The optimized in vitro culture system was investigated for improvement of regeneration efficiencies by observing the responses of scutella-derived callus of Korean rice (Oryza sativa L.). Large variations of callus induction (43.9-93.9%) and shoot regeneration (0-88.7%) were observed among the rice cultivars depending on medium. However, shoot regeneration was significantly improved by selected utilization of basal medium, growth regulators, and carbon sources. N6 basal medium was more efficient for embryogenic callus induction than MS or LS basal medium, while MS was superior to N6 for shoot regeneration. The calli of highly regenerative cultivars grew faster and showed higher rates of green tissue formation (GT) and shoot regeneration (SR) and lower rate of callus browning (CB) than those of recalcitrant cultivars. Although a higher level of kinetin stimulated the GT and SR in highly regenerative cultivars, $10\textrm{mgL}^{-1}$ kinetin generally suppressed the GT and SR, while CB was accelerated compared to $2\textrm{mgL}^{-1}$ kinetin. Additional benefits of sorbitol combined with maltose (or sucrose) under $5\textrm{mgL}^{-1}$ kinetin were certainly confirmed on regeneration efficiencies compared to sucrose alone as carbon source and osmotic regulator. This combination showed high rate of GT and SR with multiple shoots while low rate of CB. With MSRK5SM-Pr medium ($5\textrm{mgL}^{-1}$ kinetin, 3% sorbitol, 2% maltose, $500\textrm{mgL}^{-1}$ proline), the regeneration efficiencies of total 17 out of 24 cultivars were practically improved 160% on average compared to MSRK2S ($2\textrm{mgL}^{-1}$ kinetin, 3% sucrose) control medium. Especially, the medium was most effective to the cultivars showing a medium level of regenerability such as Daesanbyeo and Dongjinbyeo and Suwon477, enhancing efficiencies more than 300-600% compared to MSRK2S medium.
This study was carried out to establish a reproducible culture system for callus formation and adventitious shoot development from young stem segments of Vigna radinta, and histological work for orgin of callus tissue and adventitious shoot. Induction of callus from young stem explants of Vigna radiata was very effective on MS inorganic salts supplemented with 0.5 mg/L 2,4-D and 1.0 mg/L kinetin. For the adventitious shoot regeneration from the callus tissues, the hormone combination of 0.75 mg/L NAA, 1.5 mg/L kinetin and MS salts resulted in about 21% efficiency. Histological examination showed that callus tissues originated from out-growths by callus cambium rings with do novo meristematic activities, which were localized at the outside of the vascular cambium. Adventitious shoots were developed from shoot apical meristem originated from the surface of callus masses. The shoot apical meristem produced leaf primordium, which then became leaf.
This study was conducted to obtain some basic information needed for the propagational system of high quality garlic trough the culture of healthy tissues. non shoot-tips of bulbil obtained in mid May were cultured on MS medium containing 8% sucrose supplemented with 0.1 mg/L NAA, in vitro bulbli were formed, but the shoots were formed at the early to middle in June. Multiple shoots were induced by the culture of receptacles on MS medium supplemented with 0.1 mg/L NAA and 10mg/L BA..Among the flower bud, bulbil and receptacle, receptacle showed most suitable in terms of shoot formation efficiency, More than 50 shoots per single involucre were produced under the optimum condition. Results indicate that in vitro culture of involucre has a high potential for the micropropagation of high quality seed bulbs.
The modification of DNA and histone plays an important role for gene expression in plant development. The objective of this research is to observe the effects of methylation on the gene expression during dedifferentiation from rice mature seeds to callus and differentiation from callus to shoots. The embryogenic callus with ability to shoot regeneration was not induced on the N6A medium supplemented with 5-azacytidine and abnormal callus with brown color was formed. When the normal rice callus was placed on the regeneration MSRA medium supplemented with 5-azacytidine, the shoot regeneration was inhibited. The results showed that 5-azacytidine, DNA demethylating agent, had negative effects on normal embryogenic callus formation and shoot regeneration. This suggested that DNA methylation of some genes was required for normal cell dedifferentiation and differentiation in tissue culture. The microarray and $GeneFishig^{TM}$ DEG screening were used to observe the gene transcript profile in callus induction and regeneration on N6A (N6 medium + 5-azaC) and MSRA (MS regeneration medium + 5-azaC). Subsets of genes were up-regulated or down-regulated in response to 5-azaC treatments. The genes related with epigenetic regulation, electron transport, nucleic acid metabolism and response to stress were up and down regulated. The different expression of some genes (germin like protein etc.) during callus induction and shoot regeneration was confirmed using RT-PCR and northern blot analysis.
