In this study, we demonstrate the use of a PCR-based method for the detection of the specific genes involved in natural-product biosynthesis. This method was applied, using specifically designed PCR primers, to the amplification of a gene segment encoding for sedo-heptulose 7-phosphate cyclase, which appears to be involved in the biosynthetic pathways of $C_7N$ aminoacyclitol or its keto analogue-containing metabolites, in a variety of actinomycetes species. The sequences of DNA fragments (about 540 bp) obtained from three out of 39 actinomycete strains exhibited a high degree of homology with the sedo-heptulose 7-phosphate cyclase gene, which has been implicated in acarbose biosynthesis. The selective cultivation conditions of this experiment induced the expression of these loci, indicating that the range of $C_7N$ aminoacyclitol or its keto analogue-group natural products might be far greater than was previously imagined. Considering that a total of approximately 20 $C_7N$ aminoacyclitol metabolites, or its keto analogue-containing metabolites, have been described to date, it appears likely that some of the unknown loci described herein might constitute new classes of $C_7N$ aminoacyclitol, or of its keto analogue-containing metabolites. As these metabolites, some of which contain valienamine, are among the most potent antidiabetic agents thus far discovered, the molecular detection of specific metabolite-producing actinomycetes may prove a crucial step in current attempts to expand the scope and diversity of natural-product discovery.
Rice stripe virus (RSV) disease is one of the major constraints in rice production, transmitted by the small brown planthopper (SBPH; Laodelphax striatellus). Upon RSV infection, plants develop typical symptoms, which include chlorosis and weakness of newly emerged leaves, white and yellow spots, stripe on leaves, and necrotic and wilting leaves, resulting in plant growth inhibition, oxidative damage that may culminate in programmed cell death (PCD) and plant death in severe epidemics. Although RSV-resistant quantitative trait loci (QTLs), Stv-a, Stv-b, and Stv-bi, were mapped using various resistant varieties, one RSV-resistant gene, OsSOT1, has been identified so far. In this study, we used the rice cultivar Zenith, known to carry Stv-b, to investigate novel RSV-genes through fine mapping. Therefore, we crossed Zenith (Donor parent, RSV resistant) with Ilpum (Recurrent parent, RSV susceptible) to fine-map using a BC2F2 population of 2100 plants. Chromosome segment introgression lines that were heterozygous at a different region were selected, two types of heterozygous lines showed an heterozygous genotype between Sid2 and Sid75 to Indel9 and RM6680. Interestingly, we identified qSTV11Z region harboring Stv-b, covering about 171-kb region between the InDel markers Sid75 and Indel8. The localization of qSTV11Z provides useful information that could be used for marker-assisted selection and determination of genetic resources in rice breeding.
A sequence of 10 amino acids at the C-terminus region of methylglyoxal synthase from Escherichia coli (EMGS) provides an arginine, which plays a crucial role in forming a salt bridge with a proximal aspartate residue in the neighboring subunit, consequently transferring the allosteric signal between subunits. In order to verify the role of arginine, the gene encoding MGS from a thermophile species, Thermus sp. GH5 (TMGS) lacking this arginine was cloned with an additional 30 bp sequence at the 3'-end and then expressed in form of a fusion TMGS with a 10 residual segment at the C-terminus ($TMGS^+$). The resulting recombinant enzyme showed a significant increase in cooperativity towards phosphate, reflected by a change in the Hill coefficient (nH) from 1.5 to 1.99. Experiments including site directed mutagenesis for Asp-10 in TMGS and $TMGS^+$, two dimentional structural survey, fluorescence and irreversible thermoinactivation were carried out to confirm this pathway.
