberate ethylene in the second half of the inductive dark period accumulating up to three to fourfold level supporting a hypothesis that ethylene-treated tissues are stimulated to produce ethylene which in turn accelerates polyamine biosynthesis in the tissues. It is postulated that substantially low polyamine titers in the inductive dark period would be one of the necessary factors controlling photoperiodic induction of flowering in Pharbitis nil and the inhibitory effects of night break and exogenous ethylene treatment may be atributed to their action to stimulate endogenous polyamine production.
Methylobacterium extorquens AM1 growing on methanol as a sole source of carbon and energy was found to grow most rapidly (t$t_{d}$ =6h) at 30.deg.C in a mineral medium (pH 7.0) containing 0.5% (v/v) methanol which was agitated at 200 rpm (optimal cultivation condition). Cells grown under the optimal cultivation condition contained more spermidine, but less putrescine, than the cells grown on 2.5%(v/v) ( $t_{d}$ =8h ) or at 20.deg.C ( $t_{d}$ =8h ). Cells cultivated under the optimal condition was found to contain more spermidine than the cells grown at pH 6.0 (( $t_{d}$ =7h ) and pH 8.0 ($t_{d}$ =7.3h). the cells growing at the stationary phase under the optimal condition accumulated more spermine or putrescine than the cells growing at the same phase on 2.5%(v/v) methanol or at pH 6.0 and pH 8.0, respectively. M. extorquens AM1 grown in a medium agitated at 100 rpm ( $t_{d}$ =8.8h ) contained less spermidine and spermine than the cells grown under the optimal cultivation condition.
소맥 종자의 발아 과정중 strontium의 생리적 작용을 규명하기 위해 초엽, 종근 및 배유에서의 free amine의 함량변화가 측정되었다. $GA_3$를 포함한 배양액에 strontium 농도의 증가는 종근에서의 putrescine과 초엽에서의 spermidine의 축적을 현저히 유발하였다. $10\;{\mu}M$ 정도의 저농도에서도 strontium에 의한 putrescine 증가는 뚜렷한 반면, spermidine 증가는 10 mM의 고농도 처리에서 현저했다. 종근 생장을 억제하는 1mM 내지 10mM의 strontium 농도에서, g 생체중당 putrescine 수준은 동일농도 calcium 처리에서 보다 각각 22.4배와 15.3배 높았다. 특히 putrescine과 spermidine 증가에 의한 총 free amine 수준의 중가는 생체중 대비 뿐만이 아닌 RNA 함량 대비에서도 중요한 생리적 반응으로 보여졌다. Strontium과 대조적으로 고농도 calcium (10 mM) 처리는 초엽과 종근에서의 agmatine과 cadaverine 함량의 증가를 유발했다. Cadaverine은 calcium을 처리했을 경우에만 검출되었다. 그러나 $1\;{\mu}M$ 에서 1 mM 수준의 calcium 처리는 총 free amine 함량의 감소를 가져왔다. Strontium과 calcium 존재하에서의 발아과정중 축적되는 amine 종류의 차이와 총 free amine 중 diaminine 비율과 총 free amine 중 Polyamine 비율의 변화는 strontium과 calcium 간의 생리적 대사반응의 차이중 하나로 판단되었다.
참돌꽃 (Rhodiola sachalinensis A. Bor) 현탁배양에서 salidroside 생산성을 개선하고자 auxin인 NAA와 cytokinin인 BA와 kinetin, 그 외에 $GA_3$, TDZ, zeatin, spermine과spermidine을 조합하여 조사하였다. NAA/BA 조합은 NAA/kinetin조합과 비교했을 때 생장과 salidroside 함량이 증가하였다. Salidroside 함량의 증가에 의한 생산성 ($64.6{\pm}8.9$ mg/L medium)은 1 mg/L. NAA와 5 mg/L BA가 첨가된 $2B_5$ 배지에서 높게 나타났으며, 최대 salidroside 의 생산성은 1 mg/L NAA, 5 mg/L BA와 1 mg/L $GA_3$이 첨가된$2B_5$ 배지에서 $90.3{\pm}8.34$ mg/L로 나타났다. 그 밖의 TDZ. zeatin, spermine과 spermidine 처리에서는 생산성에 있어서 증가를 보이지 않았으며, spermidine의 경우에 약간의 유의적인 생산성 증가를 보였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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