Proceedings of the Plant Resources Society of Korea Conference
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2003.04a
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pp.131-132
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2003
Leaf discs and apical meristems were cultured in Murashige and Skoog (MS) medium supplemented with cytokinin and auxin at different concentrations. Callus production was observed in all tested media after six days of incubation. Callus produced in the presence of high concentration of NAA (2.0mg/1) was fragile in texture and yellow in colour. Highest callus formation was observed from leaf discs in the medium supplemented with 1.0mg/1 NAA and 0.5 mg/l BAP in dark at $25{\pm}1{\circ}C$. Percentage of callus formation was 95% and mean callus fresh weight was 654.88 43.53 mg. Shoots were induced from the callus after 4 weeks in 1/2MS medium supplemented with BAP and kinetin both at 0.5mg/1. When elongated shoots were separated and transferred into multiplication medium (MS+0.5mg/1 BAP+0.5mg/1 kinetin) multiplication rate was 6.4 after 6 weeks. Higher concentrations of BAP caused callus production at the base. Direct shoot induction was observed from apical meristems in MS medium in the presence of 0.175 mg/1 IAA + 2.25mg/1 BAP and 0.175 mg/1 IAA + 3.0 mg/1 BAP in 16 hour day at $25{\pm}1{\circ}C$. Explants (apical meristems) elongated to form a single shoot forming a callus at the base. Adventitious buds were sprouted out from the base. Percentage explants which producing shoots was 28.57 and 65.5 respectively. Multiple shoot induction was also observed in the same media. Highest multiple shoot production was observed in the presence of 0.175 mg/l IAA and 3.0mg/l BAP, Mean number of shoots per explant was 5.36 and the mean shoot length was $16.66{\pm}4.15$mm. Shoots (20 30m length) were tested for root induction. Excised shoots were transferred into rooting media, which contains different concentrations of NAA and IAA. Best rooting performance was observed in 1/2MS medium supplemented with 0.1mg/1 NAA after 10 days of incubation in 16 hr photoperiod at $25{\pm}1{\circ}C$. Mean number of roots per shoot was 6 and the mean root length was 252mm. Rooted plantlets were transferred into sterile coir dust:sand (1:4) mixture and maintained in a humid chamber for two weeks, They were gradually exposed to the natural environment. After three weeks they were transferred to pots containing coir dust:sand (1:2) mixture for further development where the 90% survival was observed.
A study was under taken to investigate the appropriate explant sources of flower organ and suitable cultural conditions such as light, temperature, and sucrose in plant regeneration of Iris ensata culture. Explants of perianth, ovary, pedicel, and peduncle of Iris ensata were cultured at different daylength (0, 8, 16, 24 hour), different temperatures (10, 15, 25, 3$0^{\circ}C$), and sucrose concentrations (1, 3, 6, 9%) on MS medium. Formation of adventitious roots from explants of Iris ensata was effective in the dark, while that of adventitous shoots was effective in the light. The optimum daylength for young plant regeneration was 16 hours. The optimum temperature for shoot formation of Iris ensata explants was $25^{\circ}C$ but the formation at 10 and 15$^{\circ}C$ was ineffective. Especi-ally, perianth and ovary was effective in shoot formation from flower organ expants. T-he optimum concentration of sucrose for shoots and roots formation of Iris ensata explants was 3 and 6%, respectively.
This research was conducted to get the basic materials necessary to obtain the somatic hybrid plant between Solanum sisymbriifolium and other Solanum species (S. integrifolium and S. toxicarium). Regarding the formation of colony from the protoplast in S. sisymbriifolium, S. integrifolium and the fused protoplast mixture; for the S. sisymbriifolium, a colony was observed in F medium(Kao medium containing $5.0mg{\cdot}L^{-1}\;NAA,\;1.0mg{\cdot}L^{-1}$ 2,4-D and $1.0mg{\cdot}L^{-1}$ BA); and for the S. integrifolium, in G medium (a half strength MS medium containing 0.03 M sucrose, 0.4 M mannitol, $1.0mg{\cdot}L^{-1}\;NAA,\;1.0mg{\cdot}L^{-1}$ kinetin) respectively. In mixed cultured protoplast after electriofusion treatment, the cell division and colony formation were observed in both media F and G. For the shoot and root formation rate, there was no difference between the parent of each breed and mixed protoplast regardless of the medium. In the fused protoplast mixture of S. sisymbriifolium and S. toxicarium, a colony formation was also observed in both media F and H(a half strength MS medium containing 0.03 M sucrose, 0.4 M mannitol, $1.0mg{\cdot}L^{-1}\;NAA,\;1.0mg{\cdot}L^{-1}$ kinetin); and there was no difference in the shoot and root formation rate between the parent and the mixed protoplast.
Morphological characteristic during formation of tobacco crown gall tumor and genetic tumor, and their differential response to growth regulator were investigated in in vitro culture. Crown gall tumor was induced from tumor tissue transformed by infecting Agrobacterium tumefaciens C58. Genetic tumor was induced from tumor tissue which was induced spontaneously from reciprocal interspecific hybrids between Nicotiana glauca (2n=24) and Nicotiana langsdorffii (2n=18). Morphological characteristic of crown gall tumor, genetic tumor, and teratoma shoot was very similar, and they were actively proliferated on hormone-free medium. Typical tumor callus and teratoma shoot formed from crown gall tumor on the hormone-free medium. On the contrary, tumor callus derived from genetic tumor formed as a crown gall tumor callus on the medium supplemented with 0.5 mg/L of 2,4-D, and lots of teratoma shoots without any root formed on the hormone-free medium. Root development from the teratoma shoots was hardly obtained on the medium with IAA, GA and active carbon. However, teratoma shoots with roots, as normal shoots, were initiated occasionally on the hormone-free medium. These shoots also formed new genetic tumor on the stem, which leaves formed lots of teratoma shoot on the hormone-free medium in in vitro culture.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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