• 제목/요약/키워드: silica-gel column chromatography

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좁은잎천선과 잎 추출물 유래 항산화 활성 성분의 동정 및 효능 확인 (Isolation and Evaluation of Anti-oxidative Constituents from the Extracts of Ficus erecta var. sieboldii King Leaves)

  • 박성환;김정은;염현숙;이남호
    • 대한화장품학회지
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    • 제42권4호
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    • pp.321-328
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    • 2016
  • 본 연구에서는 좁은잎천선과 잎 추출물 및 극성별 용매 분획물의 항산화 활성을 검색하고 유효성분을 분리하여 화학구조를 규명하였다. 좁은잎천선과 잎 추출물 및 용매 분획물의 DPPH 및 $ABTS^+$ 라디칼 소거 활성을 측정한 결과 에틸아세테이트 분획물에서 우수한 라디칼 소거 활성을 확인하였다. 활성이 좋은 에틸아세테이트 분획물에서 유효성분을 찾고자 vacuum liquid chromatography (VLC), silica gel column chromatography를 실시하였으며, 분리된 화합물은 1H 및 13C NMR 데이터 분석 및 문헌치 비교를 통하여 총 5개의 화합물을 동정하였다. 분리된 화합물은 monoolein (1), oleic acid (2), lutein (3), afzelechin (4), catechin (5)으로 확인되었으며 이들은 모두 좁은잎천선과에서 처음으로 분리된 화합물이다. 분리된 화합물에 대한 DPPH 및 $ABTS^+$ 라디칼 소거 활성 실험 결과 afzelechin (4) 및 catechin (5)에서 활성이 우수하게 나타났으며 특히 catechin (5)의 경우 대조군인 비타민 C보다 더 좋은 라디칼 소거 활성이 있음을 확인하였다. 또한 HPLC 분석을 통해 좁은잎천선과 잎에서 분리된 catechin의 함량을 확인한 결과 추출물에서 3.8 mg/g, 에틸아세테이트 분획물에서 20.8 mg/g이 함유되어 있는 것으로 확인되었다. 이상의 연구 결과로부터 좁은잎천선과 잎을 이용한 천연 항산화 소재로의 개발이 가능할 것이라 사료된다.

고추역병균(疫病菌)(Phytophthora capsici)의 생물학적(生物學的) 방제(防除);II. 항균물질(抗菌物質)의 분리(分離) 정제(精製) 및 항균활성(抗菌活性) (Biological Control of Phytophthora Blight of Red-pepper Caused by Phytophthora capsici.;II. Isolation and Antifungal Activity of the Substances)

  • 장윤희;장상문;최정;이동훈
    • 한국환경농학회지
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    • 제15권4호
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    • pp.399-405
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    • 1996
  • 고추역병균(疫病菌)인 Phytophthora capsici에 대한 생물학적(生物學的) 방제(防除)를 위하여 Pseudomonas sp. A-183균주(菌株)의 배양액(培養液)으로 부터 3가지 화합물(化合物)을 분리(分離) 정제(精製)한 후(後) 항균활성(抗菌活性)을 조사(調査)하여 미생물농약(微生物農藥)의 개발(開發)에 대한 가능성(可能性)을 검정(檢定)하였다. 배양여액(培養濾液)을 pH 2로 조정하여 ethyl acetate로 추출(抽出)한 경우에 항균활성(抗菌活性)이 가장 높았으며, 조추출물(粗抽出物) $50mgkg^{-1}$의 농도(濃度)에서도 P. capsici의 생육(生育)을 완전히 억제(抑制)시켰다. 배양여액(培養濾液)으로 부터 백색분말상(白色粉末狀)의 A물질(物質), sticky oil상狀(의) B물질(物質) 및 황색(黃色) 분말상(粉末狀)의 C물질(物質)을 분리(分離) 정제(精製)하였다. A, B 및 C물질(物質)의 P. capsici에 대한 항균력(抗菌力)의 최소저해농도(最小沮害濃度)는 각각(各各) $1mgkg^{-1}$, $5mgkg^{-1}$$5mgkg^{-1}$으로 나타났다. 세가지 물질(物質) 모두 pot시험(試驗)에서 P. capsici에 의한 고추역병(疫病)을 효과적(效果的)으로 방제(防除)하였다.

