The efficiency of in vitro regeneration of four clones of Populus euramericana, Canada blanc, Eugenii, I-45/51, and Wisconsin #5, was examined. Cytokinins and the combinations with auxins affected the rate of regeneration from the explants of root segments, stem internodes, and leaf discs. Overall, BA and the combination with auxins were effective in root segments and leaf discs of the Canada blanc clone, whereas zeatin and the combination with auxins were important in stem internodes of the Wisconsin #5 clone. The highest number of shoots averaging 17.6 $\pm$ 0.47 from root segments in the Canada blanc clone,18.2 $\pm$ 3.0 from stem internodes in the Wisconsin #5 clone, and 17.8 $\pm$ 1.92 from leaf discs in the Canada blanc clone were obtained with 2.0 mg/1 BA, 2.0 mg/l zeatin combined with 0.2 mg/l IAA, and 0.5 mg/l BA combined with 0.05 mg/l 2,4-D, respectively. In particular, the addition of 2,4-D into cytokinin medium promoted shoot proliferation.
The present experiment was carried out to investigate the effects of direct sowing time and transplanting culture of Sculellaria baicalensis GEORGE on the grows, the yield and it's components. The results obtained are summarized as fallows; The number of days from seeding to emergence was recognized lineary negative correlation between seeding dates and transplanting dates. Plant height was longest on Apr. 15 Seeding and Apr. 1 transplanting, and was short in the early seeding and transplanting, and the late seeding and transplanting. Stem diameter was thickest on Apr. 15 seeding and Apr. 1 transplanting, and was thin in the early, and the late seeding and trasplanting. Length and dry weight of root were increased on Apr. 15 seeding. In the transplanting date, Length and dry weight of root were increased on Apr.1. Yield of dry root was highest in Apr. 15 seeding date. In the transplanting culture, yield of dry root was highest in Apr.1.
Four root canal sealers, Apatite Root Sealer I and II composed mainly of hydroxyapatite/tricalciumphosphate, Sealapex containing calcium hydroxide, and Roth Sealer composed of zinc oxide - eugenol were compared on the culture of L929 fibroblasts. MIT (Methyl Thiazole Tetrazolium Bromide) colorimetric technique was used to measure the mitochondrial dehydrogenase activity. Results were as follows: 1. Hydroxyapatite/tricalcium phosphate mixed sealers were significantly less toxic compared with calcium hydroxide and zinc oxide - eugenol type sealers. High pH of the calcium hydroxide sealer and release of eugenol component from the zinc oxide - eugenol type sealer were presumed to be the cause of the toxicity of these two sealers. In no cases, there were more cytoblastic effects in hydroxyapatite/tricalcium phosphate mixed sealers compared to the control groups. 2. In all experimental groups, toxicity was decreased as dilutions were increased. However in zinc oxide-eugenol type sealer the cell activity was weakened for all dilution groups. 3. Regarding the effect of setting time, Apatite I and Sealapex were less toxic as the setting progressed. Apatite II kept constant regardless of the different time ellapsed after setting but Roth sealer revealed significantly higher toxicity for all experimental groups. 4. Comparing two different culture periods of 24 hours and 72 hours, Apatite I showed higher cell activities in longer period(72 hours) while Apatite II did not. Sealapex and Roth sealer, however, showed significantly lower cell activities in longer period.
This study was done for the determination of ginsenosides contents of Korean ginseng and ginseng products as well as the development of analytical method for ginsenosides. It is known that perfect segregation of ginsenoside Rg and Re is not easy, but in this study almost perfect segregation can be possible by the control of concentration between acetonitrile and water. Among Korean ginseng, ginseng powdered tea and red ginseng powdered tea, the highest ginsenosides content of sum of each 7 kind o ginsenoside was found in red ginseng powdered tae as 23,211${\mu}g$ per 1g/dw The ginsenoside content of ginseng powdered tea was lower than red ginseng powdered tea as 15,217${\mu}g$ per 1g/dw Total ginsenoside content in the root of ginseng was 29,268${\mu}g$ per 1/dw Each amount of ginsenoside contained in ginseng root was in the order of Rb1, Rg1, and Rc. It was shown that there was difference in constitutional element of ginsenosides in ginseng powdered tea and ginseng root.
Ginseng(Panax ginseng C. A. Meyer) is important medicinal plant but requires 4-year cultivation for root harvest because of slow growth. In contrast, ginseng hairy roots induced by introducing Ri-plasmid of Agrobacterium rhizogenes into genomic DNA of plant cells show vigorous growth, and the hairy roots produce the same or more saponins than natural ginseng roots. Therefore, hairy roots can be used for commercial purposes. The present study was carried out to induce hairy roots with both active growth and high saponin contents. Numerous hairy roots of Panax ginseng were obtained after root disks of three-year old roots were infected with Agrobacterium rhizogenes R1000 A4T in dark condition after one month of culture. About 3 hundred lines of hairy roots were selected according as morphological characters on medium with carbenicillin. After pre-selection of fifteen lines of hairy roots with active growth, KGHR-l and KGHR-8 lines were finally selected which had characters of high content of ginsenoside-Rd and ginsenoside-Re, respectively. The optimum growth of hairy roots was achieved in the culture of 1/2 MS liquid medium in dark (22 $^{\circ}C$) under 60 rpm gyratory shaking. Hairy roots grew well in 5L Erlenmeyer flasks, lL roller drums, 10L jar-fermenters, and especially in 20L air-lift culture vessels.
