• Parasites, Hosts and Diseases
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• 제26권3호
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• pp.163-168
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• 1988

스파르가눔증을 혈청학적으로 진단하기 위하여 효소면역측정법을 실시할 경우, 그 민감도와 특이도가 높다고 이미 보고되었다. 실제로 조직기생충 감염이 의심되는 환자에 대하여 특이 IgG항체가를 일상적으로 검사하면 중추신경계 환자중에서 뇌스파르가눔증은 드물지 않게 발견할 수 있다. 그러나 혈청학적 진단에 이용되는 스파르가눔 조항원(조항원)은 조충증(조충증), 유구낭미충증이나 포충증 환자의 혈청과 비특이적인 교차반응을 일으키는 경우가 있다. 이러한 교차반응의 문제를 해결하려면 우선 스파르가눔 항원의 구성 단백질이 환차혈청과 반응하는 양상을 알아야 할 필요가 있다. 이 연구에서는 외과적으로 스파르가눔증을 확인한 환자 15명에서 얻은 혈청이 스파가눔의 생리식염수 추출액의 항원단백질중 어느 분획과 반응하는지 검토하였다. 그리고 뇌유구낭미충증 환자 24명(그중 8명은 효소면역측정법으로 교차반응이 있었음)의 혈청과 교차반응을 일으키는 단백질 분획을 관찰하였다. 스파르가눔충체의 생리식염수 추출액을 10∼15% linear gradient gel에서 SDS-폴리아크릴아마이드 전기영동을 실시하여 단백질대 30개를 구별할 수 있었다. 분리한 단백질(대)를 nitrocellulose 종이에 옮긴후 스파르가눔증 환자 혈청 및 conjugate와 차례로 반응시키고 발색반응을 일으킨 결과 (효소면역 전기영동이적법, immunoblot), 스파르가눔 항원단백질중 29kDa 및 36kDa가 가장 많이 또 가장 진하게 반응한 것이어서 민감하고 항원성이 높은 단백질 분획이라고 판단하였다. 그리고 위의 단백질 이외에도 158kDa, 130kDa, 107kDa, 78kDa, 72kDa, 52kDa, 23kDa, 21kDa, 15kDa 및 6kDa 등에도 반응이 있었다. 유구낭충증 환자 24명의 혈청중 스파르가눔 항원에 혈청학적 교차반응이 있었던 혈청은 36kDa 및 29kDa 단백질에 반응하고 있어 이 단백질이 스파르가눔의 종 특이(종특이)단백질 항원은 아닌 것으로 판단되나 그 성질에 대해서는 앞으로 더 추구할 가치가 있다고 생각한다.

• 한국축산식품학회지
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• 제22권3호
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• pp.259-266
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• 2002

본 연구는 토양으로부터 egg shell membrane(ESM)을 분해하는 미생물 strain 109를 분리 동정하였으며, 분리균이 생성한 keratinase를 정제하고 그 특성을 확인하였다. Strain 109는 16S rDNA 결과 99.9%의 상동성을 가지고 Bacillus licheniformis로 확인되었고, 3% ESM을 함유한 Nitrobacter 203배지에서 B. licheniformis 109를 접종하여 1주일간 배양하였을 때 ESM의 분해율은 약 15%였다. E. licheniformis 109가 생성한 keratinase를 정제하여 SDS-PA-GE로 분자량을 측정한 결과 약 65,000 Dalton이었으며 0.1% gelatin이 함유된 SDS-PAGE에 의해 효소 활력을 확인할 수 있었다. 정제한 keratinase의 PH에 따른 활성과 안정성은 pH 9.0에서 활성이 가장 높았으며 pH 9.0이상에서 안정하였다. 또한, 5$0^{\circ}C$에서 효소활성이 가장 높았으며 온도 안정성은 2$0^{\circ}C$에서 5$0^{\circ}C$까지 안정하였고, 7$0^{\circ}C$ 이상에서는 약 50%의 활력을 상실하였다. keratinase 활성에 금속 이온이 미치는 영향은 CuCl2와 ZnCl2에 의해 약 50% 정도가 저해되었으나 FeSO4에 의해서는 1mM일 때 약 11%, 10mM일 때 약 33%가 증가하였다. 그리고 PMSF에 의해 효소활성이 저해되는 것으로 나타나 B. licheniformis 109로부터 정제한 keratinase는 serine-protease로 사료된다.