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Propolis from the Stingless Bee Trigona incisa from East Kalimantan, Indonesia, Induces In Vitro Cytotoxicity and Apoptosis in Cancer Cell lines

  • Kustiawan, Paula M;Phuwapraisirisan, Preecha;Puthong, Songchan;Palaga, Tanapat;Arung, Enos T;Chanchao, Chanpen
    • Asian Pacific Journal of Cancer Prevention
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    • 제16권15호
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    • pp.6581-6589
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    • 2015
  • Background: Previously, stingless bee (Trigona spp.) products from East Kalimantan, Indonesia, were successfully screened for in vitro antiproliferative activity against human cancer derived cell lines. It was established that propolis from T. incisa presented the highest in vitro cytotoxicity against the SW620 colon cancer cell line (6% cell survival in $20{\mu}g/mL$). Materials and Methods: Propolis from T. incisa was extracted with methanol and further partitioned with n-hexane, ethyl acetate and methanol. The in vitro cytotoxicity of the extracts was assessed by the MTT assay against human colon (SW620), liver (Hep-G2), gastric (KATO-III), lung (Chago) and breast (BT474) cancer derived cell lines. The active fractions were further enriched by silica gel quick column, absorption and size exclusion chromatography. The purity of each fraction was checked by thin layer chromatography. Cytotoxicity in BT-474 cells induced by cardanol compared to doxorubicin were evaluated by MTT assay, induction of cell cycle arrest and cell death by flow cytometric analysis of propidium iodide and annexin-V stained cells. Results: A cardol isomer was found to be the major compound in one active fraction (F45) of T. incisa propolis, with a cytotoxicity against the SW620 ($IC_{50}$ of $4.51{\pm}0.76{\mu}g/mL$), KATO-III (IC50 of $6.06{\pm}0.39{\mu}g/mL$), Hep-G2 ($IC_{50}$ of $0.71{\pm}0.22{\mu}g/mL$), Chago I ($IC_{50}$ of $0.81{\pm}0.18{\mu}g/mL$) and BT474 (IC50 of $4.28{\pm}0.14{\mu}g/mL$) cell lines. Early apoptosis (programmed cell death) of SW620 cells was induced by the cardol containing F45 fraction at the $IC_{50}$ and $IC_{80}$ concentrations, respectively, within 2-6 h of incubation. In addition, the F45 fraction induced cell cycle arrest at the G1 subphase. Conclusions: Indonesian stingless bee (T. incisa) propolis had moderately potent in vitro anticancer activity on human cancer derived cell lines. Cardol or 5-pentadecyl resorcinol was identified as a major active compound and induced apoptosis in SW620 cells in an early period (${\leq}6h$) and cell cycle arrest at the G1 subphase. Thus, cardol is a potential candidate for cancer chemotherapy.

초식동물 쓸개즙 추출물의 천연항산화 성분; 생물학적인 기능 및 특성규명 (Natural Antioxidant Activity of Ethanol Extracted from Bovine Bile ; Biological Effects and Characterization)

  • 심재한;박명우;임계택
    • 한국환경농학회지
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    • 제18권3호
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    • pp.221-228
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    • 1999
  • 본 연구에서는 Bovine bile에서 항산화 물질분획을 분리하고 이에 따른 항산화 효소들의 여러 활성효과를 측정하였으며 GC/FID에 의한 항산화성 물질의 패턴을 확인하였다. 항산화력은 Butylated hydroxy toluene(BHT)에 비해 Bovine bile의 EtOAc추출물(BBE)이 51.2%로 나타났고 xanthine oxidase를 측정 48.3%의 저해효과를 보였으며 glutatione-S-transferase의 활성은 85.7%의 활성이 나타났다. MTT방법에 의한 세포생존율의 조사에서는 6mM glutathione 투여에서 95%라는 생존율과 비교하여 20mg, 60mg의 BBE를 처리했을 때 56%와 65%, 140mg처리에서는 78%의 세포생존율이 나타났다. Bovine bile EtOAc추출물을 TLC로 분석한 결과 Rf값이 0.72에서 항산화 활성이 나타났고 이 분획을 methylation과 trimethysilyl(TMS) 유도체화를 시켜서 Gas Chromatography(FID)와 mass spectrum을 통한 성분 분석을 하고 bile acid의 구성분과 비교하여 계통분석을 실시한 결과 Coprostan-3ol로 추정되었다.

