• 한국동물학회지
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• 제27권2호
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• pp.103-116
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• 1984

유전자 구조 및 유전정보 흐름의 차이로 인하여 고등생물의 유전자를 미생물에 직접 cloning하면 원하는 유전자 산물을 얻지 못하는 경우가 많다. 이것을 극복하기 위해서는 화학적인 방법으로 유전자를 합성하든지, 또는 역제효소를 사용하여 고등생물의 mRNA로부터 유전자를 합성하여 cloning하는 방법을 사용한다. 본 연구에서는 oligo(dT)-cellulose column 방법으로 순수분리한 plasmid pBR322의 Pst I site에 cloning하였다. 우선 AMV reverse transcriptase로 primary cDNA를 합성하고, 알칼리를 처리하여 주형 RNA를 제거했다. 이번에는 이 primary cDNA를 주형으로 Klenow enzyme과 reverse transcriptase를 차례로 처리하여 double stranded DNA를 합성하고, 이 때 5' end 근처에 형성되는 hairpin loop을 Sl nuclease로 제거했다. Terminal deoxynucleotidyl transferase를 사용하여, 합성된 dsDNA에는 poly(dC) track을, Pst I endonuclease를 처리한 plasmid DNA에서는 poly(dG) track을 각각 붙인다음 이들을 서로 annealing시키고 E. coli에 transformation시켜서 크기가 큰 plasmid를 갖는 clone을 cracking 방법으로 일처 선별하였다. 이렇게 선별된 clone을 in 냐셔 hybridization 방법으로 조사하여 globin DNA가 들어간 colony를 이차 선별하고 여러 restriction enzyme으로 잘라보아 globin DNA가 cloning된 것을 확인하였다. 토끼 hemoglobin으로 immunize한 rat (Wistar)에서 뽑은 제일차 혈청과 염소에서 뽑은 제이차 혈청의 antibody를 사용한 radioimmunoassay방법으로, cloning된 globin gene이 대장균내에서 발현되는 지의 여부를 살펴 보았는데, 박테리아의 $\\beta$-lactamase와 토끼의 globin이 결합된 chimeric protein이 대장균 내에서 다량 합성되며, 이 단백질은 토끼 hemoglobin의 antigenic determinant를 가지고 있음을 알 수 있었다.

• Journal of Applied Biological Chemistry
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• 제54권4호
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• pp.265-269
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• 2011

뽕잎으로부터 분리한 H. pylori 억제물질이 건강기능식품으로 산업화되기 위하여 이들 유용성분이 생체 내에서 약리성을 가지는지 여부를 검토하였다. 청목노상으로부터 분리한 혼합물은 $200{\mu}g/100{\mu}L$의 농도에서 H. pylori에 대한 저해 clear zone을 형성하여 항균활성을 나타내었고, C57BL/6종 mouse에 H. pylori의 감염을 유도 한 결과 6주 이상이 되어야 H. pylori의 감염이 되는 것을 확인하였으며, 이 때 감염균수는 평균 $8{\times}10^5$ CFU/mL이었다. 경구투여를 통해 청목노상뽕잎에서 추출한 유효성분의 혼합물이 H. pylori 감염에 있어 예방 및 치료 효과를 갖는지 시험한 결과, 절개된 위속의 H. pylori colony 수가 약물투여 군에서 대조군에 비해 감소한 것을 확인하였다. 마우스의 혈청을 분리하여 immunoglobulin isotype을 측정한 결과, 대조군 보다 IgG1, IgA 등이 높게 생성되는 것이 확인되었고, 시료 혼합물에 의해 항체생성이 증가되어 H. pylori 감염을 억제하는 것으로 판단되었다. 이러한 결과로 뽕잎에서 추출한 유용성분인 caffeic acid, rosemarinic acid와 chlorogenic acid가 H. pylori의 감염에 있어서 예방 또는 치료효과가 있는 것으로 확인되었다. 따라서 H. pylori에 의해 유발되고 감염률이 증가되고 있는 위염, 위궤양, 위암의 예방과 치료가 가능할 것으로 판단되었다.