• 환경생물
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• 제39권4호
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• pp.445-451
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• 2021

Agrobacterium tumefaciens strain CP4 유래 5-enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthase (EPSPS) 유전자를 포함하는 유전자변형생물체(Living modified organism, LMO)가 개발되었다. 이 같은 LMO는 국내 승인되어 사료용, 식품용, 가공용으로 이용 중이다. 간이면역 검사키트 개발을 위해서는 고효율의 단클론 항체 개발이 필수적이다. 본 연구에서는 대장균 BL21 (DE3)에서 재조합 CP4 EPSPS 단백질을 정제하였으며 SDS-PAGE와 MALDI-TOF MS 분석으로 단백질 특성을 분석하였다. 단클론 항체 제작은 (주)앱클론의 SOP 매뉴얼에 따라 진행하였다. 본 연구 결과 5개의 단클론 항체 클론(2F2, 4B9, 6C11, 10A9, 10G9)를 확보하였다. 5종의 단클론 항체의 효율과 특이도 검정을 위해서 LM 면화 추출액을 이용한 western blotting 분석을 실시하였다. 모든 단클론 항체는 CP4 EPSPS를 함유하는 MON1445와 MON88913을 특이적으로 검출하였으며 비변형 면화 및 타종의 LM 면화에서는 검출되지 않았다. 이러한 결과들을 바탕으로 CP4 EPSPS 단클론 항체는 LMO에 함유된 CP4 EPSPS 단백질을 타겟으로 항체 기반 검출법 개발에 활용될 것으로 사료된다.

• 대한소아치과학회지
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• 제31권4호
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• pp.605-616
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• 2004

아저해농도(亞沮害濃度)란 세포의 성장을 저해하는 최소 저해 농도(minimum inhibitory concentrations; MIC)이하의 농도를 말하는데, 적용된 화학물질의 동력학에 따라 항균물질은 반드시 이러한 농도로 존재하는 시기를 거치게 되며, 아저해농도의 항균물질은 세포의 성장을 저해하지는 않지만 세균의 대사와 성장에 스트레스로 작용하게 되어 세포의 성질과 독력인자 발현에 영향을 줄 수 있을 것이다. 본 연구는 여러 항균물질의 최소저해농도를 결정하고 아저해농도의 항균물질이 존재 시 세포 성질과 독력 인자에 미치는 영향을 알아보고, 치아우식증의 예방에 대한 화학적 접근법의 효용성을 조사하기 위해 계획되었다. 연구대상 세균으로는 mutans그룹 streptococci 중 두 가지 대표적인 세균종인 S. mutans (S. mutans Ingbritt)와 S. sobrinus (S. sobrinus 6715-7)를 사용하였고 화학물질 8종 (Sanguinaria extract; SG. Chlorhexidine digluconate; CHX, Fluoride; F, Propolis; PP, Hydrogen peroxide HP, Triclosan; TC, Sodium dodecyl sulfate: SDS, Cetylpyridinium chloride; CC) 을 단계 희석하여 배지에 첨가하여 최소저해농도를 구하였으며 아저해농도의 항균물질을 배지에 첨가하여 5% $CO_2$ 존재 하에 $37^{\circ}C$에서 배양하여 이러한 항균물질을 첨가하지 않은 배지에서 배양한 세균과 성장속도, 산생성능, 체표소수성, 수산화인회석에의 부착능, glucan생성능, 세균응집능 등을 비교 관찰하였다. 아저해농도의 항균물질은 세포의 성장과 체표소수성, 타액으로 처리한 수산화인회석에 대한 세균의 부착과 glucan합성에 영향을 주는 것이 관찰되었다. 또한 12시간 배양 후 S. mutans와 S. sobrinus 모두에서 대조군에 비해 통계적으로 유의하게 최종 pH가 높게 나타나 산생성능이 억제되는 것이 관찰되었다 (p<0.05). 세균을 proteinase K로 전처리한 경우 처리하지 않았을 때 보다 세균응집역가가 증가하거나 응집이 관찰되지 않았다. 본 연구의 결과에 따르면, 각각의 항균물질은 아저해농도에서도 알려진 작용기전과 유사하게 세균의 성질에 영향을 주었고 이러한 농도에서도 지속적으로 세균을 억제할 수 있었다. 따라서 이러한 항균물질의 사용은 치아우식증의 효과적 예방법의 하나가 될 수 있다

