본 연구는 글라디올러스 캘러스로부터의 재분화 조건을 구명함으로써 캘러스 배양시스템을 확립하는데 기여하고자 하였다. 글라디올러스 캘러스로부터의 유식물체 획득은 캘러스를 2,4-D 무첨가 1/2 MS고체배지에 치상한 후 24시간 일장하에서 15$^{\circ}C$로 배양하였을 때 효과적이었다. 캘러스로부터의 기관형성에 미치는 배양방법의 영향을 검토한 결과, 부정근의 형성은 액체진탕배양이 그리고 부정아의 형성은 액채정치배양이 각각 우수한 것으로 확인되었다. 본 실험의 결과를 통해 글라디올러스 ‘Topaz' 캘러스로부터의 재분화를 위한 최적 배양 조건을 선발하는 한편, 액체진탕배양법에 의해 기관-캘러스 혼합체를 유도할 수 있었으며, 이를 이용하여 기내 유식물체를 대량생산할 수 있는 가능성을 확인할 수 있었다.
Microbial cellulose has many potential applications due to its excellent physical properties. The production of cellulose from Acetobacter xylinum in submerged culture is, however, beset with numerous problems. The most difficult one has been the appearance of negative mutants under shaking culture conditions, which is deficient of cellulose producing ability. Thus genetic instability of Acetobacter xylinum under shaking culture condition made developing a stable mutant major research interest in recent years. To find a proper type of bioreactor for the production of microbial cellulose, several production systems were developed. Using a reactor system with planar type impeller with bottoms sparging system, it was possible to produce 5 g/L microbial cellulose without generating cellulose minus mutants, which is comparable to that of static culture system.
Escherichia coli와 Salmonella typhimurium의 생육을 억제하기 위하여 TGY, TSB (pH 6)의 액체배지에 potassium sorbate와 sodium benzoate를 각각 최고 허용농도의 1/2량인 0.1%, 0.03%로 처리하고 식염을 내염성 기준 농도인 2%로 첨가하여 보존료의 단독 및 병용효과와 식염과의 상승효과를 진탕 및 정치배양 조건에서 조사하였다. E. coli는 진탕배양보다 정치배양하였을 때 보존료의 단독 혹은 병용효과가 더 컸으며 S. typhimurium은 보존료를 단독처리하였을 때에는 억재효과를 보이지 않았으나 병용처리의 경우에 진탕배양에서는 정균효과를 현저하게 나타내었고 정치배양에서는 유도기를 연장시켰다. 식염의 첨가는 E. coli의 경우, 진탕배양에서는 거의 효과를 나타내지 않았으나 정치배양시에는 potassium sorbate 단독처리구 및 potassium sorbate + sodium benzoate병용처리구에서 항균작용을 현저히 증가시켰다. 식염의 상승효과는 S. typhimurium의 경우에 더욱 현저하였는데 진탕 및 정치배양시에 두 보존료와 식염의 혼합구에서 배양 중의 세균수는 오히려 초기농도보다 점점 감소되는 결과를 나타내었다.
In Salmonella enterica serovar Typhimurium, many genes encoded within Salmonella pathogenicity island 1 (SPI1) are required to induce intestinal/diarrheal disease. In this study, we compared the expression of four SPI1 genes (hilA, invF, prgH, and sipC) under shaking and standing culture conditions and found that the expression of these genes was highest during the transition from the exponential to stationary phase under shaking conditions. To identify regulators associated with the stationary phase-dependent activation of SPI1, the effects of selected regulatory genes, including relA/spoT (ppGpp), luxS, ihfB, hfq, and arcA, on the expression of hilA and invF were compared under shaking conditions. Mutations in the hfq and arcA genes caused a reduction in hilA and invF expression (more than 2-fold) in the early stationary phase only, whereas the lack of ppGpp and IHF decreased hilA and invF gene expression during the entire stationary phase. We also found that hfq and arcA mutations caused a reduction of hilD expression upon entry into the stationary phase under shaking culture conditions. Taken together, these results suggest that Hfq and ArcA regulate the hilD promoter, causing an accumulation of HilD, which can trigger a stationary phase-dependent activation of SPI1 genes under shaking culture conditions.