Panax ginseng root has been widely used as an important drug for thousands years in China, Korea and Japan. The main effective components of ginseng have been believed to be saponins. However, ginseng cultivation is very difficult and needs many years for growth. It has already been shown that Panax ginseng callus produces a considerable amount of the same kinds of saponins as in intact plants. Various culture conditions were examined for increased production of ginseng saponins by cell culture. The saponin contents and the growth rates in two cell lines of ginseng callus were compared in static and suspension cultures, rotary and reciprocal shaking cultures. It was shown that the growth rate in rotary shaking cultures of D5-B2K-B2K callus was the highest and ginseng saponin production was most effective in reciprocal cultures of D5-B2K-B2K callus. The saponin content per fresh weight of the culture was 1.03 times higher than that of the fresh ginseng root.
This study was to evaluate the cytotoxic effect of three root canal disinfectants (formocresol, camphorated phenol and eugenol) and ten root canal sealers(Cavitec, Hypo-cal, Vitapex, AH26, Canals, Mynol, $N_2$, $N_2$-Medical, Z. O. E. and Calvital) in vitro. The experiments were performed in four differrent modes. In the first and second experiment, the "long-distance" cytotoxicity of three root canal disinfectants were tested on L cells. In the third exeriment, ten root canal sealers were tested for cytotoxicity by means of the tissue culture-agar overlay method immediately, 4 and 24 hours after the experiment. In the fourth experiment, the study with radioactively labeled L cells were employed to determine the relative cytotoxicity of ten root canal sealers. The results were as follows; 1. Every vapors from disinfectants showed more or less cytotoxicity. Of the three disinfectats, formocresol appeared to be the highest cytotoxic effect and camphorated phenol was the lowest. 2. Root canal sealers tested in tbis study showed cytotoxicity at every stage of time intervals. 3. The highest cytotoxic effect was freshly mixed $N_2$ meaical and $N_2$ also revealed the highest cytotoxic effect after 4 or 24 hours among these materials. Vitapex was found the lowest cytotoxic effect at all experimental stage. 4. Root canal sealers except N2 and Mynol showed cytotoxic effect were decreased cytotoxicity according to the time elapsed.
In order to solve the shortage of natural Tripterygium wilfordii Hook. f. plant resource for the production of the important secondary metabolites triptolide and wilforine, hairy roots were induced from its root calli by Agrobacterium rhizogenes. Induced hairy roots not only could be maintained and grown well in hormone-free half-strength Murashige and Skoog medium but also could produce sufficient amounts of both triptolide and wilforine. Although hairy roots produced approximately 15% less triptolide than adventitious roots and 10% less wilforine than naturally grown roots, they could grow fast and could be a suitable system for producing both secondary metabolites compared with other tissues. Addition of $50{\mu}M$ methyl jasmonate (MeJA) could slightly affect hairy root growth, but dramatically stimulated the production of both triptolide and wilforine, whereas $50{\mu}M$ salicylic acid had no apparent effect on hairy root growth with slightly stimulatory effects on the production of both secondary metabolites. Addition of precursor nicotinic acid, isoleucine, or aspartic acid at the concentration of $500{\mu}M$ had varying effects on hairy root growth, but none of them had stimulatory effects on triptolide production, and only the former two had slightly beneficial effects on wilforine production. The majority of triptolide produced was secreted into the medium, whereas most of the produced wilforine was retained inside of hairy roots. Our studies provide a promising way to produce triptolide and wilforine in T. wilfordii hairy root cultures combined with MeJA treatment.
The potency of adventitious root initiation was investigated in relation with germination days and ike end of culture days healed with root induction medium on the initiation of adventitious roots from explants of soybean (Glycine max L.) cotyledon. Also, the changes in the pattern of protein profiles related with adventitious mot initiation have been examined by two-dimensional polyauyl-amide gel elecoophoresis during the germination and the initiation of adventitious roots. The potency of adventitious root initiation from germinated cotyledons was high after 4 days, and adventitious roots were initiated from after 4 days and very high after 6 days healed with mot induction medium There was a reproducible quantitative change in 34 specific protein spots during germination and adventitious root initiation. A necessary basic protein for adventitious root initiation with rotative molecular weight of 27 kD was induced during the germination. And three basic protein groups with relative molecular weight 22 kD, 23 kD and 33 kD, and two acidic protein groups with relative molecular weight 27kD and 29 kD were induced during the initiation of adventitious roots.
Panax ginseng C.A. Meyer is a well-known Korean traditional medicine. Until now, even though major research of ginseng has been focused on the pharmacological effect, clinical application and chemical analysis of extracted secondary metabolite for several years, the physiology and gene functions of ginseng were not well known. In this research, we have developed the protein extraction methods of ginseng root and hairy root for proteome analysis in order to elucidate the gene(s) function of ginseng. Using the liquid nitrogen (equation omitted) TCA method as protein extraction method, about 660 protein spots were detected on the 2-DE gel of hairy root. Additionally, comparative analysis result of 2-DEs of ginseng root (equation omitted) hairy root suggested that proteomes of same organism could be changeable according to the culture condition, growth stages and other stimulus.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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