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제31권3호
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• pp.284-291
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• 2003

본 연구는 우리나라의 전통발효식품인 재래간장에서도 혈전용해효소 생산 미생물이 존재할 가능성이 있다고 판단하여, 지역의 재래간장으로부터 혈전용해효소 생산능이 우수한 균주 K42를 최종 선발하였다. 선발된 균주는 B. amyloliquefaciens로 동정되었으며, l2% NaCl 함유된 배지에서도 균생육이 양호하였으며 10% NaCl 농도까지 효소생산이 유지되는 내염성 세균임을 알 수 있었다. 혈전용해효소의 정제는 40% ammonium sulfate로 분별 염석 후 DEAE-Sephadex A-50, Sephadex G-100, Sephadex G-75를 이용하여 단일단백의 효소로 정제하였다. 효소의 활성도는 배양여액에 비해 17.1배 증가하였고, 회수율은 1.1%로 나타났다. Disc-electrophoresis와 SDS-PAGE를 실시하여 분자량 45,000 Dalton의 단일 단백질로 확인하였다. 혈전용해효소의 특성조사에 있어서는 최적 pH는 8.0의 약알칼리성을 나타내었고 안정성에 있어서는 pH 4.0에서 pH 10.0 범위에서 80% 이상의 잔존활성을 나타내었으며, 최적반응 온도는 $50^{\circ}C$로 조사되었고 열 안정성에 있어서는 3$0^{\circ}C$의 온도에서 50분간 열처리시 80%이상 잔존 활성을 보였다. 금속이온of B. amyloliquefaciens K42가 생산하는 fibrinolytic enzyme의 활성에 미치는 영향을 검토한 결과 $Mg^{2+}$ $Cu^{ 2+}$에 대해서는 효소 활성이 증가하는 양상을 보였다. 또한 B. amyioliquefaciens K42가 생산하는 fibrinolytic enzyme은 metallo enzyme의 활성저해제인 EDTA등에 대해서는 15%이하로 효소 활성이 감소되었는데 이러한 효소 활성 저해로 보아 metallo enzyme이거나 활성에 금속이온이 필요한 것으로 추정된다. 그리고 기질인 fibrin과의 친화성을 알아보기 위해 Km값을 측정하였는데 Km값은 2.03 mg/ml 나타났다.

• 한국생물공학회:학술대회논문집
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• 한국생물공학회 2002년도 생물공학의 동향 (X)
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• pp.461-464
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• 2002

화학독립영양미생물 Aeromonas sp. strain JS-l는 호수와 웅덩이의 표층수에서 분리 동정 되었고 분리된 strain JS-1은 에너지원과 탄소원으로써 각각 $H_2$와 $CO_2$를 이용하였다. RubisCO(EC 4.1.1.39)는 Aeromonas sp. strain JS-l으로부터 ammonium sulfate 침전과 DEAE-sepharose CL-6B, gel filtration chromatography 방법으로 정제되었다. RubisCO의 분자량은 gel filtration에 의해 대략 560 kDa임을 확인되었으며, SDS-PAGE에 의해 Large subunit(56 kDa)와 Small subunit(14 kDa)로 구성된 $L_8S_8$구조를 가지고 있음이 확인되었다. Ribulose 1,5-bisphosphate (RuBP), $NaH^{14}CO_3$ 와 $Mg^{++}$의 Km값은 각각 0.25 mM, 5.2 mM, 0.91 mM이었으며, 효소반응의 최적온도는 $50^{\circ}C$였으며, 열 안정성은 $45^{\circ}C$까지 안정하였다.