• Journal of Ginseng Research
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• 제15권3호
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• pp.171-178
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• 1991

The results ok feeding experiments to the mice with ginseng extract, ginseng Powder, and ADAPTAGEN, for 30 days before X-ray irradiation and for 40 days after the X-ray irradiation at 750 rads were as follow: 1. The 50% lethals days (LD50, ) by the X-ray irradiation were 9 days at 1, 000 rads. 10 days at 900 rads, 11 days at 800 rads, 14 days at 760 rads, and 19 darts at 750 rads. Therefore, the standard radiation dose was set at 750 radb/8 min. 2. The 80% of the control group mice exposed to the X-ray radiation without ginseng feeding died in periods ranging from 14 to 24 days and the 20~30% of the ginseng extract and ginseng powder feeding groups died. But the 100% of the mice fed with ADAPTAGEN survived. 3. Testicles of the control group became smaller in weight than the nomad group by 26.5 to 29.0% and those of the ginseng extract and ginseng powder feeding group reduced by 44.6 to 60.4%. However, testicles of the ADAPTiIGEN feeding group increased in size by 77.4% to 87.1% and in weight by 61%, showing a recovery phenomenon approarhing to those of the ordinary mice. The ADAPTAGEN feeding group mice were also as active in color as the ordinary ones. 4. An electron micrograph(X8, 000X2.2) of the liver cells of the mice which had been 40 days after X-ray irradiation showed as follows; The control group appeared that is physiological action stopped due to the frequent occurrence of morphological change of the nucleus and diffusion of chromosome, reduction in microspores and expansion of microsomts, and endoplasmic change of mitochondria. The liver cells or the ADAPTAGEN feeding group were in a state similar to those of the ordinary mice restoring to normalcy In contrast, the liver cells of the ginseng extract and ginseng powder feeding groups were still far from being normal. 5. A serological analysis showed that the control group sharply decreased in albumin, Y-g1obu1in, and IgG so far as to cause dystrophy and to weaken antibody resistance but that ginseng extract and ginseng powder feeding groups, though in a little more restoring state than the control group, were still far from the normal group. The ADAPTAGEN feeding group restored to a state as comparable to the normal group in the contents of albumin ${\gamma}$-globulin, IgG and serum protein. In order words, it is noteworthy that ADAPTAGEN feeding was effective in revitalizing the destroyed cells of a living body and that it has the function of normalizing antibody components.

• Pediatric Gastroenterology, Hepatology & Nutrition
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• 제2권2호
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• pp.233-239
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• 1999

Acrodermatitis enteropethica (AE) is a rare autosomal recessive disorder of zinc absorption leading to chronic diarrhea and characteristic skin lesion. The term is also applied to any acquired zinc deficiency state resulting in the same clinical pictures. We experienced one case of AE in 1 month old male infant who had bacterial enterocolitis. The skin around mouth, anus, eyes, ears, hands and legs became reddish, vesicular and eczematoid. Serum zinc level was decreased to $51.4\;{\mu}g/dL$ (N=70~150). Endoscopic finding revealed pale gastric mucosa and villous atrophy of small intestine. Biopsy finding of small intestine showed no villi due to mucosal atrophy. On 13 day of admission jaundice with DIC were noted and AST & ALT were elevated to 110 & 36.8 IU/L, respectively. Diarrhea was improved but jaundice and liver function were not recovered until discharge from hospital. After discharge when the patient was 4 months of age serum bilirubin and AST/ALT had not been normalized. CMV shell vial culture of urine and CMV Ig G antibody were positive. So intravenous ganciclovir injection of 7.5 mg/kg, two times a day for 2 weeks and then 10 mg/kg/day for 3 months was done from 4 to 6 months of age. No virus was found in the urine and AST & ALT were normalized at 2 months after stopping ganciclovir treatment.

