• 한국가축번식학회지
• /
• 제25권4호
• /
• pp.305-315
• /
• 2001

본 연구의 목적은 외래 EGFP 유전자를 분화이전의 웅성생식세포에 도입한 후 이를 난모세포내에 미세주입하여 형질전환동물을 생산하는 기술을 개발하는 데에 있다. 이를 위하여 반수체 정자세포에서 특이적으로 발현하는 생쥐의 mTP1과 햄스터의 hPrm2 유전자 발현 시기를 RT-PCR로 조사한 결과 그시기는 생쥐와 햄스터에서 각각 18일령과 20일령으로 확인되었다. 이에 따라 외래 유전자의 침입이 용이한 감수분열 직전단계인 17일령의 생쥐와 19일령의 햄스터 정자세포를 EGFP 유전자가 포함된 배양액에 부유시킨 다음, 전기자극을 부여한 결과 0.18 ㎸/cm의 전기자극을 가한 후 72시간 배양한 정자세포의 28.5%와 32.1%에서 EGFP 유전자가 발현되는 것으로 확인되었다. EGFP유전자가 도입된 반수체 정자의 수정 및 발달 능력을 검증하기 위하여, 이들 정자세포를 햄스터 난자 내에 미세주입 하였으나, 형광현미경하에서는 EGFP유전자의 발현은 관찰할 수 없었다. 이에 이들 난자를 공시하여 PCR분석을 실시한 결과, 약 44%의 수정란에서 EGFP 유전자의 존재가 확인되었다. 이러한 결과로 보아 반수체 정자세포는 외래 유전자를 난자 내에 도입하기 위한 운반체로 이용될 수 있을 것으로 생각된다.

• 대한생식의학회:학술대회논문집
• /
• 대한불임학회 1996년도 추계 학술대회 및 정기총회
• /
• pp.37.2-38
• /
• 1996

• 대한생식의학회:학술대회논문집
• /
• 대한불임학회 1997년도 제34차 추계 학술대회
• /
• pp.47.2-48
• /
• 1997

• Animal cells and systems
• /
• 제9권2호
• /
• pp.65-73
• /
• 2005

In this study, we found that sperm ball of Urechis unicinctus consisted of a somatic cell and spermatogenic cells. After separation from the sperm ball, individual spermatid floated freely in the coelomic fluid and differentiated into a mature sperm. Because of many nuclear vacuoles, spermatid nucleus was observed to be heterogeneous. Later, the spermatid nucleus condensed into the homogeneous round nucleus of the mature sperm. Perinuclear microtubules could be seen but did not seem to be organized into manchette microtubules. To understand the nature of nuclear condensation during spermiogenesis, the sperm and spermatids (spermiogenic cells) were treated with FITC-phalloidin, or anti-actin-FITC, or labeled with antiactin immunogold particles (AAIP; 10 nm) followed by transmission electron microscopy or confocal laser scanning microscopy. The anti-actin-FITC and FITC-phalloidin reactions occurred distinctly in the nuclei of both spermiogenic cells. FITC-phalloidin reacted more intensely with acrosomes. The AAIP were incorporated mainly into nuclei of both cells sometimes showing local distribution in the nucleus. Nuclear vacuoles of spermatids disappeared progressively with condensation of the nucleus, as the number of incorporated $AAIP/{\mu}m^2$ increased. These results suggest that nuclear actin microfilaments might be closely related to nuclear condensation.

• 한국가축번식학회지
• /
• 제20권1호
• /
• pp.43-52
• /
• 1996

본 연구는 생쥐의 고게정관내에 존재하는 분화단계의 정자세포를 발생단계별로 분리하여, 체외에서 단기간 배양체계를 확립하기 위하여 실시하였다. 8주령 이상된 생쥐의 정소로부터 정소막을 제거시킨 후, collagenase (1mg/ml), trypsin(2.5mg/ml)를 처리하여 곡세정관을 간질세포와 분리하여 배양액에 부유시켰다. 부유세포는 Celcep장치를 이용하여 세포크기와 밀도 차이에 의해 분화 단계별로 분리하였다. 회수된 세포의 균질성은 haematoxylin/eosin 또는 orcein으로 염색한 후, 광학현미경하에서 확인한 결과 약 85% pachytene spermatocyte와 round spermatid을 성공적으로 분리해냈다. 따라서 sedimentation velocity에 의해서 생쥐의 spermatogenic cell의 발달단계별 분리가 가능함을 알 수 있었다. 이러한 방법으로 분리된 pachytene spermatogenic cell들은 DMEM 배양액에서 6일 이상 배양한 결과 약 36%의 생존율을 보였다. 따라서, 분화단계별 정자 세포의 분리 및 배양체계의 확립은 웅성생식세포의 발생과정에 따른 생리 또는 분자생물학적 현상을 규명함은 물론 세포융합기술의 이용에 의한 형질전환동물 생산에의 응용을 통해 가축에 있어서의 형질전환 생산효율의 개선에 기여할 수 있으리라 사료된다.