• 자원환경지질
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• 제45권2호
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• pp.121-135
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• 2012

본 연구에서는 자력선별 토양정화기술 공정에 적합한 토양의 최적 분산 조건을 도출하기 위하여 토성이 다른 중금속 오염토양 2종의 시료(US, JIK)를 대상으로 분산특성 및 중금속 용출 특성을 파악하였다. 분산제로는 인산염(pyrophosphate, hexametaphosphate, orthophosphate), 계면활성제(sodium dodecyl sulfate, SDS)가 사용되었으며, pH = 9~12와 농도변화(1~200 mM)에 따른 토양입단의 분산특성 및 중금속 함량을 파악하고, 효율적인 분산조건을 도출하였다. 분산용액의 pH변화에 따른 토양분산 특성은 입도변화 결과를 통하여 파악할 수 있는데, 분산용액의 pH가 12에 가까워질수록 현탁액의 점토함량이 증가하였다. 이는 pH가 상승함에 따라 PZC(point of zero charge)이상의 pH가 유지되면서 점토입자들이 분산된 상태로 유지된 것으로 여겨진다. 농도변화에 따른 토양분산 실험 결과, 농도가 증가함에 따라서 높은 점토함량을 나타내었는데, 이는 산화철, 산화망간의 PZC보다 높은 분산용액의 pH조건과 분산제의 흡착에 기인한 것으로 판단된다. 토양입자의 분산에 따른 중금속 용출은 pyrophosphate, hexametaphosphate, orthophosphate는 50 mM 이상의 농도에서, SDS의 경우 100 mM이상의 농도에서 비소 용출량이 일정하게 나타났다. 또한, 분산용액의 pH가 증가함에 따라 비소 용출량도 증가하였다. 인산염은 비소와 유사한 화학구조를 지니고 있어 토양입자표면에서 흡착경쟁을 하여 비소의 탈착을 유발하고, 계면활성제는 토양입자표면에 흡착하여 비소가 탈착되는 것으로 파악된다. 분산용액에 따른 분산효과는 pyrophosphate > hexametaphosphate > SDS > orthophosphate의 순으로 나타났다. 결과적으로 분산효율 및 비소용출량을 고려한 최적의 토양분산용액 조건은 pH 11, 10 mM pyrophosphate로 판단된다. 이러한 결과들은 고구배 자력선별 기술을 이용한 토양정화 공정을 최적화하는데 활용될 수 있을 것으로 기대된다.

• Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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• 제23권3호
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• pp.347-354
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• 2010