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고려인삼의 항암효과에 관한 연구 (A Study on the Antitumor Activity of Panax ginseng)

  • Hwang, Woo-lk
    • Journal of Ginseng Research
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    • 제17권1호
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    • pp.52-60
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    • 1993
  • Panax ginseng has been extensively used in the traditional oriental medicine as a restorative, tonic and Prophylactic agent. Recently, several reports regarding to anticancer effects of Panax ginseng has accumulated. These studies emphasized the fact that the anticancer activities might be due to a glycoside group called ginsenoside or pan.u saponin which has a water soluble characteristic. However, the authors and collaborates demonstrated that a highly lipid soluble component in extract of Panax ginseng roots contains a considerable cytotoxic activities against marine leukemic cells (L1210, P388) and human censer cells (HRT-18, HT-29, HCT48). This study was devised to observe the cytotoxic activities of Petroleum-ether extract of Panax giuseng roots (crude GBD and its Partially Purified fraction from silicic acid column chromatography (7 : 3 GX) against sarcoma-180 (5-180) and Walker carcinosar- coma 256 (Walker 256) in vivo, and murine leukemic Lymphocytes (L1210) and human rectal cancer cells (HRT-18) and human colon cancer cells (HT-29 and HCT48) in vitro. Each cell-line was cultured in medium containing serial concentration of the crude GX or 7 : 3 GX in vitro. A highly lipid soluble compound in the extract of Panax ginseng root was cytocidal to murine leukemic cells and human colon and rectal cancer cells in vitro. In the meantime, ginseng saponin derivatives did not have cytotoxic effects at its corresponding concentration. The growth rates of the cancer cells in medium containing ginseng extracts were inhibited gradually to a significant degree roughly in proportion to the increase of the extract concentration. The cytotoxic activity of 7 : 3 GX was about 3 times more potent than that of crude GX, one unit of cytotoxic activity against L1210 cells being equivalent to 2.54 Ug and 058 Ug for the crude GX and 7 : 3 GX, respectively. The Ri value of the active compound on silica- gel thin layer chromatography with petroleum-ether/ethyl ether/acetic acid mixture (90 : 10 : 1, v/v/v) as a developing so lvent was 053. While, the Panaxydol and Panaxynol as active compounds were purified from Petroleum-ether extract of Panax ginseng root by Drs. Ahn and Kim, and author found out that the one unit of cytotoxic activity of the Panaxydol and Panaxynol against L1210 cells being equivalent to 056 Ug and 0.3918 respectively. The survival times of mice inoculated with S-180 cells were extended about 1.5 to 2 times by the 7 : 3 GX treatment compared with their control group. The significantly decreased hemoglobin values of rats after inoculation with Walker 256 were recovered to normal range by oral administration of the crude Gt The synthetic levels of protein, DNA and RNA in human colon and rectal cancer cells were significantly diminished by treatment with the crude GX, which can explain a part of the origin of its anticancer activity.

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털부처꽃(Lythrum Salicaria L.) 뿌리로부터 항산화 물질의 분리 및 구조동정 (Isolation and Identification of Antioxidant Compound from the Lythrum Salicaria L. Roots)

  • 이경희;이대영;이승은;노형준;이정훈;최재훈;박춘근;김승유;이준수;김금숙
    • Journal of Applied Biological Chemistry
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    • 제57권4호
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    • pp.359-363
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    • 2014
  • 털부처꽃(Lythrum salicaria L.) 뿌리는 실온에서 80% MeOH로 추출하고 이 추출물을 EtOAc 분획, n-BuOH 분획, $H_2O$ 분획으로 나누었다. 2,2-dipicryl-1-phenylhydrazyl (DPPH) radical 소거능을 이용한 항산화 활성을 측정하여 활성 추적 분획(Activity guided fractionation)에 따라 항산화 활성이 높은 EtOAc 분획에 대하여 silica gel 및 octadecyl $SiO_2$ column chromatography를 반복하여 항산화 활성을 나타내는 화합물 1과 major 화합물 2 및 3을 분리, 정제하였다. NMR, IR, 및 MS 등의 spectrum을 해석하여, Myricetin-3-O-${\beta}$-D-glucopyranoside (1), oleanolic acid (2) 및 betulinic acid (3)로 구조를 결정하였다. 화합물 1은 DPPH radical 소거능을 이용한 항산화 활성을 측정 한 결과 $25{\mu}g/mL$ 농도에서 $74.47{\pm}1.64%$의 저해 값을 가지는 것으로 나타났다.