Several culture conditions affecting cellulose production by a newly isolated Acetobacter sp. A9 were examined by cultivating cells under shaking cultures. The inoculum size in the range of 1-10% (v/v) did not influence cellulose production. Maximum cellulose production was obtained with 200 rpm of agitation speed. The cells grown in the 75 ml of medium in a 250-ml conical flask produced the highest level of cellulose. The strain was able to produce cellulose at 25-3$0^{\circ}C$ with a maximum at 3$0^{\circ}C$. Cellulose production occurred at pH 4.5-7.5 with a maximum at pH6.5.
Effects of shaking, medium consistency and anther density on polyhaploid production in two wheat cultivars, Pavon and Chris, were studied using a modified 85D12 medium. Pavon produced more calli in shaking and more albino plants tban Chris. However, Chris produced threefold more green plants than Pavon in non-shaking treatment. More calli and green plants were derived from non-shaking treatment than those from shaking treatment. Anthers were cultured on both liquid and semi-solid 85D12 media, using two anther densities, 48 and 96 anthers per plate. Although Pavon generally produced more calli and albino plants than Chris, Chris produced more green plants than Pavon. More green plants were derived from semi-solid medium than those from liquid medium. A factor that may affect plant regeneration from anthers is the length of time on initiation medium. Most of the calli for both genotypes were transferred during the first two time periods. Fertility, as measured by seed set, was determined for all surviving regenerated plants. About 24% of Chris and Pavon anther-derived green plants in the experiment of medium consistency and anther density produced seed.
본 연구는 글라디올러스 Topaz'를 재료로 액체진탕배양에 의한 캘러스의 증식효율을 향상시키기 위하여 수행되었다. 캘러스는 2,4-D 10mg/L가 첨가된 MS고체배지에 목자 외식체를 배양하여 유도하였다. 액체진탕배양에 의한 캘러스의 증식은 2,4-D 0.05 mg/L가 첨가된 MS배지를 사용하여 2$0^{\circ}C$, 16시간 일장하에서 배지를 100 mL 삼각플라스크에 20 mL 분주하고, 수평회전식 진탕배양기의 회전속도를 75 rpm으로 하였을 때 증식속도가 가장 빨랐다. 또한 동일 배지에서 캘러스의 계대배양 역시 가능하였다.
Tissue culture of the roots of Panax ginseng was carried out to enhance the production of ginseng callus as well as to increase its contents of ginsenosides. A long cylinder type callus mass was formed when cultured IK callus by rotary shaking culture method, the growth ratio of the callus being 7.71 which was approximately 4 fold higher than those obtained by other culture methods. Ginsenosides $Rg_1$, Re and $Rb_1$ could be detected from the callus mass by TLC, however, their total contents were revealed to be approximately 9% compared to that of the fresh ginseng root equivalent by HPLC analysis,.
Cell growth and gomisin J production by suspension cultures of Schisandra chinensis Baillon were investigated under various culture media, initial sucrose concentrations, shaking speeds, and inoculum sizes. Callus was induced from in vitro cultivated leaf segments on MS medium supplemented with $1\;mg/{\ell}$ NAA. The maximum dry cell weight of 2.23 g was obtained at inoculum size of 0.5 g fresh cell weight and in MB5 medium supplemented with $1\;mg/{\ell}$ NAA, 3% sucrose after 8 weeks. The production of gomisin J in suspension cell cultures was maximized in WPM medium containing 5% sucrose. The shaking speed for maintaining maximal cell dry weight was 100 rpm while the best shaking speed for gomisin J accumulation was 140 rpm.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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