Olive flounder immunoreceptor DAP10 homologue cDNA was cloned from a peripheral blood lymphocytes (PBLs) cDNA library. The length of the olive flounder DAP10 cDNA is 473bp and it contains an open reading frame of 234bp. The predicted polypeptide sequence is 78 amino acids, consisting of a 22-amino acid leader, an 11-amino acid extracellular domain, a 21-amino acid transmembrane segment, and a 24-amino acid cytoplasmic domain. The amino acid sequence of olive flounder DAP10 has 56%, 50%, 32%, 31%, and 31% sequence identity with zebrafish DAP10, catfish DAP10, cattle DAP10, rat DAP10 and Monkey DAP10, respectively. Olive flounder DAP10 has a conserved aspartic acid in the transmembrane domain and a phophatidylinositol-3 kinase-binding site (YxxM/V) in the cytoplasmic region. Genomic organization reveals that olive flounder DAP10 comprises five exons and four introns. A phylogenetic analysis based on the deduced amino acid sequence grouped the olive flounder DAP10 with other species DAP10. In RT-PCR analysis, DAP10 transcripts were detected predominantly in PBLs, kidney, spleen and intestine.
${\bullet}$ 국내 품종에 적합한 콩 형질전환 방법을 확립하기 위해 배축 절단 방법을 새롭게 개발하였으며 이 방법을 통해 목적 유전자가 콩 분열조직에 안정적으로 도입되고 선발 과정을 거쳐 형질전환 식물체를 작성할 수 있었다. ${\bullet}$ 콩 형질전환체의 도입유전자 copy 수는 1~2개이고 세대 진전에 따라 도입유전자가 안정적으로 유전되고 있음을 확인하였다. ${\bullet}$ 이러한 결과를 바탕으로 배축 절단 방법을 사용하여 우리나라 환경에 적합한 우수한 형질전환 콩 품종을 신속하게 개발할 수 있을 것으로 기대된다.
Bae, Chang-Hyu;Tomoko Abe;Lee, Hyo-Yeon;Kim, Dong-Cheol;Min, Kyung-Soo;Park, Kwan-Sam;Tomoki Matsuyama;Takeshi Nakano;Shigeo Yoshida
Journal of Plant Biotechnology
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제1권2호
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pp.101-107
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1999
The leaf blade-segments of albino tobacco (Nicotiana tabacum L.) were cultured on MS media containing different concentrations of BAP (0, 0.4, 2.2, 4.4, 22.2 ${\mu}{\textrm}{m}$) with or without NAA (0, 0.5, 2.7 ${\mu}{\textrm}{m}$). Multiple shoots were induced on the media containing 0.4 to 2.2 ${\mu}{\textrm}{m}$ BAP. The best condition for multiple shoot induction with root formation was MS media containing 4.4 ${\mu}{\textrm}{m}$ BAP and 0.5 ${\mu}{\textrm}{m}$ NAA. The regenerated albino plants showed a significant reduction in accumulation of chlorophylls and carotenoids. The drastic reduction of the pigments content was associated with the distinct alterations in gene expression in the albino plants. firstly, the expression of plastid genes, such as rbcL, psbA, 165 rDNA and 235 rDNA, was reduced at the level of transcripts in the regenerated albino plants. Secondly, the alteration of structure of the plastid genes was not detected in the albino plants. However, the copy number of the plastid genes whose transcription level was reduced greatly was increased approximately two-fold, although the transcriptions of nuclear gene (255 rDNA) showed the wild-type level.
Seo, Hee-Jung;Kang, Hyo-Jin;Choi, In-Ho;Cheon, Yong-Pil;Lee, Ki-Ho
Reproductive and Developmental Biology
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제33권1호
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pp.55-61
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2009
The epididymis in the male reproductive tract is the site where spermatozoa produced from the testis become mature. The epididymis is divided into 4 different segments, initial segment and caput, corpus, and caudal epididymis, depending upon functional and morphological features. Aquaporins (Aqps) are water channel molecules, which are present in the epididymis and play a major role in removal of epididymal water, resulting in creation of microenvironment for sperm maturation and concentration of sperms. Nandrolone decanoate (ND) is a synthetic anabolic-androgenic steroid, which is used to treat clinical diseases and improve physical ability and appearance. Even though it is well determined that the ND causes the male infertility by affecting the testis, little is known the effect of the ND on the epididymis. The present study was focused to examine the effect of ND at different treatment doses and periods on expression of Aqp1 and Aqp9 genes in the epididymis of pubertal rats. Results showed that mRNA expression of Aqp1 and Aqp9 genes among the parts of the epididymis was differentially regulated by ND treatment doses. In addition, treatment periods of ND caused differential expression of Aqp1 and Aqp9 mRNAs among segments of the epididymis. Therefore, it is believed that male infertility induced by ND could be resulted not only from malfunction of the testis but also from aberrant gene expression of Aqp1 and Aqp9 in the epididymis.