• 한국발생생물학회:학술대회논문집
• /
• 한국발생생물학회 2003년도 제3회 국제심포지움 및 학술대회
• /
• pp.133-133
• /
• 2003

Recently, sperm has been used as a vector to carry exogenous genes for the production of transgenic animals. However, the success in cattle is low, due to deficiencies in oocyte activation and sperm decondensation caused by high disulphide bond (S=S) content in mature sperm. This study was carried out to develop an effective method for producing transgenic animals with round spermatids (RS). Two methods of embryo production - electric fusion (EC) or intracyto-plasmic injection (IC) and three activation treatments were compared. RS were isolated from bull testes by Percoll density gradients (20, 35, 40, 45 and 90%). Fusion between ooplast and RS was performed with a single DC electric pulse (1.0 KV/cm, 45 sec) in 0.28 M mannitol solution supplemented with 100 M CaCl2 and 100 M MgCl$_2$. (중략)

• 대한생식의학회:학술대회논문집
• /
• 대한불임학회 2003년도 제45차 추계학술대회
• /
• pp.101-102
• /
• 2003

• 한국수정란이식학회지
• /
• 제29권4호
• /
• pp.351-359
• /
• 2014

Phasianus colchicus is not only a beautiful bird but also a great value in science and under the threat of endanger. Hence, the aim of this study was to isolate the pheasant male germ cells (mGCs) and then induce them into elongated sperm-like cells in vitro. The mGCs were purified and enriched by a two-step plating method based on the different adherence velocities of mGCs and somatic cells. The percentage of the c-kit positive cells and c-kit negative cells examined by flow cytometry analysis (FCA) was 92.87% and 2.57%, respectively. Subsequently, the mGCs were induced for 48h in DMEM/F12 medium supplemented factors such as retinol acid, testosterone and bovine FSH, followed by 5 weeks in culture. We found that some elongated sperm-like cells appeared initially in vitro under inducement of stimulated factors. The elongated sperm-like cells showed in the expression of changed morphology and post-transcriptional marker such as spermatid associated (SPERT), spermatid perinuclear RNA binding protein (STRBP), round spermatid basic protein 1 (RSBN1) and SPER1L. Moreover, in DNA content identified assay, induced cells showed that the 1C DNA population markedly increased in differentiated group but it was not change in undifferentiated group. Successful in vitro differentiation of pheasant testicular germline cells into spermatids appears to offer extremely attractive potential for the conservation of endangered birds and treatment of male infertility.

• Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
• /
• 제29권7호
• /
• pp.944-951
• /
• 2016

Tdrd12 is one of tudor domain containing (Tdrd) family members. However, the expression pattern of Tdrd12 has not been well studied. To compare the expression levels of Tdrd12 in various tissues, real time-polymerase chain reaction was performed using total RNAs from liver, small intestine, heart, brain, kidney, lung, spleen, stomach, uterus, ovary, and testis. Tdrd12 mRNA was highly expressed in testis. Antibody against mouse TDRD12 were generated using amino acid residues SQRPNEKPLRLTEKKDC of TDRD12 to investigate TDRD12 localization in testis. Immunostaining assay shows that TDRD12 is mainly localized at the spermatid in the seminiferous tubules of adult testes. During postnatal development, TDRD12 is differentially expressed. TDRD12 was detected in early spermatocytes at 2 weeks and TDRD12 was localized at acrosome of the round spermatids. TDRD12 expression was not co-localized with TDRD1 which is an important component of piRNA pathway in germ cells. Our results indicate that TDRD12 may play an important role in spermatids and function as a regulator of spermatogenesis in dependent of TDRD1.

• 한국가축번식학회지
• /
• 제23권1호
• /
• pp.45-51
• /
• 1999

본 연구는 성성숙한 번식기의 한국산 숫컷 꿩을 대상으로 번식연구의 기초자료를 얻기 위해 곡세정관의 정자형성세포를 분류하였다. 그 결과는 다음과 같다. 1. 정조세포는 A형, In형 및 B형의 3 가지 정조세포로 분류되었다. 2. 제 Ⅰ정모세포는 전세사기, 세사기, 접합기, 태사기 및 이동기의 5가지 형 제 1 정모세포로 분류되었다. 3. 정자세포는 핵의 변화에 따라서 둥근 정자세포에서 장축성장한 정자세포로 성장하는 과정을 7 단계로 분류되었다.