We investigated the most effective pre-treatment processes and LC/MS/MS condition for microcystins analysis. With a step-by-step pre-treatment, efficiencies of several established methods were compared. At the level of cell burst, sonication method was found to be the most efficient. As a mycrocystins first extraction solvent, 5% acetic acid showed the highest efficiency. An isolation and recovery rate of mycrocystins of ODS Sep-Pak $C_{18}$ cartridge was higher than HLB SPE cartridge. As a final elution solvent from cartridge, 100% MeOH had a better efficiency than others. Using a LC/MS/MS, effective analytical methods were established. C18 reverse column was used and gradient elution was performed with using acetonitrile, 0.1% formic acid as a mobile phase. We analysed to 0.8 mL/min flow rate fit to the $5{\mu}m$ particle size column and $55^{\circ}C$ housing temperature. The validity of established analytical method was evaluated that MDL as average $0.050{\pm}0.014{\mu}g/L$ and LOQ as average $0.160{\pm}0.045{\mu}g/L$ had a good sensitivity over 40 magnification rather than $2{\mu}g/L$ detection limit of HPLC.
An isotope dilution liquid chromatography tandem mass spectrometry (ID LC-MS/MS) method has been developed and applied to the determination of arsenobetaine (AsB, ${(CH_3)_3}^+AsCH_2COO^-$) from oyster candidate certified reference material (CRM). The exact matching isotope dilution approach was adopted for accurate determination of AsB using $^{13}C_2$-labeled AsB as an internal standard. Efficiencies of different AsB extraction methods were evaluated using a codfish reference material and a simple sonication method was selected as the method of choice for the certification of the oyster candidate CRM. The hydrophilic interaction liquid chromatography (HILIC) combined with electrospray ionization tandem mass spectrometry (ESI/MS/MS) in selected reaction monitoring (SRM) mode was optimized for adequate chromatographic retention and robust quantification of AsB from codfish and oyster samples. By analyzing 12 subsamples taken from each 12 bottles systematically selected from the whole oyster CRM batch, the certified value of AsB was determined as $6.60mg{\cdot}kg^{-1}{\pm}0.31mg{\cdot}kg^{-1}$ and it showed excellent between-bottle homogeneity of less than 0.42%, which is represented by relative standard deviation of 12 bottles from the CRM batch. The major source of uncertainty was the certified value of the AsB standard solution.
영지버섯(Ganoderma lucidum)으로부터 영양 및 기능성 성분의 열수추출 수율을 증대시킬 수 있는 방법을 개발하기 위하여 추출 전처리 및 방법의 효과를 비교, 검토하였다. 영지를 분쇄하여 사별하고 초음파와 마이크로파 처리를 10분 동안 실시한 후 물을 용매로 상압 및 가압추출을 각각 2시간 동안 실시하였다. 추출전 전처리를 행함으로서 총당, 단백질함량 및 페놀성물질의 추출수율을 증가시켰고, 유리기 소거능이 증가하는 경향을 보였으며 마이크로파 전처리가 초음파처리 보다 우수한 것으로 나타났다. 또한 상압추출보다 가압추출에 의해 가용성 고형물, 총당, 단백질 및 페놀성 물질의 추출수율이 증대되는 경향을 보였다. 따라서 초음파나 마이크로파 전처리와 가압추출은 영지버섯의 추출효율 향상에 유효한 방법인 것으로 판단되었다.
오가피(Acanthopanax senticosus)로부터 영양 및 기능성 성분의 열수추출 수율을 증대시킬 수 있는 방법을 개발하기 위하여 추출 전처리 및 방법의 효과를 검토하였다. 오가피를 분쇄, 체질$(8\~20\;mesh)$하고 초음파(20 kHz), 마이크로파 (2,450 MHz) 또는 볶음$(180^{\circ}C)$ 처리를 10분 동안 실시한 후 물을 용매로 상압$(100^{\circ}C)$ 추출과 가압$(121^{\circ}C)$ 추출을 각각 2시간 동안 실시하였다. 전반적으로 전처리는 성분들의 추출수율과 유리기 소거능을 증가 시키는 경향을 보였다. 특히, 가용성 고형물, 총당 및 페놀성 물질의 추출수율은 마이크로파와 초음파에 의해, 단백질의 추출수율과 유리기 소거능은 볶음처리에 의해 더욱 증가됨을 보였다. 상압추출보다 가압추출에 의해 가용성 고형물, 총당, 단백질 및 페놀성 물질의 추출수율이 증대되는 경향을 보였다. 이로써 초음파, 마이크로파 및 볶음 전처리 및 가압추출은 오가피의 추출효율 향상에 유효한 방법인 것으로 판단된다.
In view of the potential of replicase protein as a diagnostic reagent for human caliciviruses (HuCVs), we have cloned and over-expressed this gene from the Snow Mountain-like Korean strains in Escherichia coli as a fusion protein with glutathione S-transferase (GST), and described the preliminary antigenic characterization of the recombinant products. Each 470bp fragment corresponding to highly conserved region of RNA-dependent RNA polymerase was generated by RT-PCR from stools of two diarrheal children, cloned in pMOSBlue T-vector, and subcloned between the EcoRI and SalI restriction sites of pGEX-4T-3, a GST gene fusion vector, yielding $pGCV_{pol}$. This construct expressed a Snow Mountain-like HuCV replicase under the control of the IPTG-inducible tac promoter. An extract prepared by sonication of the E. coli cell inclusion bodies bearing $pGCV_{pol}$ products was purified and analyzed by SDS-PAGE. After Coomassie blue staining, it was shown that the recombinant replicase migrated on the gels with an approximate molecular mass of 46.5 kDa, that was subsequently cleaved into a 26 kDa GST fragment and a 20.5 kDa replicase protein upon digestion with thrombin protease. The replicase was recognized on immunoblotting with the sera from symptomatic children with the HuCV-associated diarrhea but not by asymptomatic sera from adults. The results presented the first biological activity of individually expressed HuCV replicase subunit and provided important reagents for diagnosis of HuCV infection.