Background: Budgerigar fledgling disease polyomavirus (BFDV) is the pathogen that causes budgerigar fledgling disease in psittacine species. The clinical signs of PBFV infection include ascites, hepatitis, and crop stasis. BFDV is associated with a high mortality rate in nestling birds. In contrast, adult birds only have mild symptoms such as feather dystrophy. Objectives: This study aimed to determine the prevalence, genetic characteristics, and phylogenetic analysis of BFDV in pet parrots in Korea. Methods: Fecal and tissue samples were collected from 217 pet parrots from 10 veterinary hospitals including Chungbuk National University Veterinary Hospital. The molecular screening was performed using polymerase chain reaction (PCR) analysis of the small t/large T antigen gene segment. Full-length genome sequencing with the Sanger and phylogenetic analysis were performed on BFDV-positive samples. Results: The PCR results based on the small t/large T antigen gene marker indicated that BFDV DNA was present in 10 out of 217 screened samples. A whole-genome sequence was obtained from six strains and phylogenetic analysis revealed no significant relationship existed between the species and geographical locations amongst them. Conclusions: The prevalence of BFDV infection in South Korea is not high when compared to the prevalence of BFDV in other parts of the world, however, it has been reported sporadically in various species and geographic locations. The whole-genome analysis revealed 0.2%-0.3% variation in intragenomic homogeneity among the six strains analyzed. Korean strains are separately on the phylogenetic tree from their counterparts from China and Japan which might reflect the substantial genetic variation.
Monophyly and intergeneric relationships of the tribe Helleboreae, sensu Tamura, and related genera were studied using a 1,100-bp segment at the 5'end of the 26S ribosomal RNA gene. Forty-one OTUs, including eight species of the Helleboreae, were either directly sequenced or obtained from previous publications. Data were analyzed using distance and discrete character methods to infer phylogenetic relationships among the included taxa. The inferred phylogeny did not support monophyly of either Helleboreae or Cimicifugeae whose members were intermixed in our inferred phylogeny. This result is congruent with our previous study, which recommended against finely subdividing, suprageneric higher taxa within the R-chromosome group (subfamily Ranuncluloideae, sensu lato) until more molecular data were accumulated. Our data convincingly suggest the presence of the following three monophyletic groups: the Cimicifuga group (the clade of Actaea, Cimicifuga, Souliea, Eranthis, Anemonopsis, and Beesia), the Trollius group (the clade of Trollius, Megaleranthis, Adonis), and a clade including Anemonopsis and Beesia. Our data also suggest that Trollius and Megaleranthis might be congeners and Eranthis a paraphyletic group.
Rice blast, caused by Magnaporthe oryzae, is one of the most destructive rice diseases worldwide. The aim of this study was to screen bacterial isolates to efficiently prevent the occurrence of rice blast. A total of 232 bacterial isolates were extracted from nonrhizospheric rice soil and were screened for antifungal activity against M. oryzae using a leaf segment assay. Strains S170 and S9 showed significant antagonistic activity against M. oryzae in vitro and in leaf disk assays, and controlled M. oryzae infection under greenhouse conditions. The results showed that strains S170 and S9 could effectively control rice leaf blast and panicle neck blast after five spray treatments in field. This suggested that the bacterial strains S170 and S9 were valuable and promising for the biocontrol of rice disease caused by M. oryzae. Based on 16S rDNA, and gyrA and gyrB gene sequence analyses, S170 and S9 were identified as Bacillus amyloliquefaciens and B. pumilus, respectively. The research also demonstrated that B. amyloliquefaciens S170 and B. pumilus S9 could colonize rice plants to prevent pathogenic infection and evidently suppressed plant disease caused by 11 other plant pathogenic fungi. This is the first study to demonstrate that B. amyloliquefaciens and B. pumilus isolated from nonrhizospheric rice soil are capable of recolonizing internal rice stem tissues.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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