• Journal of Animal Science and Technology
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• 제46권3호
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• pp.495-502
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• 2004

장출혈성대장균 O157:H7의 eae유전자 산물인 intimin은 장 상피세포의 부착성을 조절하는 단백질로 알려져 있다. Intimin의 C-말단 아미노산 잔기와(His)$_6$이 혼합되어 이루어진 plasmid를 작성하여 재조합 단백질(34kDa)을 발현시켰다. 발현된 재조합 intimin 단백질의 면역원성을 확인하기 위해 토끼와 산란계에서 항혈청 및 난황항체(IgY)를 제조하였다. O157:H7에서 분리한 세포외막단백질(OMPs)과 제조된 항혈청과의 western blot상의 반응에서 약 94kDa의 위치에서 양성반응을 보여 발현된 재조합 단백질의 면역원성 효과가 확인되었다. 면역원성이 확인된 단백질을 산란계에 면역한 결과, 면역 후 4${\sim}$6주 경부터 높은 수준의 항체가 형성되었다. 재조합 intimin 단백질에 대한 난황 항체의 항원결합능력 조사를 위하여 중화반응시험을 수행한 결과, 재조합 intimin 단백질에 대한 난황 항체가 O157:H7과 강하게 결합하는 것으로 나타났다. 따라서 본 연구에서 발현된 재조합 intimin 단백질은 토끼와 산란계의 면역반응을 유도할 수 있는 효율적인 면역원임과 동시에 난황 항체 생산을 위한 항원으로의 이용가능성이 확인되었다.

• 대한미생물학회지
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• 제34권6호
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• pp.583-589
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• 1999

Acellular pertussis vaccine has been used widely in Korea since 1984. However, because many of the former generations were not inoculated with pertussis vaccine, they may infect infants with pertussis. With this background, we investigated the prevalence of pertussis antibodies in all age groups. Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) to assess IgG antibodies to pertussis toxin (PT) and filamentous hemagglutinin (FHA) and bacterial agglutination (BA) to assess antibodies to agglutinogen were compared on 842 serum samples which were donated from 11 hospitals in Seoul area. In comparison with age groups under 20 years, antibodies of adults against PT and FHA were maintained. But antibodies against agglutinogen showed no pattern in all age groups. Antibodies to PT were correlated with antibodies to FHA. There was no significant difference in antibody levels between male and female (p<0.05).

• Parasites, Hosts and Diseases
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• 제38권2호
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• pp.91-93
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• 2000

This study was performed to evaluate the epidemiological status of toxoplasmosis among the residents of Cheju island. The sera of local students from 18 high schools (boys 2110, girls 2460) and those of adults (474 admitted to Cheju Chungang General Hospital) were collected and checked for the IgG antibody titers against Toxoplasma gondii. Serum samples collected from both the students and adults showed sero-positive rate of 5.5% and 12.9%, respectively Although the rates were not significantly different between the sexes (5.4% for the boys and 5.5% for the girls attending school), the geographical difference showed a significant difference between the urban (4.6~6.9%) and rural areas (5.6-8.8%) (p<0.05) Based on the high positive rates, it should be necessary to control toxoplasmosis in Cheju island.

• Applied Microscopy
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• 제24권4호
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• pp.41-51
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• 1994

The topology of the enzyme has been investigated by biochemical studies including chemical labeling and cross linking. Thirteen subunits(polypeptides) of the cytochrome-c-oxidase have localistic characteristics of existing in the matrix side or cytoplasmic side in the mitochondria. In order to observe the distribution of the enzyme subunit on the mitochondria membrane, immunogold-labeling methods were employed. Antibody was obtained from the serum of immunized rabbit with enzyme subunit antigen which was obtained from cytochrome-c-oxidase of the beef heart muscle mitochondria. Beef heart muscle tissue as a tissue antigen was stained with immunized rabbit IgG and protein A gold complex. Electron microscopy has identified the existance of cytochrome-c-oxidase subunit $Mt_I,\;Mt_{II}\;and\;Mt_{III}$ on the membrane of cristae and outer chamber of mitochondria and the subunit $C_{IV}$ on the membrane of cristae and matrix of mitochondria. Particularly, the subunit $C_{IV}$ was also observed to exist in the sarcoplasm of muscle tissue.