Korea is one of the countries with a large veterinary antibiotics market, although antimicrobial resistance in bacteria is becoming a serious issue in many countries. The Korean government started to take interest in estimating the effects of livestock manure on rivers and agricultural soils and in monitoring of heavy metals, organic pollutants and antibiotics in the ambient water and soil. In this paper, pre-treatment methods to separate the selected antibiotics from solid samples were reviewed. It is essential to select an efficient and appropriate procedure for pre-treatment due to the high proportion of proteins and organics in biosolid samples. Pre-treatment consists of extraction followed by clean-up. Initially, homogenized samples were extracted by sonication, mechanical agitation or pressurized liquid extraction with methanol/acetonitrile/water mixture under acidic/basic conditions depending on the compound. However, aminoglycosides and colistin were extracted with 5% trichloroacetic acid and HCl, respectively. Since the ${\beta}-lactams$ are easily decomposed in acidic and basic conditions, they were extracted in neutral pH. Filtration with a membrane (pore size, $0.2{\mu}m$) or solid phase extraction with HLB and methanol, as eluents, was normally applied for the clean-up. At least, three different pre-treatment procedures should be adopted to screen all the selected antibiotics in solid samples.
나노입자에 대한 복합재료 수요가 증가되면서 효과적인 나노입자 보강재를 이용한 나노복합재료 제조공정 단순화를 추구하고 있다. 본 연구에서는 나노입자를 활용하여 전도성과 계면 강도를 향상시킨 나노입자 강화유리섬유 소재에 대한 연구를 진행하였다. 탄소계 나노입자의 형상에 따른 유리섬유 표면에 흡착된 나노입자 상태를 FE-SEM으로 분석하였다. 나노입자 코팅층의 내구성을 평가하기 위한 방법으로 초음파 세척과정에 따른 나노입자의 세척 정도를 분석하여 탄소계 나노입자의 형상에 따른 나노입자 코팅층의 내구성을 분석하였다. 동적피로 실험을 통하여 나노입자 강화 유리섬유/에폭시의 계면강도를 나노입자 형상에 따른 차이에 따라 비교하였다. 나노입자 코팅층의 내구성은 단섬유 강화 복합재료시편을 이용하여 분석하였다. 겉보기 강성도 결과와 나노입자코팅층의 전도성 변화를 분석하여 코팅층의 다기능성을 분석할 수 있었다. 판상형의 나노입자 보다는 섬유 형태의 나노입자가 유리섬유 표면에 흡착성이 용이하였다. 계면 내구성 및 안정성에 효과가 있음을 확인하였다.
불연속 탄소섬유-에폭시 복합재의 저항발열 특성에 관한 연구를 수행하였다. 1, 3, 5 wt.% 불연속 탄소섬유가 함유된 복합재 시험편을 초음파 처리와 캐스트 몰딩(cast molding)을 이용하여 제조하였다. 시편에 DC 전류 인가시 발생되는 저항열에 의한 시편의 표면온도 변화를 적외선 카메라를 이용하여 측정하였다. 발열온도를 예측하기 위해서 유한요소해석을 수행하였는데, 실측된 온도와 부합함을 확인하였다. 탄소섬유의 함량과 인가전압이 증가할수록 발열저항에 의해서 발생된 열은 증가함을 확인하였다. 복합재 내에서 균일한 온도분포를 얻기 위해서는 탄소섬유의 분산상태가 중요하며, 대기온과 습도 등 실험환경이 발열온도에 영향을 미치는 것으로 나타났다.
D,L-2-aminothiazoline-4-carboxylic acid(D,L-ATC)로 부터 L-cysteine으로의 bioconversion에 대한 특성을 살펴보았다. Pseudomonas species의 배양중에 D,L-ATC를 첨가하여 균체내에 그 관여되는 효소를 유도, 생성시키고 균체만을 모은 후 파쇄하여 조효소액을 제조하였다. 실험결과, DL-ATC로 부터 L-형의 cysteine 만이 생성되며, 이 반응에 관여되는 효소는 cofactor로서 Mn이온을 필요로 하며, Mn 이온의 첨가에 의해 L-cysteine의 생성량이 수십배 증가되었다. 그러나, 이 효소는 생성물인 L-cysteine에 의해 feedback inhibition을 받았다. 한편, L-cysteine의 분해효소가 조효소액 내에 존재하며 그 효소반응의 저해제없이는 생성된 L-cysteine의 대부분이 분해되었다. 반면, 매우 효과적인 효소저해제인 hydroxylamine의 첨가로 L-cysteine의 분해를 거의 방지할 수 있었다.
본 논문에서는 탄소나노튜브(CNT)와 마이크로 글래스 버블(GB)을 포함한 폴리아마이드 6(PA6) 복합재의 열전 특성을 다뤘다. 복합재에 포함된 GB은 복합재 내에서 큰 공간을 차지하게 되는데, 이때 CNT는 GB가 없는 공간으로 밀려나면서 고밀도로 격리된(segregated) 네트워크를 형성한다. CNT의 분산을 위해, 소니케이션(Sonicatoin)으로 CNT를 분산시킨 PA6, 포름산 용액을 증류수를 이용하여 응고시킨 후 압축성형하여 복합재 판을 제조하였다. 복합재 판의 열전성능을 평가하기 위해서 열전도도, 전기전도도, 제벡계수(Seebeck coefficient) 등을 측정하였고, 최고 0.016의 성능지수를 얻었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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