플라스틱 비닐을 이용한 톱밥배지를 기반으로 하는 표고 재배방식은 환경문제를 일으킬 수 있다. 본 연구에서는 비닐 대신 플라스틱 용기를 이용하여 표고의 재배실험을 실시하였다. 참나무 톱밥과 밀기울을 4:1 비율로 혼합하여 함수율을 65%로 맞춘 톱밥배지를 분리가 가능한 플라스틱 용기에 입병하였다. 접종한 배지는 배양일, 명배양 광조건 등을 달리하여 80일 또는 120일간 배양하였다. NIFoS 2464 균주에서는 300 Lux의 광도에서 명배양을 진행하였을 경우 배지의 중량감소율이 더 높았고, 빛의 세기는 배지의 중량감소와 연관이 있는 것으로 나타났다. 버섯 발생시에는 발생실의 공기순환 팬 속도를 달리하였다. NIFoS 2464 균주는 암배양 80일, 명배양 500 Lux에서 40일, 공기순환 팬 속도 30 rpm에서 가장 높은 생산량을 나타내었다. 120일 동안 배양된 병 배지의 경우, 명배양을 40일간 진행한 배지에서 생산량이 더 높았다. 암배양을 80일간 진행한 배지의 경우 배지 상면으로의 반복적인 살수작업 및 배양실 내의 빛 자극으로 인해 자실체가 발생하였다. 첫 수확 후 배지의 수축으로 인해 배지는 병으로부터 분리되었다. 분리된 플라스틱 병은 버섯 재배에 재사용할 수 있으며 이를 이용하면 플라스틱 폐기물의 양을 줄일 수 있을 것으로 기대된다.
표고 "수향고"는 Di-mon 교잡에 의해 육성되어 품종으로 등록요건에 적합한 조건시험을 거쳐 품종출원 되었다. 균사생장은 $25^{\circ}$에서 가장 우수하였다. 버섯의 형태는 평반구형의 대엽, 후육으로 갓직경은 약 52mm이고 갓의 두께는 약 17mm이다. 주름살 측면은 평활형이며 주름살 폭은 보통으로 갓과 대의 위치는 중심생이고 갓의 가장자리에 인피가 있다. 도목살수에 의한 버섯발생에 적합한 품종으로 집중발생형이다. 버섯의 발이온도는 $18{\sim}28^{\circ}$로 발생시기가 6월, 8~9월인 고온성 품종이다. 재배시험지에서 4년간 $140kg/m^3$의 표고가 생산되었다.
Kim, Jung-Mi;Yun, Suk-Hyun;Park, Seung-Moon;Ko, Han-Gyu;Kim, Dae-Hyuk
The Plant Pathology Journal
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제29권4호
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pp.460-464
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2013
dsRNA was found in malformed cultures of Lentinula edodes strain FMRI0339, one of the three most popular sawdust cultivated commercial strains of shiitake, and was also found in healthy-looking fruiting bodies and actively growing mycelia. Cloning of the partial genome of the dsRNA revealed the presence of the RdRp sequence of a novel L. edodes mycovirus (LeV), and sequence comparison of the cloned amplicon showed identical sequences sequence to known RNA-dependent RNA polymerase genes of LeV found in strain HKA. The meiotic stability of dsRNA was examined by measuring the ratio of the presence of dsRNA among sexual monokaryotic progeny. More than 40% of the monokaryotic progeny still contained the dsRNA, indicating the persistence of dsRNA during sexual reproduction. Comparing the mycelia growth of monokaryotic progeny suggested that there appeared to be a tendency toward a lower frequency of virus incidence in actively growing progeny.
CRISPR/Cas9 genome editing systems have been established in a broad range of eukaryotic species. Herein, we report the first method for genetic engineering in pyogo (shiitake) mushrooms (Lentinula edodes) using CRISPR/Cas9. For in vivo expression of guide RNAs (gRNAs) targeting the mating-type gene HD1 (LeA1), we identified an endogenous LeU6 promoter in the L. edodes genome. We constructed a plasmid containing the LeU6 and glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (LeGPD) promoters to express the Cas9 protein. Among the eight gRNAs we tested, three successfully disrupted the LeA1 locus. Although the CRISPR-Cas9-induced alleles did not affect mating with compatible monokaryotic strains, disruption of the transcription levels of the downstream genes of LeHD1 and LeHD2 was detected. Based on this result, we present the first report of a simple and powerful genetic manipulation tool using the CRISPR/Cas9 toolbox for the scientifically and industrially important edible mushroom, L. edodes.
Pyogo (Shiitake, Lentinula edodes) is one of the most important edible mushrooms because of its outstanding nutritive and medicinal value. In the registration and protection procedure for newly developed mushroom cultivars, the application of molecular markers that can supplement the morphological characteristic-based distinction has been strongly requested. Sanjo 701 and Chamaram, newly developed at the Federation Forest Mushroom Research Center of Korea, have been characterized as innovative cultivars suitable for customer demands because of their high yields and cultivation rates. However, no technical tools can protect the rights to these important cultivars. In this study, using comparative genomic information from 23 commercially available pyogo cultivars, we identified single nucleotide polymorphisms (SNPs) that accurately differentiated Sanjo701 and Chamaram from the other cultivars. We also developed high-resolution melting analysis (HRM)-based SNP markers that discriminate among the tested 23 pyogo cultivars. The developed SNP markers can be utilized for rapid, accurate identification of pyogo cultivars with low genetic diversity and to prevent cultivar contamination caused by illegally distributed inocula. In addition, these markers can serve as a crucial scientific basis for securing the right to conserve new cultivars in international markets.