• Parasites, Hosts and Diseases
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• 제40권4호
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• pp.177-180
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• 2002

Gangweon-do is known to be highly endemic area of sparganosis more than other provinces in Korea. A seroepidmiologic examination for the detection of anti-Spirometra erinacei plerocercoid IgG in serum was carried out in normal inhabitants in Hongcheon-gun, Gangweon-do. Sere were tested by enzyme-linked immunosrobent assay (ELISA) for the anti-sparganum antibodies. Positive rate for anti-sparganum antibody in 719 adults was 3.3%. Data of the questionnaire for 24 ELISA positive inhabitants revealed that 20 had a history of eating raw meat of snakes, 24 had a history of eating frogs, and 24 had a history of drinking stream water. Two positive cases had a past history of sparganosis. Two positive cases showed current symptoms of sparganosis. The data revealed that ELISA would be useful to find infected cases among normal inhabitants at sparganosis-endemic areas.

• Parasites, Hosts and Diseases
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• 제35권4호
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• pp.251-258
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• 1997

톡소포자충. RH주 tachyzoite의 항원성 난백질에 대하여 알아보고자 마우스 복강 내 또는 in uipo에서 Hep-2 cell에 계대한 톡소포자충과 감염마우스의 복팡앤으로 SDS-PAGE/immunoblot을 시행하였다 또 lmnoanity chromatoaphy를 이용하여 톡소포자충 항원을 징제한 후 SDS PAGE/immunoblot을 시행하여 항원을 분리하였으며. 톡소포자충 조항원 및 정제항원으로 면역시킨 마우스 혈청을 이용하여 IgG-ELISA를 시행하였다. 톡소포자충 용해물을 면역시킨 노끼의 항혈 청으로 immunoblot을 시행하였을 때 마우스 복강 내로 계대한 톡소포자충에서 76 kDa. 70 kDa. 64 kDa. 53 kDa 46 kDa. 44 kDa. 35 kDa. 25 kDa. 18 kDa 및 13 kDa의 항원대가 관찰되었으며. in vitro에서 Hep-2 cell에 배양한 톡소포자충은 70 kDa. 64 kDa. 53 kDa 35 kDa. 25 kDa 및 13-10 kDa의 항원대가 관찰되어 마우스 복강 내에 계대한 톡소포자충에서 더 많은 항원대가 관찰되었다. 마우스 복강 계대한 tachyzoite 용해물을 immunoaffinity글 시행하여 부분 정제한 후 떤역시킨 초기의 항혈청으로 immunoblot을 하였을때 E-1에서는 97 kDa. 63 kDa. 53 kDa 및 35 kDa이 E-2에서는 53 kDa 및 35 kDa이 나타났다. 한편 감염 마우스 복강 액에서는 76 KDa 53 KDa. 35 kDa 및 29-28 kDa의 항원대가 관찰되었으며. 정상 마우스 복강 액에서도 약하게 76 kDa .35 kDa 및 29-28 kDa의 반응대가 관찰되었다. 감염 마우스 복강앤을 IgG-Sepharose column을 통과시킨 후 시행한 immunoblot에서 E-1은 84 kDa. 76 kDa. 5,B kDa 및 29 kDa이 . E-2에서 53 kDa 및 45 kDa의 항원대가 관찰되었다. 이 실험에서 immunoawnity chromatography를 이용하여 톡소포자충 용해물 및 분비물에서 76 kDa. 63 kDa. 53 kDa. 35 kDa 및 29 kDa의 항원을 불리하였다. 톡소포자충의 조항원과 정제항원 (감염 마우스 복강액. E-1)으로 IgG-ELISA를 시행한 결과. 조항원의 경우 2차 면역 후 1주 후부터 IgG 항체가 증가하였고 정제 항윈은 2차 면역 후 3주 후부터 IgG항체가 증가하였다 (p<0.05).