HPLC/DAD를 이용한 6종(種) 우슬(牛膝)의 분류기준 연구;우슬(牛膝)(쇠무릎, Achyranthes japonica $N_{AKAI}$)로부터 20-hydroxyecdysone 분리.동정 및 산지별 우슬의 HPLC 패턴 비교 (A Study on Discriminative Criteria of 6 Kinds of Achyranthis Radix Using HPLC/DAD;Isolation and Identification of 20-hydroxyecdysone from Aclryranthes japonica $N-{AKAI}$ and Comparison of Patterns of Achyranthis Radix from Different Locations by HPLC)

  • 김정희;김종문;강대훈
    • 대한본초학회지
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    • 제23권1호
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    • pp.109-116
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    • 2008
  • Objectives : This study was performed to investigate the discriminative criteria of 6 kinds of Achyranthis Radix by HPLC/DAD. Methods : 20-hydroxyecdysone is isolated by silica gel column chromatography ($CHCl_3$:MeOH, 7:1-1:1 v/v) and identified by nuclear magnetic resonance, A high-performance liquid chromatographic method with diode array detection was used to identify 20-hydroxyecdysone in A. japonica. The analysis was performed using $C_{18}$ column with isocratic elution consisted of 18% acetonitrile and 82% water and the detection was carried out by DAD at 254 nm. 6 kinds of Achyranthis Radix from different locations were extracted in MeOH. Each extracts was analyzed by HPLC in same condition as used in analysis of 20-hydroxyecdysone. The identities of each extracts were determined by comparing the retention time and UV spectrum with that of reference compound. Results : 1. A. japonica and A. bidentata showed the similar patterns of HPLC chromatogram and 20-hydroxycedysone was present in both of them because the peaks having the same retention time and UV spectrum as 20-hydroxyecdysone were shown in the HPLC chromatograms of A. japonica and A. bidentata 2. Cyathula officinalis and C. capitata showed the similar patterns of HPLC chromatogram. The peak having the same retention time and UV spectrum as 20-hydroxyecdysone was shown in the HPLC chromatogram of C. capitata but not shown in the HPLC chromatogram of C. officinalis. 3. Two species of medicinal drugs from Sacheon province showed similar patterns of HPLC chromatogram. Achyranthis Radix from Sacheon(wild) did not have 20-hydroxycedysone but Achyranthis Radix from Sacheon(cultivated) showed the peak having the same retention time as 20-hydroxyecdysone but UV spectrum of the peak was different from that of 20-hydroxyecdysone. Conclusions : These results suggested that 20-hydroxyecdysone could be the discriminative criteria for Achyranthis Radix contain 20-hydroxyecdysone though they belong to different genus and species. And the patterns of HPLC chromatogram also could be the discriminative criteria as the different species of Achyranthis Radix belonging to the same genus showed similar patterns of HPLC chromatogram.

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포도나무 줄기혹병균에 대한 약용식물의 항균활성 및 병발생억제 (In vitro and In vivo Antimicrobial Activities of Medicinal Plants against Crown Gall in Grapevine)

  • 김은수;윤해근
    • 원예과학기술지
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    • 제34권4호
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    • pp.537-548
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    • 2016
  • 항암, 항산화, 항균 활성을 나타내는 9종의 약용식물을 이용하여 포도나무 줄기혹병의 억제효과를 조사하였다. 공시한 식물 중에서 개똥쑥(15mm), 맨드라미의 꽃(27mm)과 잎(13mm), 여주의 미성숙 열매(22mm), 상사화 꽃(7mm), 질경이의 꽃(14mm)과 종자(16mm), 초석잠의 뿌리(13mm), 복숭아 나무의 수지(10mm) 추출물 등이 줄기혹병균(Rhizobium vitis)에 대해 항균활성을 나타내었다. 항균활성의 분획물의 최소억제농도를 확인한 결과 개똥쑥, 맨드라미 잎, 여주 미성숙과 분획물은 각각 50,000배, 질경이 꽃 분획물은 10,000배 희석액이 최소억제농도(MIC)로 확인되었다. 개똥쑥, 맨드라미 꽃과 잎, 여주의 미성숙 열매 추출물의 항균활성물질을 column chromatography와 thin layer chromatography(TLC)를 통하여 분획하였다. 핵산/에틸아세테이트와 메탄올/클로로포름(20:80, v/v)으로 전개한 TLC 분석에서 개똥쑥 추출물에서는 Rf 0.36, 0.69, 0.75, 0.84, 0.94, 맨드라미 꽃 추출물은 Rf 0.96, 0.99, 맨드라미 잎 추출물은 Rf 0.92, 0.97, 여주의 미성숙열매 추출물은 Rf 0.85에서 항균 활성의 분획을 획득하였다. 개똥쑥, 맨드라미 잎, 여주 미성숙 열매 추출물을 물에 희석(500, 1,000, 2,000배)하고 온실에서 R.vitis를 접종한 '거봉' 식물체에 7일 간격으로 관수한 결과, 개똥쑥 희석액은 100%, 맨드라미 잎 추출물(500배 희석액)은 67%, 여주 미성숙 열매 추출물(500배 희석액)은 83.3%의 억제효과를 나타내었다. 이러한 연구 결과는 약용식물 추출물이 포도나무 줄기혹병을 방제할 수 있는 친환경 제제로서의 적용가능성을 제시한 것이라 할 수 있다.