This study aimed to evaluate effects of 800 W microwave irradiation for 2, 4 and 6 min on chemical composition, antinutritional factors, ruminal dry matter (DM) and crude protein (CP) degradability, and in vitro CP digestibility of canola seed (CS). Nylon bags of untreated or irradiated CS were suspended in the rumen of three bulls from 0 to 48 h. Protein subfractions of untreated and microwave irradiated CS before and after incubation in the rumen were monitored by sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). Microwave irradiation had no effect on chemical composition of CS (p>0.05). There was a linear decrease (p<0.001) in the phytic acid and glucosinolate contents of CS as irradiation time increased. Microwave irradiation for 2, 4 and 6 min decreased the phytic acid content of CS by 8.2, 27.6 and 48.6%, respectively. The total glucosinolate contents of CS microwave irradiated for 2, 4 and 6 min decreased by 41.5, 54.7 and 59.0% respectively, compared to untreated samples. The washout fractions of DM and CP and degradation rate of the b fraction of CP decreased linearly (p<0.001) as irradiation time increased. Microwave irradiation for 2, 4 and 6 min decreased effective degradability (ED) of CP at a ruminal outflow rate of 0.05 $h^{-1}$ by 4.7, 12.3 and 21.0%, respectively. Microwave irradiation increased linearly (p<0.001) in vitro CP digestibility of ruminally undegraded CS collected after 16 h incubation. Electrophoresis results showed that napin subunits of untreated CS disappeared completely within the zero incubation period, whereas cruciferin subunits were degraded in the middle of the incubation period (16 h incubation period). In 4 and 6 min microwave irradiated CS, napin subunits were degraded after 4 and 16 h incubation periods, respectively, and cruciferin subunits were not degraded untile 24 h of incubation. In conclusion, it seems that microwave irradiation not only protected CP of CS from ruminal degradation, but also increased in vitro digestibility of CP. Moreover, microwave irradiation was effective in reducing glucosinolate and phytic acid contents of CS.

• 한국식품저장유통학회지
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• 제21권6호
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• pp.776-783
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• 2014

절단 배추를 예열처리하고 LDPE 필름 포장하여 단기저장하면서 이화학적인 품질특성과 갈변도를 조사하였다. $40^{\circ}C$에서 1, 2, 4, 8시간동안 예열처리한 후 SDS-PAGE 법으로 단백질 밴드를 조사한 결과, 예열처리구에서 대조구에 비하여 HSP 밴드로 추정되는 60, 39, 33, 12 kDa 밴드가 강하게 나타났으며, 이 중 4시간 예열처리구(HS 4)가 가장 발현율이 높았으며 중량감소율도 적었다. 8주 동안 저장 중 예열처리한 절단배추의 중량감소율 및 적정산도는 거의 변화가 없었으며, 가용성 고형분 함량은 4시간 예열처리구가 가장 적게 감소하였다. 갈변도는 HS 4가 가장 적었다(Con>HS 1>HS 8>HS 2>HS 4, p<0.05). PPO활성은 저장 중 모든 구에서 지속적으로 증가하였으며, HS 4가 가장 낮았고 총페놀성 화합물은 모든 처리구에서 유사하게 감소하였다. 예열처리한 절단배추에서 HSP 밴드의 발현을 확인하였으며, 4시간 예열처리구의 단기 저장 효과가 가장 좋았다.

• 한국축산식품학회지
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• 제35권6호
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• pp.721-730
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• 2015

The objective of this study was to examine the effect of ginger extract (GE) combined with citric acid on the tenderness of duck breast muscles. Total six marinades were prepared with the combination of citric acid (0 and 0.3 M citric acid) and GE (0, 15, and 30%). Each marinade was sprayed on the surface of duck breasts (15 mL/100 g), and the samples were marinated for 72 h at 4℃. The pH and proteolytic activity of marinades were determined. After 72 h of marination, Warner Bratzler shear force (WBSF), myofibrillar fragmentation index (MFI), pH, cooking loss, moisture content, sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE), and protein solubility were evaluated. There was no significant (p>0.05) difference in moisture content or cooking loss among all samples. However, GE marination resulted in a significant (p<0.05) decrease in WBSF but a significant (p<0.05) increase in pH and MFI. In addition, total protein and myofibrillar protein solubility of GE-marinated duck breast muscles in both WOC (without citric acid) and WC (with citric acid) conditions were significantly (p<0.05) increased compared to non-GE-marinated duck breast muscles. SDS-PAGE showed an increase of protein degradation (MHC and actin) in WC condition compared to WOC condition. There was a marked actin reduction in GE-treated samples in WC. The tenderization effect of GE combined with citric acid may be attributed to various mechanisms such as increased MFI and myofibrillar protein solubility.