본 연구는 표고의 열처리 방법과 냉동 저장 기간에 따른 이화학적 및 영양학적 특성을 분석하였다. 열수 침지 및 과열 증기로 열처리된 시료를 IQF 처리한 후 함기 및 진공 포장으로 24주 동안 서로 다른 온도에서 냉동 저장하면서 시간에 따른 이화학적 특성을 분석하였다. 색도 분석에서는 열수 침지법이 색변화를 감소시켰고, 함기 포장한 시료와 낮은 온도에서 저장한 시료일수록 밝은 색을 유지하였다. 경도와 pH 측정에서는 과열 증기법이 열수 침지법보다 버섯 특성의 변화가 적게 발생하였으며, 영양학적 측면에서도 과열 증기법이 효율적인 방법이라 판단된다.
표고균사에서 갈변시기를 조절하고 확인할 수 있는 유전공학적 시스템을 개발하여 톱밥재배용 표고균주를 조기에 선별할 수 있도록 표고균사가 갈변되는 동안 균사상태에서 특이적으로 발현되는 유전자를 분리하기 위하여 갈변되지 않은 균사와 갈변이 완전히 이루어진 균사에서 differential display를 실시하였다. 그 결과 이들 균사로부터 특이적으로 발현되는 두 개의 1.6kb와 1.2kb의 cDNA clone을 선발하여 염기서열을 분석하였다. 이 중 1.6kb의 cDNA단편은 Dugenia polichroa로부터 분리된 microsatellites 유전자와 100%의 상동성을 나타냈다. 그러나 1.2kb의 cDNA 단편은 3'부위에 poly A tail과 5 부위에 partial open reading frame를 가지고 있어 이를 primer로 제작한 후 갈변되지 않은 균사와 갈변이 이루어진 균사에서 RT-PCR을 실시하여 본 결과 갈변이 되지 않은 백색의 균사에서 발현이 확인되었다. 1.2kb의 cDNA 단편의 5' 부위의 염기서열 분석은 110개의 아미노산으로 구성된 partial open reading frame으로 나타났다. 이 유전자를 DNASIS database에서 상동성을 비교해 본 결과 Arabidopsis thaliata에서 분리된 dTDP-glucose 4,6-dehydratases 유전자와 DNA 수준에서는 66.7%, 아미노산 수준에서는 69.2%의 높은 상동성을 나타내었다. 갈변에 관련된 특이 유전자(BCR gene)를 확인하였다. 이 유전자는 산화 stress에 대해 저항성을 나타내는 기능을 가진 것으로 알려져 있어 표고 균사가 갈변될 때 repressor로서 작용할 것으로 생각된다. 따라서 이 유전자를 BCR (Brown Color Repressor) 유전자라고 명명하였다.
The content of vitamin $D_2$, including its precursor ergosterol, was determined in some cultivated mushrooms to manufacture fortified Doenjang (Korean traditional soybean paste) with vitamin D by supplementation with mushroom. Ergosterol was the most abundant sterol in the mushrooms (50 to 140 mg/100 g dry weight) but the ergocalciferol portion made up only 0.065% (Pleurotus eryngii) to 2.5% (stipe part of Lentinus edodes, shiitake) of the total vitamin $D_2$ of each mushroom. Changes in these compounds in L. edodes caused by UV or solar irradiation were also evaluated. Ergocalciferol content in the pileus part of L. edodes went up to $424\;{\mu}g/100\;g$ dry weight and ergosterol levels reached 139.3 mg per 100 g dry weight at maximum levels. Ergocalciferol content increased about 50% when exposed to solar radiation and increased 377% with UV irradiation. These compounds level in Doenjang was enriched as much as supplied UV irradiated L. edodes powder to before fermentation, and the supplemented mushroom did not influence the palatability of Doenjang.
From fruiting bodies of L. edodes strain L-54, single-spore isolates (SSIs) were collected. Two parental types of L-54 were regenerated via monokaryotization. By means of random-amplified polymorphic DNA (RAPD), DNA samples from L-54, its two parental types, and 32 SSIs were amplified with arbitrary primers. Dedikaryotization was demonstrated, and 91 RAPD-based molecular markers were generated. RAPD markers that were segregated at a 1:1 ratio were used to construct a linkage map of L. edodes. This RAPD-linkage map greatly enhanced the mapping of other inheritable and stable markers [such as those that are linked to a phenotype (the mating type), a known gene (priA) and a sequenced DNA fragment (MAT)] with the aid of mating tests, bulked-segregant analysis, and PCR-single-strand conformational polymorphism. These markers comprised a genetic map of L. edodes with 14 linkage groups and a total length of 622.4 cM.
표고버섯(Lentinus edodes) 균에 의한 졸참나무(Quercus serrata)골목의 미시형태적 변화를 주사형전자현미경 (SEM)을 통해 관찰하였다. 표고 재배 5년후 골목의 중량 감소율은 50%에 달했다. 구성세포중 목섬유는 표고균사에 의해 쉽게 분해되었으나 도관과 유세포는 저항성을 나타냈다. SEM 관찰 결과 표고균사는 세포내강(內腔)에서부터 세포벽을 서서히 분해 박벽화(薄壁化)시켰으며, 또한 Cell corner가 중간층보다 먼저 공격을 받아 분해 되었으나 중간층은 쉽게 분해되지 않았다. 흥미롭게도 연부후(軟腐朽)의 전형적 형태인 2차막에서의 공동(空洞)역시 백색부후균인 표고균사에 의해 형성 되었다. 이상의 관찰결과 표고균은 백색부후와 연부후균이 갖는 미시형태적 특징을 동시에 보여 주었다. 아울러 중간층 보다 Cell corner가 먼저 선택적으로 분해되며, 도관세포벽의 분해저항성을 세포벽 구성 리그닌의 화학적 특성과 연관시켜 논의했다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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