누룩(Rhizopus oryzae KSD-815)으로부터 분리한 지질화합물의 세포독성 및 항염증 활성 (Cytotoxic and Anti-inflammatory Activities of Lipids from the Nuruk (Rhizopus oryzae KSD-815))

  • 곽호영;이상진;이대영;배낙현;정낙훈;홍성렬;김계원;백남인
    • Applied Biological Chemistry
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    • 제51권2호
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    • pp.142-147
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    • 2008
  • Rhizopus oryzae KSD-815를 밀에 접종하여 만든 누룩(Rhizopus oryzae KSD-815)에서 4종의 지질 화합물을 분리하여 화학구조를 동종하였다. 건조된 누룩을 실온에서 80% MeOH 수용액으로 추출하고 이추출물을 EtOAc 분획, n-BuOH 분획, $H_2O$ 분획으로 나누었다. EtOAc분획은 다시 80% MeOH 과 n-hexane 으로 분획하였다. n-Hexane 분획에 대해 silica gel 및 ODS column chromatography를 반복 실시하여 4종의 지질 화합물을 분리, 정제하였다. NMR, IR, GC/MS 등을 통하여 화합물 1(linolenic acid methyl ester), 화합물 2(palmitic acid methyl ester), 화합물 3(linoleic acid), 화합물 4(palmitic acid)의 구조를 결정하였다. 이 지방산 화합물의 세포독성을 평가하기 위해 인체 유래 유방암(MDA-MB-231)과 간암(SK-HEP-1)세포주에 대해 MTT assay를 수행하였다. 두 암 세포주에서 화합물 1(linolenic acid methyl ester)과 화합물 3(linoleic acid)은 농도의존적인 세포독성을 확인하였다. 또 염증반응 매개체의 일종인 nitric oxice(NO)의 생성 억제 활성을 Griess 방법으로 평가한 결과, 화합물 3(linoleic acid)은 LPS와 IFN-${\gamma}$에 의해 유도 된 NO 생성도 저해하는 것을 RAW264.7 세포에서 확인하였다.

효소적 반응을 이용한 비대칭형 1,2-Distearoyl-3-Oleoyl-rac-Glycerol 혼합물의 생성 및 융점 특성 (Enzymatic Interesterification and Melting Characteristic for Asymmetric 1,2-Distearoyl-3-Oleoyl-rac-Glycerol Triacylglycerol Enriched Product)

  • 김진영;이기택
    • 한국식품영양과학회지
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    • 제43권1호
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    • pp.93-101
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    • 2014
  • 본 연구는 대두극도경화유(fully hydrogenated soybean oil, FHSBO)와 oleic ethyl ester를 사용하여 코코아버터 대체유지(CBR)로서 사용가능한 비대칭 유지를 개발하고자 하였다. 생산된 비대칭 유지는 위치별 지방산 및 TAG 조성분석, 흡열 및 발열곡선 분석을 수행하여 특성연구를 진행하였으며, TAG 이성질체 분석과 solid fat index(SFI), slip melting point 측정 결과는 코코아버터와 비교 분석하였다. 위치별 지방산 및 TAG 조성 분석 결과, 최종적으로 생산된 비대칭 유지의 주요 TAG 조성은 SSO/SOS, PSO/POS로 분석되었으며 sn-2 위치의 지방산은 62.5~68.4 area%의 범위로 주로 stearic acid로 구성되어 있음을 확인하였다. 이는 최종 생성물의 TAG 조성이 SOS, POS보다 주로 SSO, PSO와 같은 비대칭형 TAG로 구성되어 있음을 나타내는 결과인 것으로 생각된다. 또한 RP-HPLC/APCI-MS를 이용하여 SSO와 SOS의 TAG 이성질체 분석한 결과, $[SS]^+$ : $[SO]^+$의 비율이 0.54로 분석된 최종 생성물은 0.37로 분석된 코코아버터에 비하여 비대칭형 TAG인 SSO의 함량이 높으나, 대칭형 TAG인 SOS와 함께 공존하여 존재하는 것으로 나타났다. 코코아버터와 최종 생성물 모두 $30{\sim}35^{\circ}C$의 온도 구간에서 급격한 흡열곡선을 나타내어 코코아버터 대체유지로서의 특성을 가지고 있었으나, 최종 생성물은 코코아버터보다 조금 높은 SFI와 slip melting point를 가지는 것으로 분석되었다. 이는 최종 생성물의 stearic acid 함량이 코코아버터보다 높은 것에 기인된 것으로 판단된다.